类固醇代谢物在制备卵母细胞质量检测试剂中的用途制造技术

本发明专利技术公开了类固醇代谢物在制备卵母细胞质量检测试剂中的用途，所述类固醇代谢物选自下组成员的四种以上：抗缪勒管激素、黄体生成素、卵泡刺激素、催乳素、人绒毛膜促性腺激素、褪黑素、脱氢表雄酮、雄烯二酮、睾酮、双氢睾酮、孕烯醇酮、脱氧皮质酮、孕酮、17

【技术实现步骤摘要】
类固醇代谢物在制备卵母细胞质量检测试剂中的用途


[0001]本专利技术属于生殖辅助诊断工具领域，具体涉及类固醇代谢物在卵母细胞质量检测试剂中的用途，还涉及一种检测卵母细胞质量的试剂盒。

技术介绍

[0002]通过体外受精(in vitro fertilization，IVF)的辅助生殖技术(assisted reproductive technology，ART)已经成为不孕症患者生育孩子的方式，然而在体外受精中，近80％的胚胎着床失败，为提高成功率，各生殖中心会进行多胚胎移植，由此多胎妊娠随之增加，而多胎妊娠出生的新生儿早产、死产、低出生体重、出生缺陷及母亲高血压等并发症均比自然受孕高。因此，准确预测卵母细胞的发育潜能，挑选出优质卵母细胞进行IVF，进而选出单个胚胎进行移植对提高IVF妊娠率、降低流产率、减少胚胎发育缺陷、孕育健康子代非常重要。
[0003]评价卵母细胞质量的方法和标准主要有多种，目前形态学方法是评估卵母细胞发育潜能最常用的方法，主要采取卵丘卵母细胞复合体(cumulus
‑
oocyte complexes，COCs)形态、第一极体形态、卵周隙大小、胞质形态、纺锤体形态学等判断卵母细胞质量。
[0004]已经有越来越多的研究报道了卵泡液(Follicular fluid，FF)中物质成分与卵母细胞质量优劣之间的关系。卵泡液由卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞分泌和卵泡膜血管渗出液组成，为卵泡发育和卵母细胞成熟提供了重要的微环境，是卵母细胞与周围细胞之间双向通讯的媒介。已有研究发现，卵泡液中存在激素、酶、活性氧等物质，这些物质和卵泡发育潜在相关。卵泡成熟是高度依赖细胞和器官之间交流的复杂过程，卵泡液中携带的物质，传递卵母细胞与卵泡周围卵丘和颗粒细胞之间的相互通讯，包含蛋白质、脂质和RNA等丰富的遗传信息。
[0005]专利文献CN20181141404.3公开了一种分析卵泡液代谢物与卵母细胞质量之间关系的方法，所述方法包括比较卵巢储备功能低下受试者与健康受试者的卵泡液代谢物的组成，通过代谢组学分析，筛选特征生物标志物，明确卵泡液代谢标志物组与卵母细胞质量间关系，建立了更加客观的、无创的卵母细胞质量评估方法。其中代谢标志物组包括反式咖啡酰酒石酸、β
‑
丙氨酸、牛磺酸、十六碳烯、油酸、焦磷酸、N
‑
乙酰
‑
D
‑
色氨酸、亚牛磺酸、哌啶酸、尿素和肾上腺素。CN20181141193.0公开了一种用于评价卵母细胞质量的组合物及试剂盒，提供了一种包括N
‑
乙酰
‑
D
‑
色氨酸和亚牛磺酸的组合物以及一种卵母细胞质量评价试剂盒，所述组合物用作卵母细胞质量评价系统中的标准品，通过比较卵泡液中N
‑
乙酰
‑
D
‑
色氨酸、亚牛磺酸与所述组合物中相应组分的含量来评价卵母细胞的质量。CN202110172018.X公开了一种人卵母细胞质量评价的方法，通过对卵泡液蛋白质成分的分析，获取差异的蛋白质表达情况，再通过酶联免疫实验，以CD5L作为人卵母细胞发育质量与发育潜能的评价蛋白质。

技术实现思路

[0006]专利技术人对于卵泡液中类固醇激素代谢物质成分进行了深入调研，发现类固醇激素代谢物含量与卵母细胞质量优劣之间存在内在的关联性。类固醇激素代谢是一个复杂的调节过程，其在调节卵泡发育、卵母细胞形成方面具有明确的作用，在进行类固醇代谢物检测时，需要系统地观察代谢途径中的中间产物，以确定其中代谢的异常情况。常规方法仅通过免疫学方法对代谢途径的最终产物进行定量，并不能对体液样本的类固醇代谢情况作出科学的判断。同时，因其具有相同的环戊烷多氢菲结构，常规免疫检测方法存在一定的局限性：检测低分子量化合物的动态线性范围较窄、易出现假阳性等，受限于交叉反应，难以区分诸多结构相类似的激素分子。采用液相色谱质谱法可以很好解决这些问题，质谱具有单次分析实现多个化合物检测的能力，可获得丰富的化合物结构信息、灵敏度高、动态线性范围宽和方法可拓展性强等优势，能以准确的检测结果助力精准诊疗。
[0007]我们采用卵泡液样本，在抗缪勒管激素、黄体生成素、卵泡刺激素、催乳素和人绒毛膜促性腺激素检测的基础上，基于LC
‑
MS/MS技术，同时对包括褪黑素、脱氢表雄酮、雄烯二酮、睾酮、双氢睾酮、孕烯醇酮、脱氧皮质酮、孕酮、17
‑
羟孕酮、皮质酮、21
‑
脱氧皮质醇、11
‑
脱氧皮质醇、可的松、氢化可的松、地塞米松、雌酮、雌二醇、雌三醇、17
‑
羟基孕烯醇酮和醛固酮这些类固醇代谢物进行了系统地检测。比较不同发育状态的卵母细胞卵泡液中类固醇代谢水平的变化，探索卵母细胞成熟的全新标志物。
[0008]我们研究了卵母细胞卵泡液中类固醇代谢物浓度水平与临床确认的卵母细胞质量之间的关系，发现一些规律，据此开发出可用于对卵母细胞质量评判的模型，以此可以作为辅助生殖技术的辅助诊断工具。具体而言，本专利技术包括如下技术方案。
[0009]类固醇代谢物在制备卵母细胞质量检测试剂中的用途，其中所述类固醇代谢物选自下组成员的四种以上、优选五种以上、更优选六种以上：抗缪勒管激素、黄体生成素、卵泡刺激素、催乳素、人绒毛膜促性腺激素、褪黑素、脱氢表雄酮、雄烯二酮、睾酮、双氢睾酮、孕烯醇酮、脱氧皮质酮、孕酮、17
‑
羟孕酮、皮质酮、21
‑
脱氧皮质醇、11
‑
脱氧皮质醇、可的松、氢化可的松、地塞米松、雌酮、雌二醇、雌三醇、17
‑
羟基孕烯醇酮和醛固酮。
[0010]上述类固醇代谢物是卵母细胞卵泡液中检测的类固醇代谢物。
[0011]上述卵母细胞是未受精的卵母细胞。
[0012]优选地，上述类固醇代谢物包括下组成员：黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、17
‑
羟孕酮(17
‑
OHP或17OHP)、睾酮(T，Testosterone)、可的松(cortisone)和双氢睾酮(DHT)。
[0013]在一种实施方式中，上述试剂是试剂盒，其包括检测黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、17
‑
羟孕酮(17
‑
OHP)、睾酮(T，Testosterone)、可的松(cortisone)和双氢睾酮(DHT)浓度所需的内标标准品。
[0014]上述黄体生成素、卵泡刺激素、17
‑
羟孕酮、睾酮、可的松和双氢睾酮的浓度可以是通过高效液相色谱
‑
串联质谱(LC
‑
MS/MS)技术和电化学发光法测定的浓度。
[0015]专利技术的另一方面提供了一种卵母细胞质量检测试剂盒，其包括上述用于检测黄体生成素、卵泡刺激素、17
‑
羟孕酮、睾酮、可的松和双氢睾酮浓度所需的内本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.类固醇代谢物在制备卵母细胞质量检测试剂中的用途，其中所述类固醇代谢物选自下组成员的四种以上：抗缪勒管激素、黄体生成素、卵泡刺激素、催乳素、人绒毛膜促性腺激素、褪黑素、脱氢表雄酮、雄烯二酮、睾酮、双氢睾酮、孕烯醇酮、脱氧皮质酮、孕酮、17
‑
羟孕酮、皮质酮、21
‑
脱氧皮质醇、11
‑
脱氧皮质醇、可的松、氢化可的松、地塞米松、雌酮、雌二醇、雌三醇、17
‑
羟基孕烯醇酮和醛固酮。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述类固醇代谢物是卵母细胞卵泡液中检测的类固醇代谢物。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述卵母细胞是受精的卵母细胞或者未受精的卵母细胞。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述类固醇代谢物包括下组成员：黄体生成素、卵泡刺激素、17
‑
羟孕酮、睾酮、可的松和双氢睾酮。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述试剂是试剂盒，其包括检测黄体生成素、卵泡刺激素、17
‑
羟孕酮、睾酮、可的松和双氢睾酮浓度所需的内标标准品。6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述黄体生成素、卵泡刺激素、17
‑
羟孕酮、睾酮、可的松和双氢睾酮的浓度通过高效液相色谱
‑
串联质谱技术和电化学发光法测定。7.一种卵母细胞质量检测试剂盒，其特征在于，包括根据权利要求5中所述用于检测黄体生成素、卵泡刺激素、17
‑
羟孕酮、睾酮、可的松和双氢睾酮浓度所需的内标标准品，所检测的黄体生成素的浓度单位是mIU...

【专利技术属性】
技术研发人员：郁俐，郭玮，王蓓丽，潘柏申，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：