一种创伤弧菌选择性培养基及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种创伤弧菌选择性培养基及其制备方法。包括基础培养基和添加剂；所述基础培养基为蛋白胨、牛肉浸粉、氯化钠、氯化钾、长链烷基硫酸盐阴离子表面活性剂或者乳酸链球菌素、D

【技术实现步骤摘要】
一种创伤弧菌选择性培养基及其制备方法


[0001]本专利技术属于微生物检测
，具体涉及一种创伤弧菌选择性培养基及其制备方法。

技术介绍

[0002]创伤弧菌是人类和水产养殖动物的一种重要病原菌。创伤弧菌属于革兰氏阴性中轻度嗜盐菌，它能通过海产品及伤口暴露于海水而感染人类，可引起患者肠胃炎、原发性败血症、严重的创口感染，其中引起的原发性败血症在免疫功能低下的人群中死亡率高，是导致人类死亡率最高的食源性致病菌。近年来，随着气候变暖以及进食海鲜的人群变多，我国和其它沿海国家都出现了创伤弧菌感染率呈现上升趋势。创伤弧菌于2020年已被我国纳入了食品安全国家标准食品微生物学检验范畴(GB 4789.44
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2020)。在水产养殖中，创伤弧菌可使罗非鱼、南美白对虾、金鲳鱼、安圭拉鳗鱼、鲟鱼、石斑鱼等多种经济动物患病，给水产养殖业带来不小的经济损失。因此，检测创伤弧菌，对于预防食源性疾病和水产养殖动物病害均具有重要意义。
[0003]目前，mCPC、CC培养基是常用于检测创伤弧菌培养基，它们均已被美国FDA和我国食品安全国家标准GB 4789.44
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2020推荐或规定使用。然而，这两种培养基的生长选择性仍不够高，尤其是对革兰氏阳性菌的抑制作用差，这也容易带来革兰氏阳性菌的假阳性干扰，导致检测特异性降低。并且，也由于选择性不够高，mCPC、CC培养基在制备时基础培养基需要高压灭菌，这又导致高压灭菌过程中相对较易降解的高含量组分纤维二糖需要制成无菌添加剂后再使用而产生的麻烦(如相对大体积的纤维二糖水溶液无菌过滤处理、移取添加、贮藏等不方便)。
[0004]因此，研发选择性更高、检测灵敏和特异性更高且易于制备的创伤弧菌培养基，是非常有必要的。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于根据现有培养基技术中存在的上述不足，提供一种选择性高，抑制革兰氏阳性菌和真菌生长作用好，检测创伤弧菌灵敏且特异性更高，无需高压灭菌，易于制备的选择性培养基。
[0006]本专利技术通过以下技术方案来实现：
[0007]一种创伤弧菌选择性培养基，其包括基础培养基和添加剂；所述基础培养基为蛋白胨5～20g/L、牛肉浸粉3～15g/L、氯化钠10～25g/L、氯化钾0.5～5g/L、长链烷基硫酸盐阴离子表面活性剂0.1～1g/L或者乳酸链球菌素0.05～2g/L、D
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纤维二糖6～25g/L、酸碱指示剂0.01～0.10g/L、琼脂10～20g/L，所述添加剂为0.1～3.5mg/L亚碲酸盐，溶剂为水；其中，当所述基础培养基含有乳酸链球菌素时，所述的添加剂还有万古霉素1～30mg/L、两性霉素B 0.2～5mg/L、多粘菌素E1.0
×
104～1.0
×
106IU/L。上述浓度为创伤弧菌选择性培养基中各成分的终浓度。
[0008]优选，所述基础培养基为蛋白胨10g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠15g/L、KCl 1.0g/L、D
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纤维二糖15g/L、十二烷基硫酸钠(SDS)0.5g/L、甲酚红0.04g/L、溴百里香酚蓝0.04g/L、琼脂15g/L；所述添加剂为1.5mg/L亚碲酸盐，溶剂为水。
[0009]优选，所述的基础培养基为蛋白胨10g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠15g/L、KCl 1.0g/L、D
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纤维二糖10g/L、乳酸链球菌素(Nisin)Z型0.8g/L、甲酚红0.04g/L、溴百里香酚蓝0.04g/L、琼脂15g/L；所述的添加剂为亚碲酸钾0.5mg/L、万古霉素6mg/L、两性霉素B 2mg/L、多粘菌素E1.0
×
105IU/L。
[0010]优选地，所述酸碱指示剂为甲酚红、苯酚红、中性红、溴百里香酚蓝、百里香酚蓝之中的一种或两种之混合物。
[0011]优选地，所述长链烷基硫酸盐阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS)。
[0012]优选地，所述亚碲酸盐为亚碲酸钾。
[0013]本专利技术的第二个目的是提供上述创伤弧菌选择性培养基的制备方法，其步骤为：将基础培养基各成分混合后用热浴连续加热或重复间歇式短暂煮沸，并搅拌或摇动，直至完全溶解即可，然后待其冷却至45～50℃后，加入无菌添加剂，制得培养基。
[0014]所述的将基础培养基用热浴连续加热或重复间歇式短暂煮沸是将基础培养基用100℃热浴连续加热，或重复间歇式短暂煮沸，沸腾时间合计不超过1min。
[0015]与现有培养基技术相比，本专利技术的优势在于：
[0016]本专利技术创伤弧菌选择性培养基的生长选择性高，抑制革兰氏阳性菌生长作用好，也能较好地抑制真菌生长，检测创伤弧菌灵敏且特异性更高，并且在制备上无需高压灭菌，易于制备，避免了高含量组分纤维二糖需要制成无菌添加剂后再使用而产生的麻烦。
具体实施方式
[0017]以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。
[0018]实施例1：
[0019]以蛋白胨10g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠15g/L、氯化钾1g/L、D
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纤维二糖6g/L、琼脂15g/L为基础培养基，溶剂为水，考察不同添加浓度亚碲酸钾对创伤弧菌检测灵敏度的影响。培养基的制备方法是将蛋白胨10g、牛肉浸粉5g、氯化钠15g、氯化钾1g、D
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纤维二糖6g、琼脂15g加入到水中，再定容1L，得到基础培养基，用100℃热浴连续加热或重复间歇式短暂煮沸(沸腾时间合计不超过1min)，并搅拌或摇动，直至完全溶解即可，然后待其冷却至45～50℃后，加入无菌不同含量的亚碲酸钾，摇匀后倒入无菌平皿，待培养基充分凝固后即可。
[0020]结果见表1。
[0021]表1.不同添加浓度亚碲酸钾对创伤弧菌检测灵敏度的影响
[0022][0023]注：取于碱性蛋白胨水中37℃有氧下培养15
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18h的创伤弧菌，将其用无菌生理盐水稀释至所需浓度，然后取0.25mL涂布接种至上述培养基后，于37℃有氧下培养24h；“+”表
示检出，“－”表示未检出。
[0024]从表1结果上看，亚碲酸钾的添加浓度过高时，会导致创伤弧菌的检测限增高，亦即降低其检测灵敏度。因此，为实现低浓度创伤弧菌的灵敏检出，亚碲酸钾的添加浓度适宜为0.1～3.5mg/L。
[0025]实施例2：
[0026]以蛋白胨10g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠20g/L、氯化钾0.5g/L、D
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纤维二糖6g/L、亚碲酸钾0.1mg/L、琼脂15g/L为基础培养基，考察不同添加浓度十二烷基硫酸钠(SDS)对创伤弧菌检测灵敏度以及对抑制革兰氏阳性菌的影响。
[0027]培养基的制备方法是将蛋白胨10g、牛肉浸粉5g、氯化钠20g、氯化钾0.5g、D
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纤维二糖6g、琼脂15g、不同量的十二烷基硫酸钠加入到水中，再定容1L本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种创伤弧菌选择性培养基，其特征在于，其包括基础培养基和添加剂；所述基础培养基为蛋白胨5～20g/L、牛肉浸粉3～15g/L、氯化钠10～25g/L、氯化钾0.5～5g/L、长链烷基硫酸盐阴离子表面活性剂0.1～1g/L或者乳酸链球菌素0.05～2g/L、D
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纤维二糖6～25g/L、酸碱指示剂0.01～0.10g/L、琼脂10～20g/L，所述添加剂为0.1～3.5mg/L亚碲酸盐，溶剂为水；其中，当所述基础培养基含有乳酸链球菌素时，所述的添加剂还有万古霉素1～30mg/L、两性霉素B 0.2～5mg/L、多粘菌素E1.0
×
104～1.0
×
106IU/L。2.根据权利要求1所述的创伤弧菌选择性培养基，其特征在于，所述基础培养基为蛋白胨10g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠15g/L、KCl 1.0g/L、D
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纤维二糖15g/L、十二烷基硫酸钠0.5g/L、甲酚红0.04g/L、溴百里香酚蓝0.04g/L、琼脂15g/L；所述添加剂为1.5mg/L亚碲酸盐，溶剂为水。3.根据权利要求1所述的创伤弧菌选择性培养基，其特征在于，所述的基础培养基为蛋白胨10g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠15g/L、KCl 1.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦献虎，吴清平，张友雄，冯颖，陈谋通，卢勉飞，徐环，张菊梅，吴诗，杨小鹃，张淑红，叶青华，丁郁，王涓，万强，
申请(专利权)人：广东环凯生物科技有限公司，
类型：发明
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