一种纺锤形赖氨酸芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种纺锤形赖氨酸芽孢杆菌及其应用，属于微生物技术领域。本发明专利技术提供的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌，命名为KBD

【技术实现步骤摘要】
一种纺锤形赖氨酸芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种纺锤形赖氨酸芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]烟草花叶病毒，简称TMV，为RNA病毒，是烟草花叶病等的病原体，是烟草生产上分布最广、发生最为普遍的一类病害，对烟草的危害极大。烟草花叶病毒侵染烟草植株后，会破坏植株的组织结构，对嫩叶的破坏力度最大，使嫩叶出现明脉症状，即叶片侧脉及支脉组织出现半透明的现象，烟草花叶病毒在烟草细胞中大量繁殖，病毒RNA会严重影响烟草细胞的正常分裂，导致烟草叶肉细胞畸形裂变，部分烟草叶片大量繁殖或者受抑制，出现叶片厚度不均匀的症状，叶片出现斑点，呈现出黄绿相间的不同区域，随着花叶病毒的进一步侵染，逐步导致叶片组织坏死，烟草叶片出现大面积的褐色坏死斑，叶片形状扭曲、皱缩，这种现象在老叶片上尤为明显，重病的叶片凸起形成泡状，边缘向内弯曲。早期发病的烟草植株，严重矮化，烟草植株不能正常生长，在成熟期不能正常的开花结果，抵抗能力很差，容易受到外界的干扰，叶片和花果容易脱落，种子量少，一般不能正常发芽生长。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供了一种纺锤形赖氨酸芽孢杆菌，命名为KBD
‑
5，该菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26146，保藏日为2022年11月14日。
[0004]上述纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5对烟草花叶病毒具有优异的抑制活性，因此，可将其应用于由烟草花叶病毒引起的植物性病害的预防和/或治疗，具体地，可将上述纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5制备成微生物制剂，以预防和/或治疗由烟草花叶病毒引起的植物性病害，例如烟草花叶病。
[0005]本专利技术提供了一种微生物制剂，含有上述纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5。
[0006]在对纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5的研究中，我们发现，KBD
‑
5对硒元素具有较强的还原和转化能力，其可以将无机硒转化为硒单质。为此，本专利技术还提供了上述纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5在无机硒还原或硒单质制备中的应用。
[0007]本专利技术提供了一种纳米硒活性菌液的制备方法，步骤如下：
[0008]将上述纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5菌液接种于含无机硒的培养基中，在适宜的条件下培养，至菌液中富集有红色物质，无机硒被还原为红色单质纳米硒，稀释菌液，获得纳米硒活性菌液。
[0009]上述纳米硒活性菌液的制备方法中，纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5菌液的接种量为1％，其中，菌液中纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5的含量≥108cfu/mL。
[0010]上述纳米硒活性菌液的制备方法中，培养基可选自液体培养基，例如LB液体培养基等。
[0011]在本专利技术中，适宜纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5生长和繁殖的温度条件为28～37
℃，优选为30℃。在培养过程中，也可选择震荡培养，振荡速率应当适宜纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5，例如可以是150rpm。
[0012]具体地，所述纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5菌液可由如下方法制备而成：
[0013]将纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5菌株接种到LB固体培养基上进行纯化，挑取生长良好的单一菌落接种于LB液体培养基中，在30℃、150rpm条件下振荡培养，得到纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5发酵菌液。
[0014]上述纳米硒活性菌液的制备方法中，菌液的稀释按需求进行稀释即可。
[0015]本专利技术提供了一种纳米硒的制备方法，步骤如下：
[0016]将上述纳米硒活性菌液离心，沉淀为菌体和纳米硒的混合物；向沉淀中加入溶菌酶，充分孵育；然后置于冰上超声；将超声后的溶液离心，弃去菌体沉淀，回收上清；将上清离心，弃上清，洗涤沉淀，获得纳米硒。
[0017]由上述方法制备的纳米硒或纳米硒活性菌液，可用于作物的富硒种植。
[0018]在本专利技术中，无机硒包括但不限于硒酸盐、亚硒酸盐、氧化硒中的一种或几种，其具体可以是硒酸钠、亚硒酸钠等。
[0019]在对纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5的研究中，我们还发现，KBD
‑
5能够显著促进植物的生长和发育，为此，本专利技术还提供了上述纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
‑
5在促进植物生长发育中的应用。
[0020]本专利技术的有益效果为：
[0021]本专利技术提供了一种纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
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5，其对烟草花叶病毒具有优异的抑制活性，且具有较好的无机硒还原能力，同时还能够促进植物的生长发育，因此，可将纺锤形赖氨酸芽孢杆菌KBD
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5制备成菌剂或者纳米硒活性菌液，用于植物抗病性研究，具有显著的应用价值。
附图说明
[0022]图1为KBD
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5发酵菌液对TMV的枯斑抑制效果图；其中，每片叶的左侧为KBD
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5发酵菌液处理组，右侧为对照组；
[0023]图2为KBD
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5发酵菌液对本氏烟的促生效果图；其中，长势较大的为KBD
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5发酵菌液处理组，长势较小的为对照组；
[0024]图3为亚硒酸钠被还原为红色单质纳米硒。
具体实施方式
[0025]本专利技术所述的KBD
‑
5菌株，是从保山腾冲温泉泥土样中分离得到的，经鉴定，为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌，并保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26146，保藏日为2022年11月14日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株的培养条件为30℃，LB培养基，pH＝7.0。
[0026]本专利技术中所使用的其它术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本专利技术。以下实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。
[0027]实施例1
[0028]菌种的分离、纯化与鉴定：
[0029]从保山腾冲温泉泥土中采集土壤样品，称取2g采集的土样，加入20mL ddH2O，30℃、180rpm振荡培养16h，取出静置30min，取上清在LB固体培养基上划线，放入30℃培养箱中培养。挑取单菌落在LB固体培养基上划线，30℃培养，获得纯化菌株。该菌株的形态学特征为：菌落呈淡黄色，近圆形，不透明，表面光滑、扁平。初步鉴定为芽孢杆菌。
[0030]参照试剂盒说明书进行DNA提取、PCR扩增，由青岛派森诺基因生物技术有限公司进行16S rDNA测序。
[0031]测序结果为：
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纺锤形赖氨酸芽孢杆菌，其特征在于，所述菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26146，保藏日为2022年11月14日。2.权利要求1所述纺锤形赖氨酸芽孢杆菌在制备防治由烟草花叶病毒引起的植物性病害的微生物制剂中的应用。3.一种微生物制剂，其特征在于，含有权利要求1所述的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌。4.权利要求1所述纺锤形赖氨酸芽孢杆菌在无机硒还原或硒单质制备，或在促进植物生长发育中的应用。5.一种纳米硒活性菌液的制备方法，其特征在于，步骤如下：将权利要求1所述的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌菌液接种于含无机硒的培养基中，在适宜的条件下培养，至菌液中富集有红色物质，无机硒被还原为红色单质纳米硒，稀释菌液，获得纳米硒活性菌液。6.根据权利要求5所述的制备方...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨金广，袁莲莲，焦裕冰，李莹，王凤龙，申莉莉，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所中国烟草总公司青州烟草研究所，
类型：发明
国别省市：