一种帕罗西汀半抗原和人工抗原及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开一种帕罗西汀半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。以2

【技术实现步骤摘要】
一种帕罗西汀半抗原和人工抗原及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及帕罗西汀检测领域，尤其涉及一种帕罗西汀半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]帕罗西汀(Paroxetine)为5
‑
HT再摄取抑制剂类抗抑郁药(SSRIs)，能选择性抑制5
‑
羟色胺(5
‑
HT)的再摄取，提高神经突触间隙内5
‑
HT的浓度，从而产生抗抑郁作用。它只微弱地抑制去甲肾上腺素与多巴胺的再摄取。本药不与肾上腺素α1、α2或β受体发生作用，也不与多巴胺D2或组胺H1受体结合，不抑制单胺氧化酶。本药可广泛分布于各种组织和器官，仅1％出现在体循环中。蛋白结合率高达95％。药物经肝脏P450同工酶代谢。帕罗西汀大部分经肾随尿排出；约36％由粪便排出；也可经乳汁排泄。帕罗西汀是SSRI类里面最强再摄取剂，但是它也是唯一一个具有轻微抗胆碱作用的药物。
[0003]为药物滥用需要，医务人员可通过检测尿液中的帕罗西汀，以帮助诊断帕罗西汀依赖性和帕罗西汀的康复性。目前，常用到高效液相色谱法(HPLC)、液质联用技术(LC
‑
MS)方法等对帕罗西汀有关物质检测。该方法分离分析能力强，灵敏度高，结果可靠、精确，但结构复杂，对环境的温度、湿度要求高，维护成本高。质谱仪是高精密仪器，需要经过专门培训的技术员才可以操纵，且测试速度慢，因此不利于对药物滥用检测的广泛推广。因此，需要开发一种简便高效的帕罗西汀物质检测方法。

技术实现思路
r/>[0004]本专利技术的第一个目的是为了克服现有技术下使用HPLC、LC
‑
MS检测帕罗西汀对仪器及操作人员要求高，不易推广，其检测速度慢的问题，提供一种帕罗西汀人工半抗原，可特异性识别帕罗西汀。
[0005]一种帕罗西汀半抗原，其分子结构式如式(Ⅰ)所示，
[0006][0007]2‑
羟基帕罗西汀分子中没有活性基团可以连接载体蛋白，因此对其进行修饰，连上合适的间隔臂使其产生羧基或者氨基，以便于偶连载体蛋白。
[0008]本专利技术的第二个目的是提供一种帕罗西汀人工半抗原的制备方法，采用如下技术方案：
[0009]步骤(1)、将2
‑
羟基帕罗西汀溶于N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)，再加入三乙胺和二碳酸二叔丁酯，45
‑
50℃下加热回流，反应完全后将反应液冷却至常温，减压蒸干溶剂，得到油状物A；
[0010]步骤(2)、将油相物质A溶于吡啶中，然后加入戊二酸酐和4
‑
二甲氨基吡啶(DMAP)，98
‑
100℃下加热回流，反应完全后将反应液冷却至常温，减压蒸干溶剂，得到油状残渣；将油状残渣加入二氯甲烷，分别用纯化水和饱和NaCl洗涤，收集二氯甲烷相，干燥，过滤，减压蒸干得油状物B；
[0011]步骤(3)、将油状物B溶于HCl与1，4
‑
二氧六环的混合溶液中，98
‑
100℃下加热搅拌回流，减压蒸干溶剂得油状物C；
[0012]步骤(4)、将油状物C溶于苯，置于冰水浴中，加入三氟乙酸酐，常温搅拌一段时间后置于78
‑
81℃下加热搅拌回流，反应完全后将反应液转干分离得油状物D，即帕罗西汀人工半抗原。
[0013]作为优选，步骤(1)中，2
‑
羟基帕罗西汀与三乙胺和二碳酸二叔丁酯的摩尔比为1：2：2；
[0014]作为优选，步骤(1)中，反应温度为45℃，反应时间为14.5
‑
16h，更为优选为15h；
[0015]作为优选，步骤(2)中，油状物A、戊二酸酐和4
‑
二甲氨基吡啶(DMAP)的摩尔比为(10
‑
12)：(4
‑
5.5)：(1
‑
2)，更为优选为10：5：1；
[0016]作为优选，步骤(2)中，反应温度为100℃，反应时间为16
‑
19h，更为优选为18h；
[0017]作为优选，步骤(3)中，每mL混合溶液中加入7.5nmol油状物B；
[0018]作为优选，步骤(3)中，加热温度为100℃，搅拌回流反应的时间为5
‑
6.5h，更为优选为6h；
[0019]作为优选，步骤(3)中，混合溶液中HCl的浓度为2mol/L；
[0020]作为优选，步骤(4)中，每mL苯中加入0.056mmol油状物C；
[0021]作为优选，步骤(4)中，搅拌时间为0.8
‑
1.2h，更为优选为1h；
[0022]作为优选，步骤(4)中，油状物C与三氟乙酸酐的摩尔比为(1
‑
1.3)：(1.8
‑
2.4)，更为优选为1：2；
[0023]作为优选，步骤(4)中，加热温度为80℃，搅拌回流反应的时间2.6
‑
3.0h，更为优选为3h。
[0024]在帕罗西汀半抗原的合成反应中可以使用薄层色谱法监测棕色油状物的生成情况以判断反应是否完全，使用的层析液中各组分的体积比为95％乙醇：二氯甲烷：1，4
‑
二氧六环：氨水＝8：10：1：1，产物Rf＝0.4
‑
0.5。
[0025]本专利技术的第三个目的是提供一种帕罗西汀人工抗原，由式(Ⅰ)半抗原与载体蛋白偶联得到；其拥有帕罗西汀的分子结构特征，可被动物免疫活性细胞所识别，产生可特异性结合帕罗西汀的抗体。其分子结构式如式(Ⅱ)所示：
[0026][0027]其中R表示载体蛋白；
[0028]作为优选，所述的载体蛋白为牛血清白蛋白、牛γ球蛋白、牛甲状腺球蛋白、钥孔血蓝蛋白和鸡卵清白蛋白中的一种。
[0029]本专利技术的第四个目的是提供一种帕罗西汀人工抗原的制备方法，采用如下技术方案：
[0030]步骤(1)、将帕罗西汀人工半抗原溶于N,N
‑
二甲基甲酰胺DMF中，再加N
‑
羟基琥珀酰亚胺NHS和环己基碳酰二亚胺，常温搅拌反应15
‑
18小时，离心取上清液，得到A液；
[0031]步骤(2)、将载体蛋白溶于PBS缓冲液中作为B液，B液中载体蛋白浓度为4
‑
9mg/ml；
[0032]步骤(3)、搅拌条件下将A液滴加到B液中，在低温下静置过夜，得到人工抗原混合液；
[0033]步骤(4)、将步骤(3)所得人工抗原混合液在碱性透析液中透析多次，再转入PBS缓冲液中透析多次，透析结束后离心取上清液，即得到帕罗西汀人工抗原。
[0034]作为优选，步骤(1)中，所述帕罗西汀人工半抗原、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、环己基碳酰二亚胺的摩尔比为(1.3～1.4)：1.9：1.9；
[0035]作为优选，步骤(2)中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种帕罗西汀半抗原，其特征在于其分子结构式如式(Ⅰ)所示：2.一种权利要求1所述的帕罗西汀半抗原的制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：步骤(1)、将2
‑
羟基帕罗西汀溶于N,N
‑
二甲基甲酰胺，再加入三乙胺和二碳酸二叔丁酯，45～50℃下加热回流，反应完全后将反应液冷却至常温，减压蒸干溶剂，得到油状物A；步骤(2)、将油相物质A溶于吡啶中，然后加入戊二酸酐和4
‑
二甲氨基吡啶，98～100℃下加热回流，反应完全后将反应液冷却至常温，减压蒸干溶剂，得到油状残渣；将油状残渣加入二氯甲烷，分别用纯化水和饱和NaCl洗涤，收集二氯甲烷相，干燥，过滤，减压蒸干得油状物B；步骤(3)、将油状物B溶于HCl与1，4
‑
二氧六环的混合溶液中，98～100℃下加热搅拌回流，减压蒸干溶剂得油状物C；步骤(4)、将油状物C溶于苯，置于冰水浴中，加入三氟乙酸酐，常温搅拌一段时间后置于78～81℃下加热搅拌回流，反应完全后将反应液转干分离得油状物D，即帕罗西汀人工半抗原。3.根据权利要求2所述方法，其特征在于步骤(1)中，2
‑
羟基帕罗西汀与三乙胺和二碳酸二叔丁酯的摩尔比为1：2：2；步骤(2)中，油状物A、戊二酸酐和4
‑
二甲氨基吡啶(DMAP)的摩尔比为(10～12)：(4～5.5)：(1～2)；步骤(4)中，油状物C与三氟乙酸酐的摩尔比为(1～1.3)：(1.8～2.4)。4.一种帕罗西汀人工抗原，其特征在于由权利要求1所述的帕罗西汀半...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海剑，王镇，刘成，邝莉娟，
申请(专利权)人：杭州奥泰生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：