一种辅因子平衡的高产D-泛酸的基因工程菌、构建及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种辅因子平衡的高产D

【技术实现步骤摘要】
一种辅因子平衡的高产D
‑
泛酸的基因工程菌、构建及应用
(一)

[0001]本专利技术属于代谢工程领域，具体涉及一种辅因子平衡的高产D
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泛酸的基因工程菌、构建方法，及其在微生物发酵制备D
‑
泛酸中的应用。
(二)
技术介绍

[0002]D
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泛酸(D
‑
pantothenic acid,D
‑
PA)，又名遍多酸、维生素B5，是生物体维持正常生理功能所必需的微量营养素，作为CoA和ACP的前体物质，它在体内对碳水化合物，脂质，蛋白质和核酸的代谢调节中起着明显的作用。D
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泛酸的名称来自希腊语“pantothen”，意思是“来自所有方面”。顾名思义，D
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泛酸在饮食中广泛可用，通常，花生酱(5
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8mg/100g)，动物肝脏和肾脏(4
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7mg/100g)，杏仁(2
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3mg/100g)，麦麸(2
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3mg/100g)和龙虾(1.5mg/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种辅因子平衡的高产D
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泛酸的基因工程菌，由如下方法构建获得：(1)以大肠杆菌Escherichia coli ZJB18003(CCTCC NO：M 2018914)为底盘菌，将来源于谷氨酸棒状杆菌的panB与panC基因在底盘菌中过表达，获得基因工程菌DPA11A01；所述panB基因核苷酸序列如SEQID NO.1所示，panC基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；(2)将来源于谷氨酸棒杆菌中NAD
+
激酶基因ppnk和酿酒酵母菌中NADH激酶基因pos5p在DPA11A01菌中过表达，获得辅因子平衡的高产D
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泛酸的基因工程菌株DPA11A15；所述ppnK基因核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示，pos5p基因核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；(3)对酿酒酵母菌中NADH激酶基因pos5p在DPA11A15菌中过表达时进行RBS优化，采用低强度的RBS“L”进行优化调节，获得辅因子平衡的高产D
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泛酸的基因工程菌株DPA11A15
‑
1，即为所述辅因子平衡的高产D
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泛酸的基因工程菌；所述RBS“L”序列如SEQ ID NO.5所示。2.构建权利要求1所述高产D
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泛酸的基因工程菌的方法，其特征在于所述方法如下：(1)以大肠杆菌Escherichia coli ZJB18003(CCTCC NO：M 2018914)为底盘菌，应用质粒表达系统，将panB与panC克隆到pTrc99a质粒中，获得pTrc99a
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panBC，将质粒pTrc99a
‑
panBC转入底盘菌中进行独立过表达，获得基因工程菌DPA11A01；所述panB基因核苷酸序列如SEQID NO.1所示，panC基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；(2)应用双质粒表达系统，将ppnK基因、pos5p基因同时克隆到与pTrc99a质粒兼容的pTN质粒中，获得质粒pTN
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ppnk
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pos5p，将质粒pTN
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ppnk
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pos5p转入菌株DPA11A01中进行过表达，获得辅因子平衡的高产D
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泛酸的基因工程菌株DPA11A15；所述ppnK基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，pos5p基因核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；(3)对酿酒酵母菌中NADH激酶基因pos5p在DPA11A15菌中过表达时进行RBS优化，将pTN...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹树平，张政，柳志强，郑裕国，牛坤，周海岩，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：