一种HHT-109原料中化合物I含量的测定分析方法技术

本发明专利技术公开了一种HHT

【技术实现步骤摘要】
一种HHT
‑
109原料中化合物I含量的测定分析方法


[0001]本专利技术涉及用高效液相色谱
‑
质谱联用仪直接测定出HHT
‑
109原料中3
‑
N
‑
叔丁氧羰基
‑6‑
氧杂
‑3‑
氮杂二环[3.1.0]己烷(以下简称化合物I)的含量。此方法能较好的控制原料药的原料中痕量化合物I含量，为患者的健康安全用药提供保障，属于医药

技术背景
[0002]HHT
‑
109原料，化学名(3R,4R)
‑3‑
氨基
‑4‑
乙基吡咯烷
‑1‑
羧酸叔丁酯L
‑
酒石酸盐，是一种新药的关键起始原料，其结构式如下：
[0003][0004]HHT
‑
109原料中含有反应残留的化合物I，其结构式如下：
[0005][0006]准确定量地测定HHT
‑
109原料中痕量的化合物I含量极具挑战性。很难采用气相、液相色谱等对其进行痕量直接测定。
[0007]目前，只有测定HHT
‑
109原料中常量化合物I含量的方法采用经典的色谱法,其专一性、灵敏度、方法精密度和重复性都存在很大的缺陷，不能提供可靠的痕量分析结果。为了克服原方法的缺陷，本专利技术采用高效液相色谱
‑
质谱联用仪直接测定HHT
‑
109原料中化合物I的含量。该分析方法具有操作简单、专一性好、灵敏极高、重现性好等特点。

技术实现思路

[0008]如上所述，直接准确定量测定痕量化合物I存在各种缺陷。然而,利用化合物I具有一定稳定性和非常适合反相液相色谱分离的特征，以及在质谱检测器中很容易离子化并具有稳定的适合定量分析的分子结构的特点，可以采用高效液相色谱
‑
质谱联用仪直接测定。除此之外,化合物I在质谱检测器有灵敏的吸收这一特征使本方法的灵敏度和专一性大大提高。
[0009]通过试验发现HHT
‑
109原料在二甲亚砜中有非常好的溶解性。本专利技术将用二甲亚砜作为稀释剂。
[0010]本专利技术涉及一种HHT
‑
109原料中化合物I含量的测定分析方法，该方法为直接用高效液相色谱
‑
质谱联用仪测定HHT
‑
109原料中化合物I的含量。
[0011]上述样品配制中用二甲亚砜作为稀释液。
[0012]上述采用高效液相色谱
‑
质谱联用仪，正离子选择离子模式。
[0013]该方法包括以下几个步骤：
[0014](1)取HHT
‑
109原料粉末，以二甲亚砜作为稀释液制备得到样品溶液；
[0015](2)采用五氟苯基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为0.05％
‑
0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液和乙腈，进行梯度洗脱。
[0016](3)设置流动相流速为0.3
‑
1.2mL/min，柱温控制在30℃
‑
50℃之间。
[0017](4)取步骤(1)的样品溶液10μL，进样，记录质谱总离子流图。
[0018](5)采用质谱检测器，离子模式选择正离子，取(1)的样品溶液进样，记录化合物I质谱离子流图。
[0019]本专利技术采用的技术方案如下：
[0020]样品前处理：
[0021]稀释液：采用色谱级的二甲亚砜。
[0022]化合物I标准溶液：用稀释液精密配制50.0ng/mL的化合物I溶液。
[0023]样品溶液：精密称取50mg样品于10mL的容量瓶中，用稀释液溶解并定容至刻度，进样。
[0024]本专利技术使用色谱柱为：五氟苯基硅烷键合硅胶色谱柱。流速0.3
‑
1.2mL/min。柱温30℃
‑
50℃。流动相A：0.05％
‑
0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液，流动相B：乙腈。梯度如下：
[0025]时间(min)流动相A(％V/V)流动相B(％V/V)0901015901015.15952059520.19010309010
[0026]质谱检测器：正离子模式，[M
‑
56+H]+
:130
附图说明：
[0027]附图1：根据本专利技术实施例1得到的化合物I质谱棒图；
[0028]附图2：根据本专利技术实施例1得到的化合物I标准品质谱总离子流图；
[0029]附图3：根据本专利技术实施例2得到的HHT
‑
109原料样品质谱总离子流图；
[0030]附图4：根据本专利技术实施例3得到的HHT
‑
109原料样品加样回收率质谱总离子流图。
具体实施方式
[0031]为了更好的理解本专利技术的技术方案，下面结合本专利技术的具体实施例作进一步说明，但其不限制于本专利技术。
[0032]实施例1
[0033]仪器与条件：
[0034]高效液相色谱质谱联用仪：Agilent 1260infinity，MS检测器。
[0035]色谱柱:Waters,CSH
TM Fluoro
‑
Phenyl,3.5um，150*4.6mm
[0036]流动相A：0.1％三氟乙酸水溶液
[0037]流动相B：乙腈
[0038]梯度如下：
[0039]时间(min)流动相A(％V/V)流动相B(％V/V)0901015901015.15952059520.19010309010
[0040]柱温：40℃。
[0041]流速：0.6mL/min
[0042]选择正离子：130
[0043]进样体积：10μL。
[0044]实验步骤：
[0045]1)流动相A配制：精密量取1.0mL三氟乙酸溶于1000mL水中，混匀。
[0046]2)稀释液：二甲亚砜
[0047]3)标准溶液：精密称取约25mg化合物I于50mL容量瓶中，加稀释液溶解定容，摇匀，精密量取1.0mL置于另一100mL容量瓶中，加稀释液定容，摇匀，再精密量取1.0mL置于另一100mL容量瓶中，摇匀，即得标准溶液，进样，记录质谱棒图，见附图1。记录化合物I质谱总离子流图，见附图2。
[0048]实施例2
[0049]仪器与条件：
[0050]高效液相色谱质谱联用仪：Agilent 1260infinity，MS检测器。
[0051]色谱柱:Waters,CSH
TM Fluoro
‑
Phenyl,3.5um，150*4.6mm
[0052]流动相A：0.1％三氟乙酸水溶液
[0053]流动相B：乙腈
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HHT
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109原料中疑似基因毒性杂质3
‑
N
‑
叔丁氧羰基
‑6‑
氧杂
‑3‑
氮杂二环[3.1.0]己烷(以下简称化合物I)含量的测定分析方法，其特征在于直接用高效液相色谱
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质谱联用仪测定HHT
‑
109原料中痕量的化合物I的含量。2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于采用高效液相色谱
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质谱联用仪，离子模式选择正离子。3.根据权利要求1所述，...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱暮霜，王菲，邱学艳，胡素招，安建国，顾虹，
申请(专利权)人：上海科胜药物研发有限公司，
类型：发明
国别省市：