一种水生植物水菜花叶片原生质体的制备方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种水菜花叶片原生质体的制备方法及试剂盒。本发明专利技术以水菜花叶片叶作为材料，通过调节酶解体系、洗涤体系和纯化方法，建立水菜花叶片原生质体制备体系。酶解液体系中1％纤维素酶、0.5％果胶酶、0.5％离析酶时的酶解效果好，MES、山梨醇和KCl复配可保证原生质体游离出来时外部介质与细胞本身的渗透势相同，维持原生质体的活力，采用26％蔗糖溶液能较好维持原生质体渗透压稳定；方法能够快速高效地解离出水菜花叶片组织的原生质体细胞，所分离得到的原生质体数量多，活性高，且背景纯净。该结果可以直接上机进行单细胞测序，为探究水菜花异形叶分子细胞生物学研究和发育的分子机制提供了重要基础。的分子机制提供了重要基础。的分子机制提供了重要基础。

【技术实现步骤摘要】
一种水生植物水菜花叶片原生质体的制备方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于植物分子细胞生物学
，具体涉及一种水生植物水菜花叶片原生质体的制备方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]水菜花(Ottelia cordata)是水鳖科水车前属的一年生或多年生水生草本植物，生于流水沟渠，具喜群居的习性。水菜花具有沉水叶和浮水叶两种异形叶，沉水叶通常为带形、披针形，浮水叶通常为长卵形。除形态差异，在细胞结构、光合能力等方面，两种形态的叶片也存在较大差异，研究在相同遗传背景下植株的相同组织是如何生长发育为不同表型以适应不同的环境具有重要的生态意义。
[0003]过去对植物生物学进行研究通常使用传统的测序技术，以整个组织为样本，无法揭示不同类型细胞之间表达的异质性，即使使用显微切割技术获得特定的组织部位，也可能存在其他组织部位的污染，且获得的细胞数量高度受限。为了在细胞水平确定特定基因的功能特征以及挖掘潜在的调控植物生命活动的关键因子，单细胞测序技术逐渐成为新一代的研究手段，通过将植物组织解离成单个细胞后进行测序，能够从单个细胞水平获取组学信息本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种水菜花叶片原生质体的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：S1、取水菜花沉水叶片或者浮水叶片，得水菜花叶片；所述水菜花叶片为水菜花植株新长出的第一片叶；S2、使用双面刀片，将水菜花叶片切成0.5mm～1mm的条状，完全浸润在酶解液中，黑暗条件下进行反应，得酶解初级产物；所述酶解液由去离子水和下述浓度的物质组成：S3、向步骤S2得到的酶解初级产物中加入W5溶液终止反应，低速离心，弃上清，得沉淀物；所述W5溶液由去离子水和下述浓度的物质组成：S4、向步骤S3得到的沉淀物中加入26％蔗糖溶液进行纯化处理，低速离心，收集漂浮于溶液界面的原生质体带；S5、将步骤S4获得的原生质体带加入清洗液重悬，得到用于单细胞测序的水菜花原生质体。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述酶解液的制备方法为将纤维素酶、离析酶、果胶酶、MES、山梨醇、KCl混合，55℃水浴10min，得到混合液；混合液降温至室温后，将混合液与CaCl2和BSA混合，即得。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，酶解...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨星宇，张思思，梁玉婷，刘淑超，李娜，章晓琴，李苗，史红文，于静亚，康凯丽，曾宪沂，王宁迪，
申请(专利权)人：武汉市园林科学研究院，
类型：发明
国别省市：