一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开的属于基因检测试剂盒技术领域，具体为一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒，包括同时检测DPYD*2A、DPYD*13、DPYD2846A>T和TP53位点基因多态性的试剂盒，所述试剂盒包括：反应体系A，所述反应体系A包括DPYD*2A的上下游引物、DPYD*2A野生型和突变型探针、DPYD*13的上下游引物、DPYD*13野生型和突变型探针、Taq酶、PCR缓冲液、dNTP、Mg2+和去离子水，本发明专利技术使用PCR

【技术实现步骤摘要】
一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及基因检测试剂盒
，具体为一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒。

技术介绍

[0002]根据世界卫生组织(WHO)统计数据，全世界约有60％的人死于癌症、糖尿病、心血管疾病、慢性呼吸系统疾病这4大类疾病，而癌症则是最主要的死因之一。2008年全球死于癌症的患者达760万人，占全球死亡人数的13％，我国卫生部第三次全国死因调查结果也显示，癌症已成为我国仅次于心脑血管疾病的第二大死亡原因，占死亡总数的22.32％，并成为我国城市的首位死因。
[0003]目前，恶性肿瘤逐年升高的发病率及其巨大的医疗费用等因素，使得大家“谈癌色变”。好在治疗手段发展快速，包括手术、放疗、化疗、生物治疗等。其中，化疗是肿瘤治疗的主要手段，但是半数以上的患者经过化疗后常常疗效不大，同样的肿瘤药物对于不同病人的疗效往往会有很大的差异；同时化疗药物毒副作用较大，其在杀伤肿瘤细胞的同时，又杀伤正常组织的细胞，有时还可出现并发症，许多患者因为化疗的强烈毒副作用而备受折磨，甚至死亡。大量临床研究证实，单凭经验治疗肿瘤，一般只有30％以下的疗效，且毒副作用明显。药物遗传学和药物基因组学的研究表明，不同病人基因表达水平的差异导致对各种抗肿瘤药物的疗效差异，故肿瘤临床治疗需要制定个体化的精准方案。而基因检测是评估患者使用药物效果非常重要的一环，能从分子层面给医生用药予精确的指导。
[0004]抗肿瘤氟尿嘧啶类药物(fluorouracil，5
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FU)是包括5
‑
FU及可供口服的前药卡培他滨和替加氟等药物在内的一类重要的抗代谢类药物。氟尿嘧啶是临床上应用最广的抗肿瘤药物之一，通过防止嘧啶类核苷酸的形成而干扰DNA的合成来杀伤癌细胞，临床上主要用于治疗乳腺癌、消化道癌、卵巢癌和原发性支气管肺腺癌等。但是，5
‑
FU类药物导致的腹泻、口腔黏膜炎、骨髓抑制、手足综合征和心脏毒性等常限制其在某些患者中的使用，其总体有效率也不尽如人意。
[0005]DPD(dihydropyrimidine dehydrogenase，二氢嘧啶脱氢酶)是5
‑
FU代谢的起始酶和限速酶，DPD缺乏会导致5
‑
FU用药后的严重毒性。DPYD编码DPD，定位于人类染色体1p22，包括23个基因，长950kb。DPYD的多态性可能导致DPD的结构及活性的变化，并影响5
‑
FU在体内的代谢。较明确的与DPD缺陷相关的突变有*2A、*13和2846A>T等。FDA提供的说明书中明确：存在DPD活性部分或完全缺乏的患者，无法充分分解氟嘧啶类药物，发生严重甚至致命毒性的风险增加(包括严重黏膜炎、腹泻、中性粒细胞减少和神经毒性等)。DPYD基因型检测对指导肿瘤的化疗、预测以5
‑
FU为基础的化疗方案的疗效和毒性具有较高的临床价值。
[0006]TP53基因又称为P53，是一种抑癌基因，与人类肿瘤相关性较高，是当前研究的热点基因之一。TP53基因编码的P53蛋白，是一种转录因子，可抑制细胞分裂或生存以应对各种压力，是细胞抗癌防御的关键安全机制。TP53基因在正常细胞中低表达，在恶性肿瘤中高表达。据统计数据显示，75％的癌症患者都存在TP53基因突变；TP53变异与近一半以上的癌
症发生有关，包括肺癌、胃癌、肝癌、膀胱癌、食管癌、乳腺癌、宫颈癌等多种癌症。TP53基因存在多种多态性，其中第72位密码子具有CGC/CCC单核苷酸多态性，分别编码精氨酸(Arg)和脯氨酸(Pro)。TP53 Arg72Pro多态性能够影响p53依赖性的凋亡，Arg等位基因传导凋亡信号的能力及抑制转化细胞生长的能力均比Pro等位基因强。研究显示，TP53 Arg72Pro多态性可能影响5
‑
FU等多种抗肿瘤药物的敏感性。
[0007]目前，检测基因多态性的方法有多种，包括高分辨率熔解曲线法、Taqman荧光探针法、ARMS方法、直接测序法等。其中，高分辨率熔解曲线法步骤简单，但特异性偏低，且对仪器设备的要求较高；ARMS方法采用ARMS引物进行特异扩增操作方法简单，但检测条件要求严格，容易出现引物错配而产生假阳；直接测序法成本较高且操作复杂。而Taqman荧光探针法具有特异性强、检测成本低廉、灵敏度高、准确性强等诸多优点。
[0008]因此，专利技术一种快速、准确、高灵敏的氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒。

技术实现思路

[0009]鉴于上述和/或现有一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒中存在的问题，提出了本专利技术。
[0010]因此，本专利技术的目的是提供一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒，能够解决上述提出现有的问题。
[0011]为解决上述技术问题，根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了如下技术方案：
[0012]一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒，其包括同时检测DPYD*2A、DPYD*13、DPYD 2846A>T和TP53位点基因多态性的试剂盒；
[0013]所述试剂盒包括：
[0014]反应体系A，所述反应体系A包括DPYD*2A的上下游引物、DPYD*2A野生型和突变型探针、DPYD*13的上下游引物、DPYD*13野生型和突变型探针、Taq酶、PCR缓冲液、dNTP、Mg2+和去离子水；
[0015]反应体系B，所述反应体系B包括DPYD 2846A>T的上下游引物、DPYD2846A>T野生型和突变型探针、TP53的上下游引物、TP53野生型和突变型探针、Taq酶、PCR缓冲液、dNTP、Mg2+和去离子水；
[0016]阳性质控，所述阳性质控为DPYD*2A、DPYD*13、DPYD 2846A>T和TP53的野生型和突变型质粒混合液；
[0017]阴性对照，所述阴性对照为无菌去离子水。
[0018]作为本专利技术所述的一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒的一种优选方案，其中：所述试剂盒中PCR混合液引物的浓度为0.20μM；探针的浓度为0.1μM。
[0019]作为本专利技术所述的一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒的一种优选方案，其中：所述反应体系A、所述反应体系B为23ul/反应，模板2ul/反应，共25ul反应体系。
[0020]作为本专利技术所述的一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒的一种优选方案，其中：所述试剂盒可以检测的样品为人全血或外周血样本。
[0021]作为本专利技术所述的一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒的一
种优选方案，其中：还包括同时检测DPYD*2A、DPYD*13、DPYD2846A>T和TP53位点基因多态性的引物和探针；
[0022]所述DPYD*本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒，其特征在于，包括同时检测DPYD*2A、DPYD*13、DPYD 2846A>T和TP53位点基因多态性的试剂盒；所述试剂盒包括：反应体系A，所述反应体系A包括DPYD*2A的上下游引物、DPYD*2A野生型和突变型探针、DPYD*13的上下游引物、DPYD*13野生型和突变型探针、Taq酶、PCR缓冲液、dNTP、Mg2+和去离子水；反应体系B，所述反应体系B包括DPYD 2846A>T的上下游引物、DPYD2846A>T野生型和突变型探针、TP53的上下游引物、TP53野生型和突变型探针、Taq酶、PCR缓冲液、dNTP、Mg2+和去离子水；阳性质控，所述阳性质控为DPYD*2A、DPYD*13、DPYD 2846A>T和TP53的野生型和突变型质粒混合液；阴性对照，所述阴性对照为无菌去离子水。2.根据权利要求1所述的一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中PCR混合液引物的浓度为0.20μM；探针的浓度为0.1μM。3.根据权利要求1所述的一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒，其特征在于，所述反应体系A、所述反应体系B为23ul/反应，模板2ul/反应，共25ul反应体系。4.根据权利要求1所述的一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒可以检测的样品为人全血或外周血样本。5.根据权利要求1所述的一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒，其特征在于，还包括同时检测DPYD*2A、DPYD*13、DPYD 2846A>T和TP53位点基因多态性的引物和探针；所述DPYD*2A的引物探针：DPYD*2A
‑
F：5
’‑
CTATGCATCAGCAAAGCAACTG
‑3’
；DPYD*2A
‑
R：5
’‑
GCATATTGGTGTCAAAGTGTCACT
‑3’
；DPYD*2A
‑
PC：5
’‑
FAM
‑
AGATGTTAAATCACACTTA+CGTTGT
‑
BHQ1
‑3’
；DPYD*2A
‑
PT：5
’‑
HEX
‑
AGATGTTAAATCACACTTA+TGTTGT
‑
BHQ1
‑3’
；所述DPYD*13的引物探针：DPYD*13
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F：5
’‑
ACACTCCTATTGATCTGGTGGACA
‑3’
；DPYD*13
‑
R：5
’‑
AGAGAAAGTTTTGGTGAGGGCA
‑3’
；DPYD*13
‑
PT：5
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ROX
‑
CATCAATGA+TTCGAAGAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：包建民，寇思华，韩鑫涛，
申请(专利权)人：华捷生物科技青岛有限公司，
类型：发明
国别省市：