一株能够促进蜜环菌生长的绿芽孢杆菌YSL-1-5及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株能够促进蜜环菌生长的绿芽孢杆菌YSL

【技术实现步骤摘要】
一株能够促进蜜环菌生长的绿芽孢杆菌YSL
‑1‑
5及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，涉及一种绿芽孢杆菌菌株，该菌株可高效促进伴栽天麻生长的一种共生真菌高卢蜜环菌(Armillaria gallica)菌株的生长和产漆酶能力。

技术介绍

[0002]药用植物天麻(Gastrodia elata)，是一种全真菌异养型多年生腐生草本植物。天麻在整个生活史中无根、无绿叶，本身无吸收和制造营养的器官，成熟后仅有地上花茎和地下块茎。天麻在种子萌发期主要与萌发菌共生，发芽后的原球茎在后期的生长必须与侵入其内部的蜜环菌(Armillaria sp.)建立共生关系，依靠蜜环菌分解木材以及降解菌丝来为其提供营养，用于天麻块茎形成和有性生殖以完成其36个月的生命周期。
[0003]蜜环菌作为药用植物天麻块茎后期生长不可或缺的共生真菌，二者间存在着特殊的营养关系。蜜环菌在与天麻共生期间其菌索不但是侵入天麻的部分，而且也是提供天麻生长发育营养的主要来源。蜜环菌的优劣与否，不仅表现在自身菌索和菌丝的大小、数量、产分解木质素的漆酶能力及其生命力是否旺盛等方面，也与天麻的产量和质量息息相关。
[0004]蜜环菌菌种的生物学特性与天麻品质、产量呈正相关性，因此优良的蜜环菌菌种是影响天麻品质和产量的关键。近年来，由于人们对天麻的需求量增加，野生天麻供不应求，人工种植天麻面积在不断扩大。然而，市面上的蜜环菌工程菌包在用于种植天麻的过程中，经多代无性繁殖后，会发生退化现象，导致天麻产量和质量严重降低。目前大多数麻农通过从山林里寻找野生蜜环菌来作为解决办法，然而，野生蜜环菌菌种资源有限，而且山林里采集难度大，往往无法满足天麻种植的需求。
[0005]鉴于此，探索出一种可促进蜜环菌生长和提高其生物活性的第三者微生物—促生细菌，不仅可以满足麻农对优质蜜环菌的需求，也对种植出优质天麻具有重要的现实意义。
[0006]以前的研究指出了细菌与菌根真菌间存在着共生关系，例如固氮菌，但迄今为止，关于蜜环菌内是否存在内生细菌与其伴生以及其内生细菌是否会影响蜜环菌发挥作用尚未得到较为详细的描述。

技术实现思路

[0007]本专利技术解决了
技术介绍
中的问题，提供了一株能够促进蜜环菌生长的绿芽孢杆菌YSL
‑1‑
5及其应用。
[0008]本专利技术采用如下技术方案实现。
[0009]一株细菌，本专利技术所述的细菌为绿芽孢杆菌属(Viridibacillus sp.)YSL
‑1‑
5菌株，保藏登记号为：CCTCC No.M20221484；保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏地点：中国，武汉，武汉大学。保藏时间：2022年9月26日。
[0010]本专利技术菌株从伴栽天麻的蜜环菌菌索内分离得到。
[0011]本专利技术该菌株应用为将其与蜜环菌混合后做成菌包种植天麻，促进天麻生长。
[0012]本专利技术的菌株应用为提高蜜环菌生长速率和生物量。
[0013]本专利技术的菌株应用为促进蜜环菌产分解木材组织的胞外漆酶。
[0014]本专利技术的菌株应用为使用该菌株生产IAA。。
[0015]本专利技术的菌株应用方法为作为促生细菌与蜜环菌伴栽天麻。
[0016]本专利技术的菌株应用方法为作为生产优良蜜环菌菌包的辅助细菌。
[0017]本专利技术所述细菌的鉴定引物为：27F(5'
‑
AGAGTTTGATCCTGGC TCAG
‑
3')、1492R(5'
‑
TACGGTTACCTTGTTACG ACTT
‑
3')。
[0018]本专利技术的有益效果在于，本专利技术提供的一株能够促进蜜环菌生长的绿芽孢杆菌YSL
‑1‑
5可显著提高蜜环菌生长速率和生物量，促进蜜环菌产分解木材组织的胞外漆酶；将其与蜜环菌混合后种植天麻，促进天麻生长。
[0019]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术技术方案做进一步解释和说明。
附图说明
[0020]图1为不接种/接种菌株YSL
‑1‑
5单培养/共培养后蜜环菌生长状态结果图。(A)对照组，即不接种细菌在PDA上生长27d的蜜环菌；(B)实验组，即在PDA上生长7d后接种菌株YSL
‑1‑
5共培养20d的蜜环菌。
[0021]图2为接种菌株YSL
‑1‑
5共培养后蜜环菌菌株的菌体生物量(A)和蜜环菌漆酶酶活性(B)结果图。
[0022]图3为菌株形态观察图。(A)菌株YSL
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5在LA平板上的背面图；(B)菌株YSL
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5在LA平板上生长5天形成的单菌落。
具体实施方式
[0023]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施实例仅为了阐明本专利技术，本专利技术的保护范围并不局限于以下实施实例。
[0024]一株细菌，本专利技术所述的细菌为绿芽孢杆菌属(Viridibacillus sp.)YSL
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5菌株，保藏登记号为：CCTCC No.M20221484；保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏地点：中国，武汉，武汉大学。保藏时间：2022年9月26日。
[0025]本专利技术菌株从伴栽天麻的蜜环菌菌索内分离得到。
[0026]本专利技术该菌株应用为将其与蜜环菌混合后种植天麻，促进天麻生长。
[0027]本专利技术的菌株应用为提高蜜环菌生长速率和生物量。
[0028]本专利技术的菌株应用为促进蜜环菌产分解木材组织的胞外漆酶。
[0029]本专利技术的菌株应用为使用该菌株生产IAA。。
[0030]本专利技术的菌株应用方法为作为促生细菌与蜜环菌伴栽天麻。
[0031]本专利技术的菌株应用方法为作为生产优良蜜环菌菌包的辅助细菌。
[0032]本专利技术所述细菌的鉴定引物为：27F(5'
‑
AGAGTTTGATCCTGGC TCAG
‑
3')、1492R(5'
‑
TACGGTTACCTTGTTACG ACTT
‑
3')。
[0033]下述实施实例中的培养基及实验试剂如下：
[0034]LB液体培养基：用于细菌的活化培养和做共培养接种的发酵液：NaCl 10g，胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，蒸馏水1000mL。
[0035]LA固体培养基：用于细菌的分离纯化培养：NaCl 10g，胰蛋白胨10g，酵母提取物
5g，琼脂16g，蒸馏水1000mL。
[0036]PDA固体培养基：用于蜜环菌的培养：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂16g，蒸馏水1000mL。
[0037]pH＝4.5HAc
‑
NaAc缓冲液：18.0g NaAc，9.8mL HAc，蒸馏水定容至1000mL，用pH计校准其pH值。
[0038本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株细菌，其特征在于，所述的细菌为绿芽孢杆菌属(Viridibacillus sp.)YSL
‑1‑
5菌株，保藏登记号为：CCTCC No.M20221484；保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏地点：中国，武汉，武汉大学。2.根据权利要求1所述细菌的应用，其特征在于，该菌株应用为将其与蜜环菌混合后做成菌包种植天麻，促进天麻生长。3.根据权利要求1所述细菌的应用，其特征在于，该菌株应用为提高蜜环菌生长速率和生物量。4.根据权利要求3所述细菌的应用，其特征在于，该菌株应用为促进蜜环菌产分解木材组织的胞外漆酶。5.根据权利要求3所述细菌的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：张汉波，李玉，靳晓寒，李东，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：