【技术实现步骤摘要】
一种生物制品在层析工艺中的表观稳定性的在线监测方法
[0001]本公开涉及生物制品纯化领域,具体涉及一种生物制品在层析工艺中的表观稳定性的在线监测方法。
技术介绍
[0002]随着生物医药产业的不断发展,越来越多的新型分子被设计出来。部分新型分子,如工程化改造抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、融合蛋白等,稳定性较差,对缓冲体系pH、缓冲体系离子种类及强度、剪切力等众多因子敏感,极易形成可溶性寡聚体或多聚体,并可进一步形成亚可见微粒及可见微粒,导致层析样品外观呈现乳光或浑浊,给纯化工艺带来极大的困扰。识别不利于样品稳定性的风险因子,在层析过程中规避风险区间显得尤为重要。另外向缓冲体系中加入保护剂,如氨基酸、无机盐、非离子型表面活性剂、非还原糖等,可有效改善层析过程中分子的不稳定状态,抑制颗粒物的生成。
[0003]目前可通过多种技术手段对样品外观进行评估。微流成像分析系统(Micro flow imaging,MFI)常用于浑浊程度较低样品的分析,其整合了数字显微技术和微流体图像处理技术,可对待检测样品进行图像分析,生 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种生物制品在层析工艺中的表观稳定性的在线监测方法,其包含以下步骤:(a)使用内置紫外
‑
可见光传感器的纯化仪器对所述生物制品进行层析操作;(b)在300nm
‑
800nm波长范围内选择至少两个波长作为有效波长;(c)在所述层析操作期间,以层析时间或层析体积为自变量,以所述有效波长下采集的吸光度信号值为因变量分别作图并进行表观稳定性表征。2.根据权利要求1所述的方法,其中步骤(b)包含以下步骤:(b
‑
1)使用分光光度计对水、溶剂进行紫外
‑
可见光波长扫描,判断溶剂特征吸收波长范围,记为λ1;(b
‑
2)选择300~800nm波长范围,扣除与步骤(b
‑
1)所述溶剂特征吸收波长范围λ1重叠部分作为候选波长范围,记为λ2;(b
‑
3)取所述生物制品,使用所述溶剂进行梯度稀释,得到N个样品,N≥3,优选为3
‑
20的整数,更优选为5
‑
10的整数;(b
‑
4)在步骤(b
‑
2)中所述的候选波长范围λ2内任选一个波长,照下述方法进行有效性检验:使用浊度仪对步骤(b
‑
3)所得N个样品的浊度进行测定,浊度测定值分别记为x1至x
n
;使用分光光度计对步骤(b
‑
3)所得N个样品进行全波长扫描,记录吸光度信号值,分别记为y1至y
n
;以x为自变量y为因变量进行线性拟合,拟合系数R2≥z则视为所选检测波长为有效波长,z≥0.9,优选地z≥0.95,更优选地z≥0.98;(b
‑
5)重复步骤(b
‑
4),得到所述至少两个有效波长。3.根据权利要求1所述的方法,其中所述生物制品选自单克隆抗体、双特异性抗体、多特异性抗体和融合蛋白中的任一种;优选地,所述生物制品是单克隆抗体,其具有SEQ ID NO:1所示的重链和SEQ ID NO:2所示的轻链。4.根据权利要求1所述的方法,其中所述层析选自亲和层析、离子交换层析、疏水层析、尺寸排阻层析和复合模式层析中的一种或多种。5.根据权利要求2所述的方法,所述溶剂选自醋酸盐缓冲体系、磷酸盐缓冲体系、柠檬酸盐缓冲体系、Tris缓冲体系、和磷酸氢二钠
‑
柠檬酸缓冲体系中的任一种;优选地,所述缓冲体系还包含氨基酸、无机盐、非离子型表面活性剂、非还原糖、醇类;或者所述溶剂与水在所述有效波长下的吸光度...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈伟峰,陶荣,徐会,赵志龙,李磊,
申请(专利权)人:上海迈晋生物医药科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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