一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法技术

本发明专利技术属于植物组织培养快速繁殖技术领域，具体公开一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法，包括以下步骤：玉龙杓兰人工异花授粉；玉龙杓兰果荚采收：采集野外人工授粉145天后成熟饱满未裂开的果荚作为玉龙杓兰种子非共生萌发的材料；玉龙杓兰果荚及种子预处理；玉龙杓兰非共生萌发培养：所述非共生萌发培养用培养基为改良B5培养基，所述改良B5培养基为在B5基本培养基的基础上再加上10g/L椰子粉、0.5g/L活性碳粉、0.5mg/L6

【技术实现步骤摘要】
一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法


[0001]本专利技术属于植物组织培养快速繁殖
，具体涉及一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法。

技术介绍

[0002]玉龙杓兰(CypripediumforrestiiCribb)为兰科杓兰属(Cypripedium)植物，植物学家George Forrest于1913年在云南省丽江地区采集并命名，只分布在云南西北部(丽江、中甸)，生于海拔3500米的松林下、灌木丛生的坡地或开旷林地上，花期6月。玉龙杓兰植株高3
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5厘米，具细长而横走的根状茎，叶片翠绿且美，观为椭圆形和卵形的形状，叶片上面带有着黑色的小斑点。花序顶生，无花苞片，暗黄色，有栗色细斑，花朵的花瓣造型为卵形，具有非常高的观赏和经济价值。玉龙杓兰生长环境苛刻，自然更新较慢，现存活体种群数量极少，《中国生物多样性红色名录
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高等植物卷》将其评估为极危等级(CR)，在2021年最新的国家动植物保护名录中被列为国家二级保护植物。由于玉龙杓兰分布区域发生泥石流等自然灾害、加之不断有人为干扰，使其野生环境破坏严重，加剧该物种濒危，对玉龙杓兰的保育工作刻不容缓。
[0003]玉龙杓兰生长对生境要求比较严苛，宜采用就地划定保护小区进行保护。同时，通过人工繁育、驯化及回归复壮等措施进行辅助保护。玉龙杓兰因所处海拔比较高，生境极为恶劣，传粉昆虫较少，所以野外几乎看不到玉龙杓兰果荚结实，玉龙杓兰自然更新主要是靠横走的根状茎，因此野外居群均以片状集中分布。种子非共生萌发是人工繁殖种苗的有效途径，在不破坏原有种群的基础上，采用人工异花授粉获得果荚，通过种子非共生萌发方法获得实生苗，为玉龙杓兰的回归、种群复壮奠定基础。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是提供一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法以解决玉龙杓兰种苗繁殖问题。
[0005]为实现以上目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法，包括以下步骤：
[0007](1)玉龙杓兰人工异花授粉；
[0008](2)玉龙杓兰果荚采收：采集野外人工授粉145天后成熟饱满未裂开的果荚作为玉龙杓兰种子非共生萌发的材料；
[0009](3)玉龙杓兰果荚及种子预处理；
[0010](4)玉龙杓兰非共生萌发培养：所述非共生萌发培养用培养基为改良B5培养基，所述改良B5培养基为在B5基本培养基的基础上再加上10g/
[0011]L椰子粉、0.5g/L活性碳粉、0.5mg/L 6
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BA；
[0012](5)玉龙杓兰继代培养。
[0013]进一步的，步骤(2)中，所述果夹采摘后用牛皮纸装袋，放入4℃的冰箱存储备用。
[0014]进一步的，步骤(3)中，玉龙杓兰果荚预处理步骤为：在超净工作台中用无菌水将玉龙杓兰果荚冲洗干净，用75％无水乙醇浸泡果荚1分钟，后用0.1％升汞浸泡消毒20分钟，再用大量无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干果荚表面水分备用。
[0015]优选的，步骤(3)中，玉龙杓兰种子预处理步骤为：用灭菌手术刀将果荚横切成两段，将所有种子抖落到无菌培养皿中，用无菌水将种子制成种子悬浮液，在悬浮液中加入一滴表面活性剂备用。
[0016]优选的，所述表面活性剂为吐温20。
[0017]进一步的，步骤(5)中，玉龙杓兰继代培养所用培养基为在改良B5培养基的基础上加0.2mg/L NAA和100g/L土豆匀浆，活性炭的用量增加为1.0g/L。
[0018]进一步的，步骤(4)和步骤(5)中，所述培养基的pH为5.6。
[0019]进一步的，步骤(4)和步骤(5)中，培养条件为温度：23
±
2℃，暗培养。
[0020]通过本专利技术的非共生培养方法，能使玉龙杓兰萌发率达到78.67％。在萌发出白色原球茎后，当原球茎分化出1
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2厘米根时，将玉龙杓兰转接到继代培养基中，继续进行暗培养，暗培养一段时间后，根继续长长，根上长出细小绒毛，并且长出芽，在该继代培养基中，98％以上的玉龙杓兰都能成活并长根和芽，当根长到10
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12cm，芽长到2
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3cm，即可将幼苗进行炼苗移栽到栽培基质中，通过种子非共生萌发方法获得实生苗，为玉龙杓兰的回归、种群复壮奠定基础。
附图说明
[0021]图1野生玉龙杓兰形态图；
[0022]图2玉龙杓兰非共生萌发用果荚形态图；
[0023]图3玉龙杓兰果荚预处理过程图；
[0024]图4玉龙杓兰种子形态图；
[0025]图5玉龙杓兰种子萌发并长出根及芽状态图。
具体实施方式
[0026]下面结合具体实施例和附图对本专利技术作进一步说明，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例中的百分比均表达是重量百分比，即质量分数。
[0027]实施例1
[0028]1.玉龙杓兰人工授粉
[0029]将在哈巴自然保护区玉龙杓兰保护小区内开花的玉龙杓兰植株进行人工异花授粉，记录授粉时间(授粉日期：2021年6月18日)。
[0030]2.玉龙杓兰果荚采收
[0031]采集野外人工授粉145天(授粉日期：2021年6月18日，果荚采收日期：2021年11月10日)后成熟饱满未裂开的果荚作为玉龙杓兰种子非共生萌发的材料，采集好的果荚用牛皮纸袋装着放入4℃的冰箱尽快播种。
[0032]3.玉龙杓兰果荚及种子预处理
[0033]将玉龙杓兰果荚清洗干净，在超净工作台中用无菌水冲洗果荚，用75％无水乙醇
浸泡果荚1分钟，后用0.1％升汞浸泡消毒20分钟，再用大量无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干果荚表面水分，用灭菌手术刀将果荚横切成两段，将所有种子抖落到无菌培养皿中。用无菌水将种子制成种子悬浮液，在悬浮液中加入一滴表面活性剂吐温20备用。
[0034]4.玉龙杓兰非共生萌发培养基配方
[0035]B5基本培养基配方：0.11324g/L无水氯化钙、0.15g/L磷酸二氢钠、2.5g/L硝酸钾、0.134g/L硫酸铵、0.122.09g/L无水硫酸镁、27.8mg/L硫酸亚铁、37.3mg/L乙二胺四乙酸二钠、10.0mg/L硫酸锰、2.0mg/L硫酸锌、0.25mg/L钼酸钠、0.025mg/L氯化钴、3.0mg/L硼酸、0.75mg/L碘化钾、0.025mg/L硫酸铜、10.0mg/L维生素B1、1.0mg/L维生素B6、1.0mg/L烟酸、1g/L肌醇、20g/L蔗糖、7g/L琼脂。
[0036]玉龙杓兰非共生萌发培养基配方为在B5基本培养基的基础上再加上10g/L椰子粉、0.5g/L活性碳粉、0.5mg/L 6
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BA进行改良(后续称为改良B5培养基)。
[0037]玉龙杓兰继代培养基：在改良B5培养基的基础本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)玉龙杓兰人工异花授粉；(2)玉龙杓兰果荚采收：采集野外人工授粉145天后成熟饱满未裂开的果荚作为玉龙杓兰种子非共生萌发的材料；(3)玉龙杓兰果荚及种子预处理；(4)玉龙杓兰非共生萌发培养：所述非共生萌发培养用培养基为改良B5培养基，所述改良B5培养基为在B5基本培养基的基础上再加上10g/L椰子粉、0.5g/L活性碳粉、0.5mg/L 6
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BA；(5)玉龙杓兰继代培养。2.根据权利要求1所述的一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法，其特征在于，步骤(2)中，所述果夹采摘后用牛皮纸装袋，放入4℃的冰箱存储备用。3.根据权利要求1所述的一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法，其特征在于，步骤(3)中，玉龙杓兰果荚预处理步骤为：在超净工作台中用无菌水将玉龙杓兰果荚冲洗干净，用75％无水乙醇浸泡果荚1分钟，后用0.1％升汞浸泡消毒20分钟，再用大量无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干...

【专利技术属性】
技术研发人员：华梅，蒋宏，孔继君，周彬，
申请(专利权)人：云南省林业和草原科学院，
类型：发明
国别省市：