一种荧光化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种荧光化合物及其制备方法和应用，该荧光化合物为ER

【技术实现步骤摘要】
一种荧光化合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于细胞生物学
，具体涉及一种荧光化合物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]内质网(ER)是一种膜封闭的动态细胞器，介导多种细胞活动，如脂质代谢、离子储存和蛋白质的加工、折叠及运输等。异常的内质网分解代谢，与多种人类疾病相关。而自噬可通过受体介导的方式对过量或应激内质网进行清除。因此发展内质网和内质网自噬的成像分析方法，对于探索内质网自噬相关的病理、生理作用和开发内质网自噬诱导药物具有重要意义。
[0003]现有技术中，常用的内质网成像方法有通过基因编辑荧光蛋白的方式标记ER，或者使用商品化的染料，如ER
‑
Tracker Green等。前者操作相对复杂，且难以用于分析原代细胞；而后者在活细胞ER中保留性不足，难以用于成像ER自噬等。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于克服现有技术缺陷，提供一种荧光化合物及其制备方法和应用。
[0005]该荧光化合物的合成路线具体如下：
[0006][0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种荧光化合物，为ER
‑
Green，其结构式为
[0009][0010]上述荧光化合物的制备方法，包括如下步骤：
[0011](1)将4
‑
溴
‑
1,8
‑
萘二甲酸酐和3,5
‑
双(三氟甲基)苯甲胺加入到N,N
‑
二甲基甲酰胺中，于50℃下搅拌4
‑
8h，TLC板监测4
‑
溴
‑
1,8
‑
萘二甲酸酐转化完全，加入N,N
‑
二甲基乙二胺，于70℃下搅拌2
‑
4h，然后依次经油泵抽干和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S1；
[0012](2)将上述化合物S1、Boc
‑
L
‑
谷氨酸
‑1‑
叔丁酯和1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐溶解于吡啶中，室温下反应8
‑
12h，然后依次经油泵抽干、复溶于二氯甲烷、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、1M盐酸水溶液洗涤有机相、有机相脱水并减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S2；
[0013](3)将上述化合物S2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，室温下反应1
‑
2h，然后经减压浓缩得到粗产物；将该粗产物、3,5
‑
双(三氟甲基)苯基异氰酸酯和三乙胺溶解于二氯甲烷中，室温下反应30min，依次经饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、有机相脱水、减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S3；
[0014](4)将上述化合物S3、N
‑
甲基炔丙基胺和4
‑
(4,6
‑
二甲氧基三嗪
‑2‑
基)
‑4‑
甲基吗啉盐酸盐加入N,N
‑
二甲基甲酰胺中，室温下搅拌过夜，然后依次经油泵抽干、复溶于二氯甲烷、1M盐酸水溶液洗涤有机相、有机相脱水并减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得所述ER
‑
Green。
[0015]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述步骤(1)中，所述4
‑
溴
‑
1,8
‑
萘二甲酸酐、3,5
‑
双(三氟甲基)苯甲胺和N,N
‑
二甲基乙二胺和N,N
‑
二甲基甲酰胺的比例为40.00mmol:40.00mmol:200.00mmol:200.00mL；所述步骤(2)中，所述化合物S1、Boc
‑
L
‑
谷氨酸
‑1‑
叔丁酯、1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐和吡啶的比例为3.93mmol:5.12mmol:19.64mmol:40.00mL；所述步骤(3)中，所述化合物S2、二氯甲烷、三氟乙酸、3,5
‑
双(三氟甲基)苯基异氰酸酯和三乙胺的比例为3.10mmol:15mL:15mL:9.29mmol:9.30mmol；所述步骤(4)中，所述化合物S3、N
‑
甲基炔丙基胺、4
‑
(4,6
‑
二甲氧基三嗪
‑2‑
基)
‑4‑
甲基吗啉盐酸盐和N,N
‑
二甲基甲酰胺的比例为0.20mmol:0.26mmol:0.60mmol:2.00mL。
[0016]上述荧光化合物作为活细胞内质网成像分析探针的应用。
[0017]本专利技术的另一技术方案如下：
[0018]一种荧光化合物，为ER
‑
Green
‑
proRed，其结构式为
[0019][0020]上述荧光化合物的制备方法，包括如下步骤：
[0021](1)将4
‑
溴
‑
1,8
‑
萘二甲酸酐和3,5
‑
双(三氟甲基)苯甲胺加入到N,N
‑
二甲基甲酰胺中，于50℃下搅拌4
‑
8h，TLC板监测4
‑
溴
‑
1,8
‑
萘二甲酸酐转化完全，加入N,N
‑
二甲基乙二胺，于70℃下搅拌2
‑
4h，然后依次经油泵抽干和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S1；
[0022](2)将上述化合物S1、Boc
‑
L
‑
谷氨酸
‑1‑
叔丁酯和1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐溶解于吡啶中，室温下反应8
‑
12h，然后依次经油泵抽干、复溶于二氯甲烷、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、1M盐酸水溶液洗涤有机相、有机相脱水并减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S2；
[0023](3)将上述化合物S2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，室温下反应1
‑
2h，然后经减压浓缩得到粗产物；将该粗产物、3,5
‑
双(三氟甲基)苯基异氰酸酯和三乙胺溶解于二氯甲烷中，室温下反应30min，依次经饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、有机相脱水、减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S3；
[0024](4)将上述化合物S3、ROX
‑
EDA、1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐和三乙胺加入二氯甲烷中，室温下搅拌8...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光化合物，其特征在于：为ER
‑
Green，其结构式为2.权利要求1所述的荧光化合物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)将4
‑
溴
‑
1,8
‑
萘二甲酸酐和3,5
‑
双(三氟甲基)苯甲胺加入到N,N
‑
二甲基甲酰胺中，于50℃下搅拌4
‑
8h，TLC板监测4
‑
溴
‑
1,8
‑
萘二甲酸酐转化完全，加入N,N
‑
二甲基乙二胺，于70℃下搅拌2
‑
4h，然后依次经油泵抽干和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S1；(2)将上述化合物S1、Boc
‑
L
‑
谷氨酸
‑1‑
叔丁酯和1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐溶解于吡啶中，室温下反应8
‑
12h，然后依次经油泵抽干、复溶于二氯甲烷、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、1M盐酸水溶液洗涤有机相、有机相脱水并减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S2；(3)将上述化合物S2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，室温下反应1
‑
2h，然后经减压浓缩得到粗产物；将该粗产物、3,5
‑
双(三氟甲基)苯基异氰酸酯和三乙胺溶解于二氯甲烷中，室温下反应30min，依次经饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相、有机相脱水、减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得化合物S3；(4)将上述化合物S3、N
‑
甲基炔丙基胺和4
‑
(4,6
‑
二甲氧基三嗪
‑2‑
基)
‑4‑
甲基吗啉盐酸盐加入N,N
‑
二甲基甲酰胺中，室温下搅拌过夜，然后依次经油泵抽干、复溶于二氯甲烷、1M盐酸水溶液洗涤有机相、有机相脱水并减压浓缩和硅胶柱层析分离纯化，获得所述ER
‑
Green。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述4
‑
溴
‑
1,8
‑
萘二甲酸酐、3,5
‑
双(三氟甲基)苯甲胺和N,N
‑
二甲基乙二胺和N,N
‑
二甲基甲酰胺的比例为40.00mmol:40.00mmol:200.00mmol:200.00mL；所述步骤(2)中，所述化合物S1、Boc
‑
L
‑
谷氨酸
‑1‑
叔丁酯、1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐和吡啶的比例为3.93mmol:5.12mmol:19.64mmol:40.00mL；所述步骤(3)中，所述化合物S2、二氯甲烷、三氟乙酸、3,5
‑
双(三氟甲基)苯基异氰酸酯和三乙胺的比例为3.10mmol:15mL:15mL:9.29mmol:9.30mmol；所述步骤(4)中，所述化合物S3、N
‑
甲基炔丙基胺、4
‑
(4,6
‑
二甲氧基三嗪
‑2‑
基)
‑4‑
甲基吗啉盐酸盐和N,N
‑
二甲基甲酰胺的比例为0.20mmol:0.26mmol:0.60mmol:2.00mL。4.权利要求1所述的荧光化合物作为活细胞内质网成像分析探针的应用。5.一种荧光化合物，其特征在于：为ER
...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩守法，邹小雪，施一龙，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：