一种用于细胞膜蛋白质标记的组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于细胞膜蛋白质标记的组合物及其应用，属于蛋白质分析技术领域。基于原核表达APEX2蛋白酶的APEX邻近标记技术，在原核细胞中表达并纯化APEX2蛋白酶，与BP分子共孵育人胚肾细胞(HEK293T)，在过氧化氢存在下标记细胞膜表面蛋白质，建立细胞膜表面蛋白质的APEX邻近标记实验体系，并获得BP修饰的膜蛋白质。经质谱检测和数据处理，与不加过氧化氢的对照组相比，2945个蛋白质中的992个显著上调，其中765个为膜相关蛋白质，表明基于体外纯化的APEX2蛋白酶的APEX邻近标记技术能够特异性的获得细胞膜表面蛋白质。够特异性的获得细胞膜表面蛋白质。

【技术实现步骤摘要】
一种用于细胞膜蛋白质标记的组合物及其应用


[0001]本专利技术属于蛋白质分析
，具体涉及用于细胞膜蛋白质标记的组合物及其应用。

技术介绍

[0002]蛋白质作为生命物质的基础，其功能的多样性、复杂性使蛋白质组学成为重要研究领域。蛋白质相互作用涉及生命活动的各个过程，是细胞信号转导、物质代谢、周期调控、细胞增殖分化和凋亡等一切生命活动的基础，对蛋白质相互作用的研究获得蛋白质连锁图，为疾病机制、治疗、预防和药物研发提供理论基础，为生命规律研究提供新的线索。
[0003]邻近标记技术是将一个具有催化功能的蛋白酶与诱饵蛋白质融合，蛋白酶通过催化活性生物素共价结合到诱饵蛋白质周围的蛋白质上，实现对诱饵邻近蛋白质的生物素化标记，经由链霉亲和素对生物素化蛋白的富集和质谱检测，最终鉴定诱饵蛋白的邻近蛋白。APEX邻近标记技术利用APEX2蛋白酶在过氧化氢存在下的催化活性，使生物素苯酚(BP)与周围蛋白质共价结合，实现细胞原位水平蛋白质的标记，具有较高的催化效率，提高了鉴定邻近蛋白质的时间分辨率。与传统亲和纯化或免疫共沉淀等蛋白质相互作用鉴定手段本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于细胞膜蛋白标记的组合物，所述组合物包括：APEX2蛋白酶、过氧化氢和下述两种物质中的至少一种物质：生物素苯酚(BP)和生物素苯酚类似物。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述APEX2蛋白酶选自下述任一项：A1)、氨基酸序列是SEQ ID No.1的蛋白质；A2)、氨基酸序列是SEQ ID No.1的第37
‑
285位的蛋白质；A3)、在A1)或A2)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合标签蛋白得到的具有与A1)或A2)相同活性的融合蛋白。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：所述APEX2蛋白酶按照包括如下步骤的方法制备：使所述APEX2蛋白酶的编码基因在生物细胞中进行表达得到所述APEX2蛋白酶。4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：所述生物细胞为微生物细胞。5.根据权利要求3或4所述的组合物，其特征在于：所述方法还包括分离纯化所述APEX2蛋白酶的步骤。6.应用，所述应用为下述任一项：P1)、权利要求1
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5中任一项所述的组合物在细胞膜蛋白标记中的应用；P2)、权利要求1
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5中任一项所述的组合物在细胞膜蛋白功能分析中的应用；P3)、权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：王建，商立民，刘禹辰，金超智，田春艳，宓庆坤，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：