重组I型胶原蛋白酶及其突变体的制备方法和应用技术

本申请公开了一种重组I型胶原蛋白酶及其突变体的制备方法和应用。本申请中提供了I型胶原蛋白酶突变体，其具有较好的耐碱性，可适用于酶解法提取鱼皮废料；本申请还提供了基于原核表达体系的重组I型胶原蛋白酶及其突变体的表达方法，该方法可溶蛋白表达量提高，并且产物活性高，适宜工业化放大生产。适宜工业化放大生产。适宜工业化放大生产。

【技术实现步骤摘要】
重组I型胶原蛋白酶及其突变体的制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及重组I型胶原蛋白酶及其突变体的制备方法和应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白酶(Collagenase)是指能在适宜的pH和温度条件下特异性的水解天然胶原蛋白或明胶，而不损伤其他蛋白质和组织的酶类。其特异水解胶原蛋白的产物胶原三肽，相比大分子的胶原蛋白则在消化吸收、营养、功能特性等方面都会得到显著的提高。胶原蛋白酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、
Ⅴ
型以及肝细胞专用胶原蛋白酶，通常应根据所要分离消化的组织类型选择胶原蛋白酶类型。
[0003]胶原蛋白酶的一个重要的应用领域是用于降解鱼皮废料提取胶原多肽。我国水域面积广阔，水产品丰富，养殖业蓬勃发展的同时，也造成了各种副产品的浪费，例如鱼皮中含有丰富的胶原蛋白。以鱼皮等工业加工废弃物为原料，开发生产新型高活性的胶原多肽逐渐成为研究热点。胶原蛋白酶降解法制备胶原多肽不仅产率高，而且较为环保，因此成为最适宜推广的工艺之一。另外，胶原蛋白酶在医疗方面也具有极高的应用价值，它可以用于治疗腰椎间盘突本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种I型胶原蛋白酶突变体，其特征在于，所述I型胶原蛋白酶突变体的氨基酸序列选自以下任一种：(i)如SEQ ID NO.4所示序列的氨基酸序列；和(ii)与如SEQ ID NO.4所示序列的同源性大于95％的氨基酸序列。2.一种编码I型胶原蛋白酶的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：(i)如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示的多核苷酸；(ii)与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和(iii)与(i)或(ii)中所述的序列互补的多核苷酸。3.一种编码如权利要求1所述的I型胶原蛋白酶突变体的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：(i)如SEQ ID NO.5所示的多核苷酸；(ii)与如SEQ ID NO.5所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和(iii)与(i)或(ii)中所述的序列互补的多核苷酸。4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求2或3所述的多核苷酸。5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为大肠杆菌表达载体，优选为pET

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，朱伟伟，刘春奇，吴宇鹏，雷泳森，陈园园，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：