一种液基细胞保存液及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种液基细胞保存液及其制备方法和应用，所述液基细胞保存液的组分以质量百分含量计包括：缓冲剂0.1

【技术实现步骤摘要】
一种液基细胞保存液及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于细胞保存液
，涉及一种液基细胞保存液及其制备方法和应用，尤其涉及一种针对针吸细胞的保存液及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]针吸细胞学也称为细针吸取细胞学，其方法简便、安全、快速、敏感性好，确诊率高，微创伤性，已成为临床肿瘤疾病快速确诊的重要方法之一。针吸细胞标本采集的基本原理是用穿刺针准确刺破皮肤进入病变区域后，通过提插针方式，使斜面部对病变组织进行多次抽提切割，并同时借助针管内的持续负压将割获得标本吸入针芯及针筒内，从而获得细胞标本。所获的细胞标本需及时放入保存液中进行固定，细胞保存液起到保持、固定细胞原形态结构的作用，是病理细胞诊断基础，因为如果细胞形态结构发生变化，可能会带来诊断结果的误差，所以需要细胞保存液进行固定细胞形态。
[0003]目前多数的细胞保存液为了能够最大程度的固定细胞形态，避免细胞发生退变，不影响液基细胞学制片及诊断，起到保护细胞的作用，会加入较多的醇、醛类。而醇、醛类物质介导的DNA与核蛋白之间的交联结构，生物大分子之间缓慢形成广泛的亚甲基交联桥，导致DNA链的脆性增加，更容易发生随机断裂，进行核酸提取时不能获得完整的扩增靶区域片段，致使分子检测失败。这就会导致取材一次只能单一用来做液基细胞学实验，分子检测需要再取材。例如CN110742059A公开了一种液基细胞保存液，其成分包括：酒精300
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350ml，水600
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650ml，磷酸二氢钾15g，磷酸氢二钠8g，乙二胺四乙酸二钠1.8g，二硫苏糖醇1.5g，氯化铵0.9g，叠氮钠0.2g；还提供了上述液基细胞保存液的制备方法；该液基细胞保存液够快速固定细胞，稳定细胞的pH值，防止标本中血液凝结，及时裂解标本中的红细胞，溶解标本中粘液的粘蛋白，同时防腐杀菌，使标本可以长期保存。
[0004]当然，在核酸提取过程中增加解交联步骤即可避免分子检测实验失败，但目前大部分核酸提取设备无法进行解交联这一步，若进行手工柱提，那么实验时间就比较久，且无法实现自动化，影响日常工作中的效率。同时，目前开发的液基细胞保存液大多适应范围比较窄，对脱落细胞效果较好，对针吸细胞效果不佳，且针对针吸细胞的保存液鲜少，因此，开发一种广泛适用于液基细胞尤其适用针吸细胞的既能有效保存细胞形态进行液基细胞学实验，又能无需解交联核酸提取进行分子实验的细胞保存液是非常有意义的。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种液基细胞保存液及其制备方法和应用，尤其提供一种针对针吸细胞的保存液及其制备方法和应用。该细胞保存液广泛适用于各类液基细胞尤其适用较难实现保存的针吸细胞，该细胞保存液既能有效保存细胞形态进行液基细胞学实验，又能无需解交联核酸提取进行分子实验，因此取材一次可以同时用来做液基细胞学实验和分子检测，大大提高了疾病诊断的效率。
[0006]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种液基细胞保存液，所述液基细胞保存液的组分以质量百分含量计包括：缓冲剂0.1
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10％、酶抑制剂0.001
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1％、有机溶剂10
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50％、水。
[0008]本专利技术所涉及的液基细胞保存液包含特定质量百分含量的缓冲剂、酶抑制剂和有机溶剂，其中有机溶剂起到固定细胞形态，避免细胞发生退变的作用，其中酶抑制剂起到保护核酸，使DNA链不易发生随机断裂的作用。有机溶剂的添加量为10
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50％是因为若添加量过高或过低则会打破酶抑制剂和有机溶剂的平衡，无法获得既能有效保存细胞形态又能无需解交联核酸提取的效果；酶抑制剂的添加量为0.001
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1％是因为若添加量过高或过低都会使保护核酸的效果变差。
[0009]所述缓冲剂的质量百分含量可以选择0.1％、0.5％、0.8％、1％、2％、4％、6％、7％、8％、10％等。
[0010]所述酶抑制剂的质量百分含量可以选择0.001％、0.005％、0.01％、0.05％、0.08％、0.1％、0.2％、0.3％、0.5％、0.8％、1％等。
[0011]所述有机溶剂的质量百分含量可以选择10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％等。
[0012]上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0013]优选地，所述缓冲剂包括氯化盐和磷酸盐。
[0014]本专利技术所涉及的细胞保存液中的缓冲剂优选同时含有如下质量配比的氯化盐和磷酸盐，使得细胞的状态保持效果更优。
[0015]优选地，所述氯化盐与磷酸盐的质量比为(5
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20):1，例如5:1、8:1、10:1、12:1、14:1、16:1、18:1、20:1等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0016]优选地，所述氯化盐包括氯化钠和/或氯化钾。
[0017]优选地，所述磷酸盐包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾或磷酸二氢钾中的任意一种或至少两种的组合。
[0018]优选地，所述酶抑制剂包括盐酸胍。
[0019]本专利技术创造性地以盐酸胍作为细胞保存液中的酶抑制剂，其能很好地保护核酸，发挥DNA链不易发生随机断裂的作用，获得既能有效保存细胞形态又能无需解交联核酸提取的效果。
[0020]优选地，所述酶抑制剂为盐酸胍和乙二胺四乙酸的组合。
[0021]本专利技术还创造性地发现以盐酸胍和乙二胺四乙酸的组合作为细胞保存液中的酶抑制剂，其在保护核酸方面的效果更显著。
[0022]优选地，所述盐酸胍与乙二胺四乙酸的质量比为(3
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8):1，例如3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0023]优选地，所述有机溶剂包括醛和醇。
[0024]优选地，所述醛包括多聚甲醛和/或甲醛，更优选多聚甲醛。
[0025]优选地，所述醛在液基细胞保存液中的质量百分含量为0.001
‑
0.009％，例如0.001％、0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0026]所述醛在液基细胞保存液中的质量百分含量特定选择为0.001
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0.009％是因为若其添加量进一步增加或降低，其固定细胞形态的效果会显著降低。
[0027]优选地，所述醇包含乙醇。
[0028]优选地，所述醇还包含甲醇和/或异丙醇。
[0029]本专利技术还发现进一步地添加甲醇和/或异丙醇与乙醇形成醇的复配方式，能够更加显著地提高产品在固定细胞形态上的效果。
[0030]第二方面，本专利技术提供根据第一方面所述的液基细胞保存液的制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种液基细胞保存液，其特征在于，所述液基细胞保存液的组分以质量百分含量计包括：缓冲剂0.1
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10％、酶抑制剂0.001
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1％、有机溶剂10
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50％、水。2.根据权利要求1所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述缓冲剂包括氯化盐和磷酸盐；优选地，所述氯化盐与磷酸盐的质量比为(5
‑
20):1。3.根据权利要求2所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述氯化盐包括氯化钠和/或氯化钾；优选地，所述磷酸盐包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾或磷酸二氢钾中的任意一种或至少两种的组合。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述酶抑制剂包括盐酸胍。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述酶抑制剂为盐酸胍和乙二胺四乙酸的组...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱石兰，王丹宇，陈绍宇，
申请(专利权)人：广州普希盛科技有限公司，
类型：发明
国别省市：