一种生物抑菌制剂及其应用制造技术

本发明专利技术属于制药领域，提供了一种生物抑菌制剂，所述制剂由蚯蚓提取物、核酸酶激活剂和溶菌酶组成，所述蚯蚓提取物的含量为0.01g/L

【技术实现步骤摘要】
一种生物抑菌制剂及其应用


[0001]本专利技术属于制药领域，具体涉及一种生物抑菌制剂、制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]在呼吸系统疾病中，咳嗽、咳痰及喘息为最常见症状，其中由各种呼吸道炎症所致的痰液产生与积聚为其病理变化的中心环节。正常呼吸道粘膜的杯状细胞、粘液腺和浆液腺分泌少量粘液，每日仅咳极少量白色粘液痰以维持其保护机制。当咽喉、气管、支气管或肺发生炎症时，粘膜充血、水肿，粘液分泌增多，有时还有炎性渗出物。在分泌物中总是或多或少地含有来自死亡细胞(上皮细胞及白细胞)和细菌的脱氧核糖核酸(DNA)，DNA通过钙离子与糖蛋白交联，增加痰液粘性。此外，DNA还能抑制内源性蛋白水解酶的活性，使粘液不被分解而保持粘稠状态。粘稠的分泌物粘附在气管粘膜上难以咳出。因此，痰的粘稠度与其所含的酸性粘多糖、粘蛋白和DNA的含量呈正相关。粘稠的痰不易咳出，而停留在呼吸道内的痰如不及时咳出，将会逐渐失去水分而变得更加粘稠，从而刺激呼吸道粘膜而加重咳嗽；粘痰积于呼吸道内可使呼吸道狭窄而致喘息；同时有又制约了抗生素向痰液中的扩散，降低了抗生素的抑菌、杀菌作用。痰液中的病原微生物不易被清除，成为感染源，使呼吸道易于遭受或加重感染，症状加重，并形成恶性循环。因此，袪痰治疗在很多情况下成为疾病整体治疗的关键。
[0003]蚯蚓俗称蚯蚓，是我国传统中药材，其体内含有多种生物活性成分，具有平肝息风、清热止痉、通络、平喘、利尿的功效，在一些哮喘性疾病中常被用到。研究表明它具有降压、抗血栓、平喘、解热镇痛、抗凝、抗菌、等生物学活性免疫调节等作用，其体内存在止咳化痰的活性成分，醇提取物具有抗炎作用。本申请人在前期申请并获得授权的专利“一种蚯蚓中止咳祛痰抗炎抗微生物提取物的制备方法”（CN2017105851615）中改善了蚯蚓提取物的提取方法，提取出具有止咳祛痰抗炎抗微生物作用的提取物（以下简称“蚯蚓提取物”），具有溶菌酶样活性和核酸酶活性。其溶菌酶样活性能抑制和杀灭某些病原微生物，核酸酶活性能降解DNA，使痰液变的稀薄，既有利于药物渗透，增强抗生素的杀菌作用，又使痰液易于咳出。
[0004]但是单独使用蚯蚓提取物的抑菌祛痰效果并不是非常理想，为了进一步发挥其抗菌疗效，还需要开发新的制剂。

技术实现思路

[0005]为了解决机体杀死病原微生物后形成粘稠液体（含DNA的痰液、脓液等）进而影响机体功能的问题，本专利技术提供了一种生物抑菌制剂及其应用。
[0006]本专利技术的第一方面提供了一种生物抑菌制剂，所述制剂由蚯蚓提取物、核酸酶激活剂和溶菌酶组成。
[0007]进一步，所述蚯蚓提取物的含量为0.01g/L
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2g/L，所述核酸酶激活剂的含量为1mM
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1000mM，所述溶菌酶的含量为 0.1 g/L
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100g/L。
[0008]进一步，所述蚯蚓提取物的制备方法包括：
[0009]（1）粗提物的制备工艺：将等体积的pH4.8
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5.4的0.1M NaAC缓冲液加入蚯蚓匀浆后，4℃提取2小时；加入预冷丙酮，使丙酮的终浓度达15%，混匀，4℃放置1小时后，15000g离心15分钟；取上清，加丙酮，使丙酮的终浓度达50%，混匀，4℃放置2小时后，15000g离心15分钟；弃上清，加蒸馏水溶解沉淀，加入1M pH8.0的Tris
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HCl缓冲液，使其终浓度为0.05M，混匀，4℃放置2小时后，15000g离心10分钟；取上清，加预冷丙酮，使丙酮的终浓度达50%， 4℃放置1小时后，15000g离心10分钟；弃上清，沉淀即为粗提物；
[0010]（2）粗提物的纯化工艺：
[0011]1）准备样品：步骤（1）制备的粗提物用pH4.8
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5.2的A液充分溶解后15000g离心10分钟；弃沉淀，上清用22微米的滤膜过滤后用于层析；CM离子交换层析：用A液平衡3
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5个柱体积后直接上样，上样结束后用A液继续冲3
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5个柱体积；用20％的B液做第一次洗脱，洗脱后，用 30％的B液做第二次洗脱，收集30％的洗脱液，用于亲和层析；
[0012]2）亲和层析：将30％的洗脱液用A液按照体积稀释5倍后用于亲和层析上样；用A液平衡层析柱3
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5个柱体积后直接上样；上样结束后A液平衡层析柱3
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5个柱体积，用30％的B液洗脱，所得样品浓缩后即为所述提取物；
[0013]其中，所述浓度百分数均为体积百分含量；所述A液为0.02M NaAC+0.02M NaCl；所述B液为0.02M NaAC+1M NaCl；所述20％的B液、30％的B液为将所述A液和B液混合后得混合液，B液在混合液中的体积百分含量为20％时为20％的B液，B液在混合液中的体积百分含量为30％时为30％的B液。
[0014]所述蚯蚓提取物具有溶菌酶和核酸酶活性，所述溶菌酶不限物种来源，即任何来源的溶菌酶均可用于组方。
[0015]蚯蚓提取物具有溶菌酶和核酸酶双重活性，其溶菌酶活性比较低，但表明溶菌酶和核酸酶可以共存，实验结果表明蚯蚓提取物不会影响溶菌酶的溶菌活性。加入镁离子后，也不会影响溶菌酶的溶菌活性，但镁离子可以提高蚯蚓提取物的核酸酶（DNase）活性。蚯蚓提取物及其激活剂与溶菌酶组合成为生物抑菌制剂，各自发挥作用，具有抑制病原微生物和祛痰的作用，并且可以发生协同作用。
[0016]进一步，所述核酸酶激活剂包括2价金属离子、1价金属离子，所述2价金属离子包括钙离子、镁离子等，所述1价金属离子包括钾离子、钠离子等。
[0017]进一步，所述的制剂剂型包括气体制剂、液体制剂、半固体制剂、固体制剂；
[0018]更进一步，所述气体制剂为喷雾剂，所述液体制剂为注射剂、口腔消毒剂，所述半固体制剂为膏剂，所述固体制剂为片剂。
[0019]所述生物抑菌制剂可通过喷雾形式布施与呼吸道表面，在呼吸道表面发挥抑制或者灭杀部分病原微生物的作用，提高呼吸道表面的固有免疫力。同时可降解黏痰中的DNA，使痰液变的稀薄，易于咳出。该制剂为生物酶混合物制剂，不像普通抗生素那样会产生耐药性。
[0020]进一步，本专利技术所述的生物抑菌制剂的制备方法包括：将蚯蚓提取物、核酸酶激活剂和溶菌酶按照特定浓度混合，并按照实际用途添加所需佐剂，制成所需剂型，如作为溶液剂，制成漱口液或者皮肤消毒剂。
[0021]本专利技术的第二方面提供了本专利技术第一方面所述的生物抑菌制剂在制备卫生用品
和皮肤清洁用品中的应用。
[0022]进一步，所述卫生用品包括但不限于漱口液、湿纸巾、抑菌洗剂。
[0023]进一步，所述皮肤清洁用品包括但不限于固体香皂、沐浴露、洗面奶。
[0024]本专利技术的第三方面提供了本专利技术第一方面所述的生物抑菌制剂在制备预防和/或治疗呼吸道感染性疾病的药物中的应用。
[0025]本专利技术的第四方面提供了本专利技术第一方面所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物抑菌制剂，其特征在于，所述制剂由蚯蚓提取物、核酸酶激活剂和溶菌酶组成。2.根据权利要求1所述的生物抑菌制剂，其特征在于，所述蚯蚓提取物的含量为0.01%
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2g/L，所述核酸酶激活剂的含量为1mM
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100mM，所述溶菌酶的含量为 0.1 g/L
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100g/L。3.根据权利要求1所述的生物抑菌制剂，其特征在于，所述蚯蚓提取物的制备方法包括：（1）粗提物的制备工艺：将等体积的pH4.8
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5.4的0.1M NaAC缓冲液加入蚯蚓匀浆后，4℃提取2小时；加入预冷丙酮，使丙酮的终浓度达15%，混匀，4℃放置1小时后，15000g离心15分钟；取上清，加丙酮，使丙酮的终浓度达50%，混匀，4℃放置2小时后，15000g离心15分钟；弃上清，加蒸馏水溶解沉淀，加入1M pH8.0的Tris
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HCl缓冲液，使其终浓度为0.05M，混匀，4℃放置2小时后，15000g离心10分钟；取上清，加预冷丙酮，使丙酮的终浓度达50%， 4℃放置1小时后，15000g离心10分钟；弃上清，沉淀即为粗提物；（2）粗提物的纯化工艺：1）准备样品：步骤（1）制备的粗提物用pH4.8
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5.2的A液充分溶解后15000g离心10分钟；弃沉淀，上清用22微米的滤膜过滤后用于层析；CM离子交换层析：用A液平衡3
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5个柱体积后直接上样，上样结束后用A液继续冲3
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5个柱体积；用20％的B液做第一次洗脱...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱智强，孙春荣，王秀伟，官臻，杨爱云，
申请(专利权)人：首都儿科研究所，
类型：发明
国别省市：