一种L-酪氨酸高效生产菌株的定向改造方法及生产菌株技术

本发明专利技术提供了一种L

【技术实现步骤摘要】
一种L
‑
酪氨酸高效生产菌株的定向改造方法及生产菌株


[0001]本专利技术涉及发酵工程
，尤其是一种L
‑
酪氨酸高效生产菌株的定向改造方法及生产菌株。

技术介绍

[0002]L
‑
酪氨酸又称L
‑
β
‑
对羟苯基
‑
β
‑
丙氨酸，是三大芳香族氨基酸之一，也是重要的必须氨基酸之一。在常温下，L
‑
酪氨酸呈现白色或浅棕色结晶性粉末，微溶于水，易溶于无机酸和碱溶液。在医药、食品、饲料、化工、农业和化妆品等行业广泛应用。
[0003]L
‑
酪氨酸的生产方法有提取法、化学法、酶催化法和生物发酵法。发酵法是现有生产方法中最主流的方法，但目前的生产菌株存在产量较低、转化率较低、产酸周期短、菌株活力下降较快等问题。因此，定向改造获得L
‑
酪氨酸高效生产菌株具有非常重要的生产实践意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种L<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种L
‑
酪氨酸高效生产菌株的定向改造方法，其特征在于：分别正常发酵培养L
‑
酪氨酸生产菌株至22、28、34h，然后通过耦连的碟式离心机去除菌体及部分培养基中的固形物，然后再分别添加2g/L的酵母粉及5g/L的蛋白胨，所生成的培养基用于L
‑
酪氨酸生产菌株的定向改造，定向改造分三个阶段：首先用22h经过离心处理并添加2g/L的酵母粉及5g/L的蛋白胨的培养基，先对L
‑
酪氨酸生产菌株进行第一步的定向改造，培养15h后；然后进行第二步的改造，用上一步改造的菌液作为此次改造的种子液，以20mL的接种量接入28h经过处理的培养基中继续定向改造，再培养15h后；最后进行第三部的改造，用上一步改造的菌液作为此次改造的种子液，以20mL的接种量接入34h经过处理的培养基中继续培养15h，即得。2.根据权利要求1所述的L
‑
酪氨酸高效生产菌株的定向改造方法，其特征在于：所述L
‑
酪氨酸生产菌株为L
‑
酪氨酸生产菌株E.coliGHLTYR
‑
168。3.根据权利要求1所述的L
‑
酪氨酸高效生产菌株的定向改造方法，其特征在于：所述L
‑
酪氨酸生产菌株E.coliGHLTYR
‑
168正常发酵培养方法的具体步骤如下：(1)菌种活化：将E.coli GHLTYR
‑
168从甘油保菌管中接入斜面培养基中进行活化培养，温度维持在34
‑
36℃；所述斜面培养基成分及含量为：葡萄糖1g/L，氯化钠2.5g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉2g/L，KH2PO
4 2g/L，MgSO4·
7H2O 0.5g/L，V
H 2mg/L，琼脂粉25g/L，其余为水；(2)种子培养：将200mL无菌水于超净台火焰附近倒入上述茄形瓶中，使用接种环将菌落刮至无菌水中并打散制备菌悬液，利用火圈无菌接种入发酵种子培养罐中，培养过程pH维持在6.7
‑
7.0，温度维持在36.8
‑
37.2℃，溶氧维持在35％
‑
50％；所述种子培养基为：葡萄糖30g/L，酵母粉8g/L，MgSO4·
7H2O 1g/L，KH2PO
4 3g/L，甲硫氨酸0.5g/L，蛋白胨5g/L，组氨酸0.5g/L，V
B1 2mg/L、V
B3 2mg/L、...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐庆阳，孙鹏杰，时唐恩，赵春光，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：