一种包涵体蛋白的复性方法及用途技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种包涵体蛋白的复性方法及用途。一种包涵体蛋白的复性方法，包括：将包涵体蛋白溶于NTA Buffer溶液中，超声促进杂蛋白的溶解；用6 M的盐酸胍溶液溶解包涵体蛋白，将溶解的包涵体蛋白用3M的盐酸胍进行2倍体积稀释，逐滴滴入复性液进行复性48 h；利用PEG 20000将复性后的液体进行100倍浓缩即可得到可溶性蛋白。本发明专利技术采用蛋白复性的方法将表达量较高的包涵体蛋白进行纯化、溶解和复性，得到纯度较高的可溶性蛋白，能保证抗原的有效性。能保证抗原的有效性。能保证抗原的有效性。

【技术实现步骤摘要】
一种包涵体蛋白的复性方法及用途


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种包涵体蛋白的复性方法及用途。

技术介绍

[0002]原核表达的方法简单，成本低廉且表达量高，表达的蛋白经复性后可直接作为抗原在实验中运用，但表达的蛋白大部分以不溶的包涵体的形式存在。因此，包涵体的溶解和蛋白的复性成为制备有效抗原的关键部分。
[0003]包涵体蛋白的复性通常有稀释、透析、色谱复性等几种方法。透析法通过逐渐降低外透液浓度控制变性剂去除速度，达到包涵体复性的目的，具有操作简单的，不增加体积的优点。透析复性时，蛋白在折叠过程中，分子内的疏水基团暴露在溶液中，多肽链的疏水基团之间相互作用、碰撞，可能形成不正确的折叠而导致聚集。因此，蛋白质复性是蛋白折叠和聚集的平衡，温度升高，则疏水作用力增强，蛋白质折叠速度增加，但会使得二硫键更易错配，更容易发生蛋白聚集，进而大大降低复性蛋白的活性及复性回收率，故透析复性温度一般选择在较低的温度中进行，例如2℃至28℃的温度，尤其是2℃至8℃的低温环境，而对于高于30℃的高温，传统包涵体蛋白的透析复性方法是尽量避本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包涵体蛋白的复性方法，其特征在于，包括：将包涵体蛋白溶于NTA Buffer溶液中，超声促进杂蛋白的溶解；用6 M的盐酸胍溶液溶解包涵体蛋白，将溶解的包涵体蛋白用3 M的盐酸胍进行2倍体积稀释，逐滴滴入复性液中复性48 h；利用PEG 20000将复性后的液体进行100倍浓缩即可得到可溶性蛋白。2.根据权利要求1所述的包涵体蛋白的复性方法，其特征在于，所述的复性液为：每升中含氧化型谷胱甘肽0.308 g，还原型谷胱甘肽1.54 g，EDTA2Na 0.744 g，精氨酸69.68 g，Tris 12.12 g，去离子水； 溶液的pH 8.0。3.根据权利要求1所述的包涵体蛋白的复性方法，其特征在于，所述6 M盐酸胍溶液中含有终浓度为5 mM的DTT。4.一种如权利要求1
‑
3任一项所述包涵体蛋白的复性方法的用途，其特征在于：该方法抗体检测中，用于对抗原重组蛋白包涵体进行复性。5.一种抗体的检测方法，其中抗原为原核表达的重组蛋白，包括以下步骤：（1）利用重组质粒在大肠杆菌BL21感受态细胞中诱导表达，得含目的蛋白的大肠...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜新永，刘长太，李纪兆，陈磊，李晓娟，
申请(专利权)人：青岛润达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：