一种采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法技术

本发明专利技术公开了一种采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法，包括：选取垂柳扦插苗的幼嫩茎段或带腋芽的非木质化垂柳幼嫩枝条，作为垂柳茎段外植体；垂柳扦插苗的幼嫩茎段或带腋芽的非木质化垂柳幼嫩枝条进行自来水冲洗30min；将冲洗后的垂柳茎段外植体转移至无菌瓶，并进行消毒数次；采用腋芽增殖诱导培养基进行垂柳茎段外植体增殖诱导，培育25～35天，得到带有增殖丛生不定芽的茎段；将带有增殖丛生不定芽的茎段放置在无菌的滤纸上，并将增殖丛生不定芽的茎段上的丛生芽切除，得到不定芽段；并将丛生芽分开成单株；选择生长健壮的不定芽段转接入生根培养基中，诱导生根；最终得到垂柳无菌苗。终得到垂柳无菌苗。

【技术实现步骤摘要】
一种采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法


[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，尤其是一种采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法。

技术介绍

[0002]柳属(Salix)植物属于被子植物门杨柳科(Salicaceae)，全世界约520多种，主产北半球温带地区，寒带次之。我国是柳属植物的重要分布区，各省区均产。柳属植物生长迅速、易于营养繁殖、根系对水分和土壤耐受范围广、抗逆性强、生物量大，其是极具观赏、经济与生态价值的树种。垂柳(SalixbabylonicaL.)为高大落叶乔木，生长迅速、枝条细长、分布广泛、生命力强，是极受欢迎的园林绿化树种，也是固堤护岸的重要树种。
[0003]植物组织培养是一项基于植物细胞全能性理论发展起来的无性繁殖新技术。植物组织培养具有遗传性一致、培养条件可控性强、可周年生产、繁殖效率高及管理方便等诸多优点。目前，现有现有技术中通过植物组织培养得到完整植株包括两种途径：一是利用带腋芽的茎段或叶片等离体器官直接分化培养获得不定芽，进而获得完整植株；二是通过由外植体脱分化形成愈伤组织，再由愈伤组织再分化形成不定芽并获得完整植株。由于腋芽处于萌动阶段，通过诱导腋芽萌发获得完整植株较其他外植体培养材料更容易，且所需时间更短。基于此，保留腋芽的茎段为不定芽诱导的最佳材料。
[0004]柳树繁育技术主要依赖于种子繁育和扦插繁育。其中，柳树种子细小、存活时间短，因此柳树种子繁育技术成活率低，且柳树多为杂合体，遗传性状不稳定，故种子繁育不易保留亲本的优良性状。现阶段柳树繁育主要依赖于扦插繁育，扦插时间多为春秋季节，春季在3
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4月份，秋季在9月份左右，大多数柳树都具有较高的扦插成活率。然而，柳树扦插繁育不能实现种苗的工厂化、规模化和商品化，且受扦插时间和枝条数量受限制。柳树组织培养可以缩短繁殖周期，保留亲本的优良性状、快速繁殖出根系发达的无菌苗，且无菌苗的移栽不受季节的限制，有效解决了种子繁育与扦插繁育存在的问题。目前多种柳树通过外植体脱分化形成愈伤组织的组培体系已建立，但由愈伤组织再分化形成不定芽始终是柳树再生体系建立的重要难题。
[0005]因此，急需要提出一种工艺简单、培养周期短的采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法。

技术实现思路

[0006]针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法，本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]一种采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法，其包括以下步骤：
[0008]垂柳茎段外植体选择：选取垂柳扦插苗的幼嫩茎段或带腋芽的非木质化垂柳幼嫩枝条，作为垂柳茎段外植体；
[0009]垂柳茎段外植体消毒：垂柳扦插苗的幼嫩茎段或带腋芽的非木质化垂柳幼嫩枝条
进行自来水冲洗30min；将冲洗后垂柳茎段外植体转移至无菌瓶，并进行消毒数次；
[0010]腋芽增殖诱导：采用腋芽增殖诱导培养基进行垂柳茎段外植体增殖诱导，培育25～35天，得到带有增殖丛生不定芽的茎段；
[0011]不定芽生根培养：将带有增殖丛生不定芽的茎段放置在无菌的滤纸上，并将增殖丛生不定芽的茎段上的丛生芽切除，得到不定芽段；并将丛生芽分开成单株；选择生长健壮的不定芽段转接入生根培养基中，诱导生根；最终得到垂柳无菌苗。
[0012]优选地，所述垂柳茎段外植体选择中，垂柳扦插苗的幼嫩茎段采用春季或秋季健壮母树的1
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2年生枝，插条长约15cm。
[0013]进一步地，所述垂柳扦插苗的幼嫩茎段的上切口距垂柳扦插苗的幼嫩茎段上的第一个腋芽1厘米，切口平滑；且所述垂柳扦插苗的幼嫩茎段的下切口斜切。
[0014]进一步地，采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法，还包括：将垂柳扦插苗的幼嫩茎段放入霍格兰营养液水培或扦插于营养土与蛭石混合基质，并添加生根粉促进插条生根。
[0015]进一步地，所述带腋芽的非木质化垂柳幼嫩枝条采用末端枝条；将末端枝条去除叶片，并静置于装有自来水的组培瓶中。
[0016]优选地，所述消毒过程包括：
[0017]采用75％乙醇消毒30s，无菌水清洗2
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3遍，去除外植体上残余乙醇；
[0018]采用1％次氯酸钠溶液，垂柳扦插苗的幼嫩茎段的顶端幼嫩茎段消毒5min，或采用1％次氯酸钠溶液对带腋芽的非木质化垂柳幼嫩枝条消毒8min；
[0019]采用无菌水清洗5
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6遍，去除外植体上残余次氯酸钠。
[0020]进一步地，所述腋芽增殖诱导培养基由以下重量份的物质组成：
[0021]4.74g/L的MS；
[0022]30g/L的蔗糖；
[0023]6.5g/L的琼脂；
[0024]0.5mg/L的6
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苄氨基嘌呤；
[0025]0.15mg/L的吲哚丁酸。
[0026]进一步地，所述生根培养基由以下重量份的物质组成：
[0027]2.37g/L的1/2MS；
[0028]20g/L的蔗糖；
[0029]6.5g/L的琼脂；
[0030]0.2mg/L的萘乙酸。
[0031]进一步地，还包括：将装有不定芽生根的无菌组培瓶放置在人工气候箱中培养20～25天；所述人工气候箱的光照强度为10000Lux，光照日均时长为14小时，温度为25℃，湿度为70％。
[0032]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0033](1)本专利技术提供的垂柳腋芽增殖扩繁培养方法仅需50天左右即可获得大量无菌苗，具有方法简便、重复性高、培养周期短、再生苗健壮的优点。本专利技术可解决垂柳扦插繁育中扦插时间与扦插条数量的限制，大量繁育无菌苗。获得的无菌苗可继续用于后续继代培养快速扩繁，或炼苗与移栽，也可为后续垂柳愈伤组织诱导、愈伤组织再分化诱导生成不定
芽及遗传转化技术提供无菌苗获得的理想实验体系。
[0034](2)本专利技术采用腋芽增殖诱导，其设置有MS、蔗糖、琼脂、6BA和IBA，其好处在于，可简单、快速地获得大量垂柳不定芽。
[0035](3)本专利技术巧妙地采用生根培养基进行诱导生根，其好处在于可快速使增殖诱导的垂柳不定芽完成生根，获得完整的垂柳无菌苗植株。
[0036]综上所述，本专利技术具有工艺简单、培养周期短、再生苗健壮等优点，在植物组织培养
具有很高的实用价值和推广价值。
附图说明
[0037]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需使用的附图作简单介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对保护范围的限定，对于本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0038]图1为本专利技术的垂柳腋芽增殖诱导快速扩繁获得垂柳无菌苗的过程。
具体实施方式
[0039]为使本申请的目的、技术方案和优点更为清楚，下面结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：垂柳茎段外植体选择：选取垂柳扦插苗的幼嫩茎段或带腋芽的非木质化垂柳幼嫩枝条，作为垂柳茎段外植体；垂柳茎段外植体消毒：垂柳扦插苗的幼嫩茎段或带腋芽的非木质化垂柳幼嫩枝条进行自来水冲洗30min；将冲洗后垂柳茎段外植体转移至无菌瓶，并进行消毒数次；腋芽增殖诱导：采用腋芽增殖诱导培养基进行垂柳茎段外植体增殖诱导，培育25～35天，得到带有增殖丛生不定芽的茎段；不定芽生根培养：将带有增殖丛生不定芽的茎段放置在无菌的滤纸上，并将增殖丛生不定芽的茎段上的丛生芽切除，得到不定芽段；并将丛生芽分开成单株；选择生长健壮的不定芽段转接入生根培养基中，诱导生根；最终得到垂柳无菌苗。2.根据权利要求1所述的一种采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法，其特征在于，所述垂柳茎段外植体选择中，垂柳扦插苗的幼嫩茎段采用春季或秋季健壮母树的1
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2年生枝，插条长约15cm。3.根据权利要求1或2所述的一种采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法，其特征在于，所述垂柳扦插苗的幼嫩茎段的上切口距垂柳扦插苗的幼嫩茎段上的第一个腋芽1厘米，切口平滑；且所述垂柳扦插苗的幼嫩茎段的下切口斜切。4.根据权利要求3所述的一种采用腋芽增殖快速扩繁获得垂柳无菌苗的方法，其特征在于，还包括：将垂柳扦插苗的幼嫩茎段放入霍格兰营养液水培或扦插于营养土与蛭石混合基质，并添加生根粉促进插条生根。5.根据权利要求1所述的一种采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：张胜，夏林超，杨乐，陈遥，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：