噬菌体辅助自环化环状RNA进化体系制造技术

本发明专利技术公开了一种辅助自环化环状RNA进化噬菌体的自环化gIII基因，其特征在于其序列如SEQ ID No.6所示。还公开了辅助自环化环状RNA进化噬菌体及噬菌体辅助自环化环状RNA进化体系。本发明专利技术的噬菌体辅助自环化RNA的进化体系，诱变质粒MP6转化到宿主菌株中，使用M13噬菌体侵染宿主菌株，诱变质粒不断突变噬菌体基因组。高活性的自环化序列变体通过RNA环化使得pIII蛋白的N端与C端重组成完整的pIII蛋白；而低活性的自环化序列变体不能进行RNA环化，无法表达出有活性的pIII蛋白。新一代噬菌体基因组中携带高活性的自环化序列变体，进而进行下一步的侵染和突变进化，从而获得高活性自环化RNA。RNA。RNA。

【技术实现步骤摘要】
噬菌体辅助自环化环状RNA进化体系


[0001]本专利技术涉及一种噬菌体辅助自环化环状RNA进化体系，属于定向进化


技术介绍

[0002]环状RNA是一个共价闭合环状的RNA分子，具有稳定性好、翻译效率高和免疫原性低等特点，成为基因表达、核酸药物和疫苗的重要载体工具。体外RNA环化主要依赖于I型内含子的自剪切或者真核生物细胞内的自剪接；体外RNA环化依赖于T4 RNA连接酶或者I型内含子的自剪切。因此，I型内含子的自剪切在RNA环化上具有重要的作用。但是，现有的I型内含子的环化效率并不高，只有1
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10％左右，极大地限制了环状RNA的大规模应用。
[0003]定向进化是近些年来兴起的生物技术，利用实验室规模的进化系统，可以在数月的时间内获得自然界中需要数十亿年的进化结果，是一项使用的蛋白或RNA改造技术。正因如此，定向进化技术获得了2018年的诺贝尔化学奖。噬菌体辅助菌株进化技术，又称为PACE技术(phage assisted continuous evolution)，是哈佛大学David R.Liu于2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种辅助自环化环状RNA进化噬菌体的自环化gIII基因，其特征在于其序列如SEQID No.6所示。2.一种辅助自环化环状RNA进化噬菌体，其特征在于：所述噬菌体的pIII蛋白被拆分成C端和N端，所述pIII蛋白C端编码基因与pIII蛋白N端编码基因之间通过RBS序列连接，所述pIII蛋白的编码基因两端分别连有自环化序列。3.根据权利要求2所述的辅助自环化环状RNA进化噬菌体，其特征在于：所述pIII蛋白编码基因为自环化序列1
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pIII蛋白C端编码基因
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PBS
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pIII蛋白N端编码基因
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自环化序列2，其中自环化序列1如SEQ ID No.4所示，自环化序列2如SEQ ID No.5所示。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志乾，许波，刘丽花，陈西朋，吴嵩，张豫，何茜，赖诗静，江翱，吴奕瑞，
申请(专利权)人：山东乾肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：