用于肝癌患者预后或肝癌病理分期的标志物制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及用于肝癌患者预后或肝癌病理分期的标志物。本发明专利技术提供用于肝癌患者预后或肝癌病理分期的标志物SOX9基因。一方面可通过深入研究鉴定SOX9在调控肝癌细胞干性与索拉非尼耐药的关系，为靶向该通路治疗肝癌的新途径提供科学依据。另一方面还可对索拉非尼耐药人群进行提示，在肝癌治疗或癌症治疗中起到个性化治疗、精准治疗的作用。用。用。

【技术实现步骤摘要】
用于肝癌患者预后或肝癌病理分期的标志物


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及用于肝癌患者预后或肝癌病理分期的标志物。

技术介绍

[0002]肝癌是最致命的癌症之一，是导致全球癌症死亡的第三大常见原因。根据世卫组织公布最新全球癌症数据显示；2020年肝癌新发病例为91万，死亡病例为83万，呈现明显上升趋势，严重危害人类健康。由于肝癌发病隐匿，普查或筛查工作推进不足，大多数患者确诊时己到晚期，目前靶向药物索拉非尼是晚期肝癌的首选药物，索拉非尼是一种口服多激酶抑制剂，可抑制肿瘤细胞增殖和血管生成，促进肿瘤细胞凋亡，2007年批准其作为治疗晚期HCC的首个靶向药物。然而，由于肝癌内部和个体之间具有高度异质性，相当数量的患者对索拉非尼治疗无应答，即使有应答的患者，产生治疗应答的往往最多4个月左右(中位PFS和TTP均为3.7个月)，随后就发生耐药，耐药后出现疾病进展。
[0003]因此，深入探讨索拉非尼耐药机制，对于提高肝癌患者预后，降低死亡率具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提供一种用于肝癌患者预后或肝癌病理分期的标志物及其用途，该标志物为SOX9基因，研究发现，一方面可通过深入研究鉴定SOX9在调控肝癌细胞干性与索拉非尼耐药的关系，为靶向该通路治疗肝癌的新途径提供科学依据。另一方面还可对索拉非尼耐药人群进行提示，在肝癌治疗或癌症治疗中起到个性化治疗、精准治疗的作用。
[0005]本专利技术第一方面提供一种用于肝癌患者预后或肝癌病理分期的标志物。根据本专利技术的实施方案，所述标志物包括SOX9基因。
[0006]专利技术人使用低浓度持续诱导的方式诱导人肝癌细胞系HepG2，最终获得了索拉非尼耐药的稳定肝癌细胞系。转录因子在细胞命运的调控中起到关键作用，通过转录组学测序研究发现，转录因子SOX9显著上调，变化最显著，据此，本专利技术提出SOX9为肝癌索拉非尼耐药的重要标志物。本专利技术提供的索拉非尼耐药标志物，采用该标志物可对索拉非尼耐药人群进行提示，促进肝癌精准治疗发展。
[0007]本专利技术第二方面提供检测SOX9基因表达量的试剂在制备试剂盒中的用途。根据本专利技术的实施方案，所述试剂盒用于肝癌患者预后。
[0008]根据本专利技术的实施方案，所述SOX9基因表达量上升是肝癌患者生存期下降的指示。
[0009]本专利技术第三方面提供检测SOX9基因表达量的试剂在制备试剂盒中的用途。根据本专利技术的实施方案，所述试剂盒用于进行肝癌病理分期。
[0010]根据本专利技术的实施方案，所述SOX9基因表达量上升，是肝癌病理分期增加的指示。
[0011]本专利技术第四方面提供一种用于肝癌患者预后或肝癌病理分期的试剂盒。根据本专利技术的实施方案，所述试剂盒中含有用于检测SOX9基因表达量的试剂。
[0012]本专利技术第五方面提供SOX9基因表达抑制剂在制备索拉非尼耐药性逆转剂中的用途。
[0013]本专利技术第六方面提供SOX9基因表达抑制剂在抑制索拉非尼耐药肝癌细胞增殖以及集落形成中的用途。
[0014]本专利技术第七方面提供一种抑制索拉非尼耐药肝癌细胞增殖、集落形成的方法。根据本专利技术的实施方案，所述方法包括：
[0015]降低索拉非尼耐药肝癌细胞中SOX9基因表达，以便抑制索拉非尼耐药肝癌细胞增殖、集落形成。
[0016]本专利技术第八方面提供一种增加索拉非尼耐药肝癌细胞对索拉非尼敏感性的方法。根据本专利技术的实施方案，所述方法包括：
[0017]降低索拉非尼耐药肝癌细胞中SOX9基因表达。
[0018]专利技术人通过全球开放的肿瘤TCGA数据库、HPA数据库并结合分析文献数据库和体外细胞模型研究发现：含SOX9在肝癌组织中呈高表达，并与肝癌不良预后相关；经进一步免疫荧光实验显示肝癌细胞发生耐药之后，SOX9表达量显著增强，定位于细胞核。当使用shRNA敲低SOX9之后，提升了索拉非尼耐药肝癌细胞对索拉非尼的敏感性。
[0019]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0020]本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
[0021]图1显示了HepG2 SR细胞筛选过程及形态变化；A图显示了HepG2 P细胞经过多轮索拉非尼诱导，获得HepG2 SR细胞过程中索拉非尼浓度变化及时间轴；B图显示了HepG2P细胞和HepG2 SR细胞的形态差异；
[0022]图2显示了HepG2 P及HepG2 SR细胞增殖实验IC
50
检测结果；
[0023]图3显示了HepG2 P及HepG2 SR细胞集落形成实验结果，A图显示了HepG2 P及HepG2 SR细胞应用药物处理48小时后集落形成结果，B图显示了Image J软件进行集落形成定量比较，***P＜0.001，****P＜0.0001；
[0024]图4显示了采用流式细胞术检测索拉非尼对HepG2 P及HepG2 SR细胞凋亡的影响，其中，A图显示了索拉非尼处理HepG2 P及HepG2 SR细胞，48小时后采用流式细胞术检测的细胞凋亡情况，B图显示了不同组别细胞凋亡统计分析结果，**P＜0.01；
[0025]图5显示了RT
‑
qPCR检测HepG2 P(肝癌原始细胞系HepG2)及HepG2 SR细胞SOX9mRNA水平；
[0026]图6显示了Western blot检测HepG2 P及HepG2 SR细胞SOX9蛋白水平，A图为蛋白免疫印迹结果；B图为蛋白免疫印迹定量分析，****P＜0.0001；
[0027]图7显示了免疫荧光检测HepG2 P及HepG2 SR细胞SOX9蛋白水平及定位；
[0028]图8显示了载体GV493载体图谱；
[0029]图9显示了应用慢病毒载体感染HepG2 SR细胞使SOX9基因表达沉默，A图为病毒感染48小时后荧光图；B图为Western blot检测SOX9蛋白水平；
[0030]图10显示了MTT检测HepG2 SR细胞SOX9表达降低后对索拉非尼的敏感性，A图为基于S型曲线分析不同细胞的IC
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值；B图为高浓度索拉非尼作用下细胞活性，Ctrl：正常对照组，Sh NC：Sh阴性对照组，Sh SOX9：SOX9基因沉默组，在B图中，每个浓度下三个组别从左至右分别为HepG2 SR、HepG2 SR(Sh NC)、HepG2 SR(Sh Sox9)；
[0031]图11显示了HepG2 SR细胞SOX9表达沉默后对HepG2 SR细胞集落形成的影响，A图显示了不同组别的细胞集落，B图显示了不同组别处理后，细胞集落的统计分析结果，****P<0.0001，Ctrl：正常对照组，Sh NC：Sh阴性对照组，S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于肝癌患者预后或肝癌病理分期的标志物，其特征在于，所述标志物包括SOX9基因。2.检测SOX9基因表达量的试剂在制备试剂盒中的用途，其特征在于，所述试剂盒用于肝癌患者预后。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述SOX9基因表达量上升是肝癌患者生存期下降的指示。4.检测SOX9基因表达量的试剂在制备试剂盒中的用途，其特征在于，所述试剂盒用于进行肝癌病理分期。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述SOX9基因表达量上升，是肝癌病理分期增加的指示。6.一种用于肝癌患者预后或肝癌病理分...

【专利技术属性】
技术研发人员：王韫芳，柳娟，孙大伟，
申请(专利权)人：北京清华长庚医院，
类型：发明
国别省市：