一种MPL三乙胺盐、其制备工艺及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种MPL三乙胺盐、其制备工艺及应用。所述MPL三乙胺盐的制备方法包括如下步骤：(1)MPL粗品溶于氯仿后去除溶剂；(2)加入TEA水溶液，常温下超声使MPL均匀混悬在溶液中；(3)将上述溶液转移至纯水中，超声分散均匀；(4)向上述体系中加入TEA水溶液，超声，冻干即得。本发明专利技术还涉及所述的MPL三乙胺盐在制备疫苗佐剂及疫苗中的应用。疫苗佐剂及疫苗中的应用。疫苗佐剂及疫苗中的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种MPL三乙胺盐、其制备工艺及应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体的，涉及一种MPL三乙胺盐、其制备工艺及应用。

技术介绍

[0002]MPL(单磷酰酯A，monophosphoryl lipid A，也简称MPLA)是来自于革兰氏阴性细菌细胞壁中的内毒素(LPS)的最内层脂质体(lipid A)部分。脂肪链结构和磷酸化程度均会影响其活性和内毒素的作用，来自于Salmonella minnesota的lipid A分别在1位和4位含有一个磷酸基团，会过度激活先天性免疫应答，从而导致败血性休克等临床症状，副反应强烈。文献报道去掉1位磷酸基团后，其毒性降低且保留了免疫活性，称之为单磷酰酯A(MPL)。
[0003]作为已上市的新一代疫苗佐剂，MPL临床用途广泛，常见的佐剂系统有：AS01(包含QS21与MPL(脂质体佐剂)、AS02(含有角鲨烯和α
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生育酚的水包油乳液中加入MPL和QS21)、AS04(MPL吸附在氢氧化铝)、AS15(MPLA，QS21，CpG，脂质体)等，而佐剂系统不同的配伍(formulation)会影响到佐剂的免疫应答效果和副作用。已上市的含佐剂的疫苗产品：
[0004]Fendrix TM：由GSK在2004年研制的乙肝疫苗，该疫苗由乙肝病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)和AS04佐剂系统组成。
[0005]Cervarix TM与Gardasil TM：前者是由GSK在2009年研制的宫颈癌二价疫苗，由HPV L1表位的病毒样颗粒(VLP)与AS04系统组成；后者由默克研发，也含有AS04佐剂。
[0006]Shingrix TM：由GSK研制的带状疱疹疫苗，使用AS01佐剂系统。
[0007]由于佐剂系统不同的配伍(formulation)会影响到佐剂的免疫应答效果和副作用，所以MPL需要经过不同类型的制剂工艺后，形成佐剂制剂才能进行使用，因此对于该产品的溶解性质有较高的要求。
[0008]目前MPL来源主要依靠生物发酵提取，包含四个或五个不同链长的长链酰基结构同系物的复杂混合物。缺点是制备纯化难度大，残留的蛋白及糖异质带来的纯度问题，并且成本较高。例如，一类称为SJ
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19a的lipid A是从革兰氏阴性细菌液化曲霉中酸性水解而来的，但在酸水解步骤中，可能发生化学降解，不稳定的磷酸键断开从而导致MPL的异质性。
[0009]合成制备的MPL结构明确，没有糖异质带来的纯度问题，更适于工业化生产，但是其水溶解度差，应用于制剂受限。现有报道的MPL，base(非盐型)和铵盐形式溶解度都比较差，用于液体制剂受限；在水中为混悬液，无法进行过滤除菌。
[0010]针对现有技术中的上述技术问题，提出本专利技术。

技术实现思路

[0011]本专利技术首先涉及一种MPL三乙胺盐(MPL
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TEA)的制备方法，所述方法包括如下步骤：
[0012](1)MPL粗品溶于氯仿后去除溶剂；
[0013](2)加入TEA水溶液，常温下超声使MPL均匀混悬在溶液中；
[0014](3)将上述溶液转移至纯水中，超声分散均匀；
[0015](4)向上述体系中加入TEA水溶液，超声，冻干即得。
[0016]具体的，所述的方法的步骤为：
[0017](1)MPL粗品与氯仿(10％，wt)中完全溶解，0.45μm微孔滤膜过滤后去除溶剂，使其均匀分布在圆底烧瓶底部；优选的，去除溶剂使用减压旋蒸法；
[0018](2)加入1.0％TEA水溶液，常温下超声使MPL均匀混悬在溶液中，优选的，所述的TEA水溶液的加入量为MPL粗品的10倍(质量比)；
[0019](3)将上述溶液转移至纯水中，超声分散均匀；优选的，纯水的加入量为MPL粗品的40倍(质量比)；
[0020](4)向上述体系中加入0.2％TEA水溶液，超声溶解完全即得；优选的，0.2％TEA水溶液的加入量为MPL粗品的50倍(质量比)。
[0021]本专利技术还包括将所述MPL三乙胺盐制备成纳米溶液的步骤，具体的步骤为：
[0022](5)将步骤(4)反应溶液通过高压均质机均质后用0.45μm水相微孔滤膜过滤；
[0023]本专利技术还包括将所述MPL三乙胺盐纳米溶液进一步冻干的步骤，具体的步骤为：
[0024](6)转移至冻干机，按照冻干曲线进行冻干，所述冻干步骤为：
[0025]预冻：
‑
30.0℃，180min；
[0026]一次干燥：
[0027]第一阶段：
‑
15.0℃，降温30min，持续480min；
[0028]第二阶段：
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5.0℃，升温30min，持续240min；
[0029]第三阶段：0℃，升温15min，持续240min；
[0030]解析干燥：20.0℃，升温15min，持续480min；
[0031]冻干结束后，冲氮并密封，保存于2
‑
8℃。
[0032]最优选的，所述的方法包括如下步骤：
[0033]取1g MPL粗品10mL氯仿完全溶解，0.45μm微孔滤膜过滤，加入5mL的甲醇旋转蒸发去除溶剂，使其均匀分布在圆底烧瓶底部。
[0034]向烧瓶中加入1.0％TEA水溶液10mL，25
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30℃超声0.5h，使MPL均匀混悬在溶液中。
[0035]将上述溶液转移至含有40mL纯水的容器中，超声分散均匀10min。
[0036]将上述体系中加入50mL 0.2％TEA水溶液，超声10min。
[0037]最终得液体100ml，其中MPL 10mg/ml，TEA浓度为0.2％。
[0038]上述溶液通过高压均质机均质两次，D50粒度<100nm，溶液0.45μm水相微孔滤膜过滤，转移至冻干机，按照冻干曲线进行冻干。冻干结束后，向冻干机冲氮，密封瓶塞，取出瓶子，保存于2
‑
8℃。
[0039]本专利技术还涉及所述方法制备得到的MPL三乙胺盐。
[0040]所述的MPL三乙胺盐在水溶液中的溶解度为8mg/mL；
[0041]所述的MPL三乙胺盐溶解在纯水中制备得到的水溶液的平均粒径分布数据为：平均粒径约900～950nm。
[0042]所述的10mgMPL三乙胺盐通过1mLDMSO增溶后，溶于10mL去离子水制备得到的水溶液的平均粒径分布数据为：平均粒径约110～130nm。
[0043]本专利技术还涉及所述的制备MPL三乙胺盐的方法或MPL三乙胺盐在制备疫苗佐剂中的应用。
[0044]所述的疫苗优选为：乙肝疫苗、带状疱疹疫苗、宫颈癌疫苗。
[0045]所述的疫苗佐剂优选为脂质体或胶束佐剂，更优选的，所述的佐剂是：AS01、AS02、AS04、AS15。
[0046]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MPL三乙胺盐的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)MPL粗品与氯仿(10％，wt)完全溶解，0.45μm微孔滤膜过滤，去除溶剂，使其均匀分布在圆底烧瓶底部；优选的，去除溶剂使用减压旋蒸法；(2)加入1.0％TEA水溶液，常温下超声使MPL均匀混悬在溶液中，优选的，所述的TEA水溶液的加入量为MPL粗品的10倍(质量比)；(3)将上述溶液转移至纯水中，超声分散均匀；优选的，纯水的加入量为MPL粗品的40倍(质量比)；(4)向上述体系中加入0.2％TEA水溶液，超声10min；优选的，0.2％TEA水溶液的加入量为MPL粗品的50倍(质量比)。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还进一步包含制备MPL三乙胺盐纳米溶液的步骤，具体的步骤为：(5)将步骤(4)反应溶液通过高压均质机均质后用0.45μm水相微孔滤膜过滤。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，还包括将MPL三乙胺盐溶液冻干的步骤，具体的步骤为：(6)将MPL三乙胺盐溶液或MPL三乙胺盐纳米溶液转移至冻干机进行冻干，所述冻干步骤为：预冻：
‑
30.0℃，180min；一次干燥：第一阶段：
‑
15.0℃，降温30min，持续480min...

【专利技术属性】
技术研发人员：高祺，李根，陈超，郑致伟，隋强，戈冬眠，岳慧，
申请(专利权)人：上海安奕康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：