包含酶和益生菌的组合物以及用于预防或治疗黄斑变性的方法技术

本发明专利技术部分涉及通过共同施用超氧化物歧化酶和益生菌芽孢杆菌属物种孢子、特别是解淀粉芽孢杆菌GF423或GF424突变菌株来预防或治疗主体中的黄斑变性的方法。本发明专利技术还提供了包含超氧化物歧化酶和益生菌芽孢杆菌属物种孢子的药物和/或食品组合物。子的药物和/或食品组合物。子的药物和/或食品组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含酶和益生菌的组合物以及用于预防或治疗黄斑变性的方法
[0001]相关申请本申请要求2020年5月5日提交的美国临时申请号63/020,241的优先权权益，其内容以其整体通过引用并入本文。


[0002]本专利技术提供了通过共同施用超氧化物歧化酶(SOD)酶和益生菌芽孢杆菌属物种孢子来预防或治疗黄斑变性的方法。本文还提供了包含SOD酶和益生菌芽孢杆菌属物种孢子的药物或食品组合物，其用于预防或治疗黄斑变性。
[0003]背景年龄相关性黄斑变性(“AMD”)是指黄斑的慢性、进行性退化病理，其导致中心视力丧失。黄斑变性是50岁以上的成人中的视力丧失和不可逆中心视力丧失的主要原因。全世界超过2500万人患有AMD，并且由于老年群体的快速增长，这些人的数量继续快速增长。此外，过度使用电子设备诸如智能手机和笔记本电脑也引起当今人们黄斑变性的早期发病和患病率增加。
[0004]年龄相关性黄斑变性(AMD)的最重要原因是视网膜色素上皮(RPE)的年龄相关性萎缩和功能下降，所述视网膜色素上皮(RPE)在维持视网膜的内稳态和生理功能方面发挥关键作用，而视网膜在视觉功能中发挥关键作用。此外，布鲁赫膜的年龄相关性异常变化和脉络膜毛细血管的退化也被认为促成AMD的病因。布鲁赫膜作为RPE的基底膜发挥功能，而脉络膜毛细血管位于神经视网膜的最外侧并为发生光转换的感光细胞提供营养和氧气。
[0005]年龄相关性黄斑变性主要分为两类：干性黄斑变性，其特征在于RPE、布鲁赫膜和脉络膜毛细血管的退化和功能下降；以及除了干性黄斑变性的症状以外，涉及脉络膜新生血管(CNV)的湿性黄斑变性。
[0006]湿性黄斑变性发生在5％至10％的具有干性黄斑变性的患者中，并且如果不治疗，可能在数月内导致急性失明。这与干性黄斑变性(其中视力恶化在几年或约十年至二十年的时段内进展)相反。
[0007]在湿性黄斑变性中，视网膜下空间和视网膜下色素上皮(RPE)空间间的氧分压和营养物普遍下降，导致组织缺血并伴有炎性应答。
[0008]此外，在氧化应激和免疫应答中发挥重要作用的补体系统起作用，使得脉络膜新生血管(CNV)特征性地发生在视网膜下空间和视网膜下色素上皮(RPE)空间中，引起浆液性渗漏和出血。
[0009]已知血管内皮细胞、RPE细胞和炎性细胞诸如单核细胞和巨噬细胞参与脉络膜新生血管的发展。
[0010]黄斑变性的潜在治疗包括抗血管生成剂、诸如饰胶蛋白聚糖肽(PCT公开号WO 2005/116066；其通过引用并入)或其缀合物(美国专利申请号2009/0246133A1；其通过引用并入)。然而，此类药剂尚未显示针对脉络膜新生血管或年龄相关性黄斑变性有效。
[0011]湿性AMD的临床护理标准是针对血管内皮生长因子(VEGF)的抗体疗法。尽管其已经有效减少许多患者中的失明，但抗VEGF抗体或其片段(例如阿柏西普)不能完全抑制脉络膜新生血管的形成和生长，部分是由于其作用仅限于新生血管表面上的上皮细胞。此外，该抗体无法有效地防止视网膜的中央凹中的功能性感光细胞的最终丧失，这是由下面的RPE组织的破坏导致的。此外，抗VEGF抗体通过玻璃体内注射施用，导致患者的恐惧和副作用。
[0012]因此，非常需要无需玻璃体内注射的有效治疗黄斑变性的口服组合物和方法。
[0013]概述本专利技术至少部分基于这样的发现：超氧化物歧化酶(SOD)酶与益生菌芽孢杆菌属物种孢子的组合的口服共同施用在预防和治疗黄斑变性(例如湿性黄斑变性)方面比单独的SOD更有效。
[0014]SOD是一种除去活性氧物质的抗氧化酶，所述活性氧物质是AMD的主要原因。尽管过去曾尝试口服施用SOD酶来治疗眼部疾病，但它并没有赋予针对光诱导的氧化应激的保护作用(Sicard等人(2006)Investigative Ophthalmology&Visual Science 47:2089)。类似地，包含富含SOD的甜瓜(mellon)提取物的的口服施用未能针对人类新生血管性AMD的发生进行保护(Hera等人(2009)Investigative Ophthalmology&Visual Science 50:258)。此外，进一步包含麦醇溶蛋白(一种小麦蛋白)(一种已知的乳糜泻的危险因素)，由此限制了可治疗的患者群体。
[0015]单独的SOD在预防和治疗湿性黄斑变性方面令人惊讶地有效。本文提供的进一步包含益生菌芽孢杆菌属物种孢子的组合物和方法在预防和治疗湿性黄斑变性方面甚至更有效。在一些实施方案中，通过与虫胶一起配制，SOD酶在口服施用后被保护免受胃酸的影响。因此，本公开的组合物和方法可以口服递送有效量的活性SOD，由此消除了玻璃体内注射的需要并简化了AMD治疗的治疗方式。此外，在一些实施方案中，本公开的SOD酶源自具有证明的安全性的一般认为安全(GRAS)的细菌。
[0016]继续强调口服利用度和GRAS细菌来源的益生菌，芽孢杆菌属物种孢子对胃蛋白酶和低pH有抗性。此外，芽孢杆菌属物种孢子是在几个国家批准的GRAS益生菌。设想将SOD与益生菌芽孢杆菌属物种孢子组合会增强SOD的治疗效力，并且减少所需的SOD酶的数量。令人惊讶地发现SOD与益生菌孢子的组合治疗比单独的SOD甚至更有效，不仅改进了治疗效力，而且改进了治疗个体主体动物之间的治疗效力的一致性。更重要的是，本文提供的组合物和方法在抑制CNV和恢复视网膜功能方面非常有效。因此，这些包含SOD酶和益生菌芽孢杆菌属物种孢子的方法和口服组合物在预防或治疗湿性黄斑变性方面非常有效。
[0017]附图简要说明图1显示评估包含SOD酶和益生菌芽孢杆菌属物种孢子的药物组合物的体内作用的小鼠研究的示意图。
[0018]图2描绘眼底荧光素血管造影图像(上小图)，其显示施用测试物质(源自解淀粉芽孢杆菌菌株GF424的孢子(GF203)；10U或20U的GF
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101(包含SOD的组合物)；GF101和GF203的组合；20μg阿柏西普(AF；阳性对照)；磷酸盐缓冲盐水(PBS；阴性对照))后CNV病变的变化。底部小图显示了显示CTF值的图。
[0019]图3显示通过对用测试物质施用的激光诱导的CNV小鼠进行的光学相干断层扫描获得的视网膜断层扫描图像。该图显示施用测试物质后CNV病变大小的变化。
[0020]图4显示从通过光学相干断层扫描获得的视网膜断层扫描图像计算的CNV病变的大小，所述光学相干断层扫描是对用测试物质施用的激光诱导的CNV小鼠进行的。
[0021]图5显示对用激光照射且然后随后用测试物质处理的小鼠CNV模型的视网膜电图的结果。
[0022]图6显示用激光照射且然后随后测试物质施用的小鼠CNV模型的视网膜电图b
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波振幅的变化。
[0023]图7显示用激光照射且然后随后用测试物质施用的小鼠CNV模型的组织学分析。组织用苏木精和伊红(H&E)染色以用于观察。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.治疗或预防黄斑变性的方法，其包括向有此需要的主体施用超氧化物歧化酶(SOD)酶和益生菌芽孢杆菌属物种孢子(例如凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、印度芽孢杆菌(Bacillus indicus)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens))。2.权利要求1的方法，其中所述SOD酶是分离的酶和/或是重组酶。3.权利要求1或2的方法，其中所述SOD酶结合锰。4.前述权利要求中任一项的方法，其中所述SOD酶包含：(a)与SEQ ID NO:1中所示的序列具有至少或约85%同一性的氨基酸序列；(b) SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，其中氨基酸残基Asn74和/或Asn137被缺失或取代；(c) SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，其中氨基酸残基Asn74和/或Asn137被Asp74和/或Asp137取代；或(d) SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列。5.前述权利要求中任一项的方法，其中所述SOD酶用虫胶包被。6.前述权利要求中任一项的方法，其中口服、静脉内、眼内或肌肉内施用所述SOD酶和/或所述芽孢杆菌属物种孢子。7.权利要求6的方法，其中口服施用所述SOD酶和/或所述芽孢杆菌属物种孢子。8.前述权利要求中任一项的方法，其中所述SOD酶来自微生物，优选细菌，优选通常被认为对于用作食品和药物安全(GRAS)的细菌，更优选芽孢杆菌属物种细菌。9.前述权利要求中任一项的方法，其中所述SOD酶来自解淀粉芽孢杆菌GF423菌株(KCTC 13222BP)或来自GF424菌株(KCTC 13227BP)。10.前述权利要求中任一项的方法，其中所述益生菌芽孢杆菌属物种孢子通常被认为对于用作食品和批准药物安全(GRAS)，优选解淀粉芽孢杆菌GF423菌株或GF424突变菌株的孢子。11.前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法(i)减少脉络膜新生血管(CNV)；(ii)减少视网膜中的细胞死亡；(iii)减少视网膜中的炎症；(iv)减少视网膜中的缺氧；(v)减少视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)的表达；和/或(vi)增加视网膜功能。12.前述权利要求中任一项的方法，其中所述黄斑变性是年龄相关性黄斑变性(AMD)，优选地其中所述AMD是湿性AMD或新生血管性AMD。13.前述权利要求中任一项的方法，其中所述主体是哺乳动物，优选地，其中所述哺乳动物是人、狗、猫、小鼠或大鼠。14.前述权利要求中任一项的方法，其中所述主体是人。15.前述权利要求中任一项的方法，其中所述SOD酶和所述益生菌芽孢杆菌属物种孢子依次施用于主体。
16.权利要求1
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14中任一项的方法，其中所述SOD酶和所述益生菌芽孢杆菌属物种孢子同时施用于主体。17.权利要求16的方法，其中向所述主体施用包含所述SOD酶和所述益生菌芽孢杆菌属物种孢子的组合物。18.前述权利要求中任一项的方法，其中所述SOD酶和/或所述芽孢杆菌属物种孢子在药物组合物或营养组合物中。19.前述权利要求中任一项的方法，其进一步包括向所述主体施用至少一种治疗黄斑变性的额外药剂。20.权利要求19的方法，其中所述至少一种额外药剂是雷珠单抗或阿柏西普。21.减少或抑制脉络膜新生血管(CNV)的方法，其包括使视网膜与SOD酶和益生菌芽孢杆菌属物种孢子(例如凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、印度芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌)接触。22.权利要求21的方法，其中所述SOD酶是分离的酶和/或重组酶。23.权利要求21或22的方法，其中所述SOD酶结合锰。24.权利要求21
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23中任一项的方法，其中所述SOD酶包含：(a)与SEQ ID NO:1中所示的序列具有至少或约85%同一性的氨基酸序列；(b) SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，其中氨基酸残基Asn74和/或Asn137被缺失或取代；(c) SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，其中氨基酸残基Asn74和/或Asn137被Asp74和/或Asp137取代；或(d) SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列。25.权利要求21
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24中任一项的方法，其中所述SOD酶用虫胶包被。26.权利要求21
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25中任一项的方法，其中所述SOD酶来自微生物，优选细菌，优选通常被认为对于用作食品和药物安全(GRAS)的细菌，更优选芽孢杆菌属物种细菌。27.权利要求21
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26中任一项的方法，其中所述SOD酶来自解淀粉芽孢杆菌GF423菌株(KCTC 13222BP)或来自GF424菌株(KCTC 13227BP)。28.权利要求21
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27中任一项的方法，其中所述益生菌芽孢杆菌属物种孢子通常被认为对于用作食品和批准药物安全(GRAS)，优选解淀粉芽孢杆菌GF423菌株或GF424突变菌株的孢子。29.权利要求21
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28中任一项的方法，其中所述方法(i)减少视网膜中的细胞死亡；(ii)减少视网膜中的炎症；(iii)减少视网膜中的缺氧；(iv)减少视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)的表达；和/或(v)增加视网膜功能。30.权利要求21
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29中任一项的方法，其中所述视网膜是患有黄斑变性的主体的。31.权利要求30的方法，其中所述黄斑变性是年龄相关性黄斑变性(AMD)，优选地其中所述AMD是湿性AMD或新生血管性AMD。32.权利要求21
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31中任一项的方法，其中所述视网膜是哺乳动物的，优选地，其中所述
哺乳动物是人、狗、猫、小鼠或大鼠。33.权利要求32的方法，其中所述哺乳动物是人。34.权利要求21
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33中任一项的方法，其中所述SOD酶和所述益生菌芽孢杆菌属物种孢子依次与所述视网膜接触。35.权利要求21
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33中任一项的方法，其中所述SOD酶和所述益生菌芽孢杆菌属物种孢子同时与所述视网膜接触。36.权利要求35的方法，其中使所述视网膜与包含所述SOD酶和所述益生菌芽孢杆菌属物种孢子的组合物接触。37.权利要求21
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36中任一项的方法，其中所述SOD酶和/或所述益生菌芽孢杆菌属物种孢子在药物组合物中。38.权利要求21
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37中任一项的方法，其进一步包括使所述视网膜与至少一种减少或抑制CNV的额外药剂接触。39.权利要求38的方法，其中所述至少一种额外药剂是雷珠...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘在龟，金义中，金政贤，廉焘营，
申请(专利权)人：杰诺福克斯公司，
类型：发明
国别省市：