一种简易低耗的组织芯片制作方法技术

本发明专利技术公开了一种简易低耗的组织芯片制作方法，具体涉及组织芯片制作技术领域，具体制作步骤如下：步骤一、工具准备；步骤二、受体蜡块的制作；步骤三、供体蜡块的取样；步骤四、供体蜡块的移植和包埋；步骤五、组织芯片蜡块的切片；步骤六、HE染色验证。本发明专利技术所用的组织芯片制作工具简单，操作简单，成本低廉，可以推广至基层医院病理科使用，对提高日常工作的免疫组化质量发挥重要的作用，利用受体蜡块与组织柱上下部分别溶解相融合的技术，保证组织芯排列整齐，较少移位，组织芯和受体位孔融合度好，组织柱周边无空隙，切片不掉片，大大的提高了科学研究效率，节约科研成本，高通量组织芯片更适合科学研究中应用。片更适合科学研究中应用。

【技术实现步骤摘要】
一种简易低耗的组织芯片制作方法


[0001]本专利技术涉及组织芯片制作
，更具体地说，本专利技术涉及一种简易低耗的组织芯片制作方法。

技术介绍

[0002]组织芯片又称组织微阵列，可以将数个组织柱按照一定的规律整齐排列在一起包埋成一个组织块，具有多样本、高通量的优势，无论在科学研究工作中还是临床工作中组织芯片均展现出明显的优势，应用组织芯片检测同一实验指标的蛋白表达，减少了实验样本间误差，同时能够几十倍、上百倍地提高研究的效率，节约实验材料和试剂，同时使实验结果更可靠、更具可比性，在临床工作中，应用组织芯片作为免疫组化对照，实现多个标记物整合在同一个组织芯片上，极大的提高工作效率。
[0003]公开号为CN101294951A的中国专利技术专利公开了一种组织芯片制作方法。此法包括受体蜡块的制作及打孔、待取位点标记及供体蜡块的制作、供体蜡块的取样、阵列位点信息记录、阵列蜡块的处理和切片的步骤，其中用以下步骤制作待取位点标记及供体蜡块：(a)在取材时用针在蜡块的左上象限1/3处打孔做标记，作为XY轴的原点a，(b)以a为原点，分别在显微镜下测出需要取材的位点在水平轴(X轴)和垂直轴(Y轴)上的坐标距离，(c)返回到蜡块上相应的坐标位点做标记，(d)用采样针在供体蜡块欲取出部位上打孔采样，(e)在阵列蜡块(受体蜡块)上准确植入样品。该专利技术能成功实现点对点的精确位点取材，从而避免了以前报道的由于肿瘤异质性所造成的无效芯片偏差。该专利技术还能精确记录每一个芯片位点的信息，便于以后试验。能够有效的建立系列正常和肿瘤组织芯片库。
[0004]综合上述专利，组织芯片的制作方法有很多，常规的组织芯片制作仪存在成本过高，各种组织芯片制作工具制作复杂，不利于结合自己的实际工作需要制作合适的组织芯片。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术提供一种简易低耗的组织芯片制作方法，该方法所用到的制作工具简单、成本低廉，可以面向所有病理科或者科研机构结合自己的实际工作需要制作合适的组织芯片，以解决上述
技术介绍
中提出的技术问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种简易低耗的组织芯片制作方法，具体制作步骤如下：
[0007]步骤一、工具准备，线上或线下购买牛羊用放气穿刺针以及锉刀，利用锉刀将穿刺针的尖头部打磨平，即可获得组织芯片制作的简易工具；
[0008]步骤二、受体蜡块的制作，用两块玻璃和合适的模具制作成方形受体蜡块；
[0009]步骤三、供体蜡块的取样，对日常收集的制作组织芯片专用蜡块进行常规石蜡切片HE染色，由病理医生对HE切片进行阅片评估，初步排除坏死组织多、细胞稀疏、钙化等不合格的供体蜡块，显微镜下选取待穿刺的病灶位置，标记笔圈出病灶范围，以HE染色切片作
为参照，圈出供体蜡块对应的病灶区；
[0010]步骤四、供体蜡块的移植和包埋，供体蜡块放置37℃恒温箱20min，加热软化组织，用穿刺针的针筒垂直穿刺供体蜡块的病灶区，将穿刺的组织柱按照组织芯片的设计顺序注入对应的受体蜡块孔的内部，平整面朝上，此操作均在病理切片包装盒内进行，完成供体蜡块和受体蜡块之间的组织柱移植后，应用合适的包埋模具倒扣于受体蜡块上面，迅速翻转受体组织芯片蜡块，避免移植的组织柱脱落混乱，然后用小镊子将各个孔内的组织柱轻轻按压至底面进行包埋操作；
[0011]步骤五、组织芯片蜡块的切片，重包埋完成的组织芯片蜡块眼观组织柱排列整齐，无偏位现象，组织柱与受体蜡块之间融合好，无空洞和缝隙，各组织柱的底面平整，进行切片操作，切面上观察每个组织点是否已经完全出现，将切片贴在载玻片透明区域的正中间，进行常规烤片；
[0012]步骤六、HE染色验证。
[0013]作为本专利技术技术方案的进一步改进，所述步骤二中待受体蜡块充分凝固后，结合后期实际使用需要确定受体蜡块组织点数，利用标记笔根据组织点数确定受体蜡块的组织排布位点，为了尽量让组织排布整齐，进一步应用标记笔画出相应的网格，之后再进行置放恒温箱的软化操作。
[0014]作为本专利技术技术方案的进一步改进，所述牛羊用放气穿刺针的规格为孔径2.5mm，玻璃板规格为长7cm、宽5cm，受体蜡块制作模具为一种外周长7cm、宽5cm、厚0.3cm的塑料板，中间留空长2.8cm、宽2.3cm、厚0.3cm，组织包埋模具的内空长3cm、宽2.5cm。
[0015]作为本专利技术技术方案的进一步改进，所述步骤四中包埋操作为将包埋模具放置包埋台的热区台面，使得组织柱的底部和受体蜡块融合，并且用镊子再次轻轻按压每一个组织柱，使组织柱统一紧贴于受体蜡块底部，实现包埋的每个组织柱切面平整，待受体蜡块的底面二分之一溶解同时与移植的组织柱相互溶解融合，迅速将包埋模具平移至包埋台冷冻区，至底部石蜡和组织柱凝固，固定各组织柱的位置，此时用吹风机加热组织柱与受体蜡块的上二分之一，实现组织柱上部分与受体蜡块之间的融合，如此重复上述操作一次，上下部分别融合2次，从而保证组织柱与受体蜡块之间充分融合，亦保证了组织柱保持原来的位置，然后进行常规石蜡包埋即可。
[0016]作为本专利技术技术方案的进一步改进，所述步骤五中的切片操作为首先调整好刀片与蜡块之间的角度，然后用10微米的方式粗切蜡块表面至各个组织点均出现，换用新切片刀，调厚度为4微米切片。
[0017]作为本专利技术技术方案的进一步改进，所述软化操作为待受体蜡块充分凝固后，将受体蜡块放置37℃恒温箱20分钟至石蜡稍微软化，用牛羊用放气穿刺针的针筒根据网格线的标记在受体蜡块上垂直打孔，制作完成排列整齐的打孔受体蜡块备用。
[0018]作为本专利技术技术方案的进一步改进，所述步骤六中HE染色验证具体为利用HE染色显微镜下评估每个芯片点的代表性。
[0019]本专利技术的有益效果：
[0020]本专利技术所用的组织芯片制作工具简单，仅需要购买牛羊用放气针以及锉刀，然后使用锉刀将放气针的尖部磨平，针筒穿刺方法制作受体蜡块和穿刺供体组织，然后用打磨平的针将组织推送至受体蜡块对应的空位即可，操作简单，成本低廉，可以推广至基层医院
病理科使用，对提高日常工作的免疫组化质量发挥重要的作用，且受体蜡块和供体蜡块穿刺前均经过37℃温箱加温20
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30分钟，至蜡块软化后穿刺组织，避免穿刺过程中受体蜡块开裂，供体蜡块穿刺的组织硬度大，组织柱中间断裂或者组织柱边缘不平整的现象，利用受体蜡块与组织柱上下部分别溶解相融合的技术，保证组织芯排列整齐，较少移位，组织芯和受体位孔融合度好，组织柱周边无空隙，切片不掉片，且将大量组织样本集中排布在一个组织蜡块上，大大的提高了科学研究效率，节约科研成本，高通量组织芯片更适合科学研究中应用，利于结合自己的实际工作需要制作合适的组织芯片，建立合适的组织芯片样本库。
具体实施方式
[0021]下面将结合本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种简易低耗的组织芯片制作方法，其特征在于，具体制作步骤如下：步骤一、工具准备，线上或线下购买牛羊用放气穿刺针以及锉刀，利用锉刀将穿刺针的尖头部打磨平，即可获得组织芯片制作的简易工具；步骤二、受体蜡块的制作，用两块玻璃和合适的模具制作成方形受体蜡块；步骤三、供体蜡块的取样，对日常收集的制作组织芯片专用蜡块进行常规石蜡切片HE染色，由病理医生对HE切片进行阅片评估，初步排除坏死组织多、细胞稀疏、钙化等不合格的供体蜡块，显微镜下选取待穿刺的病灶位置，标记笔圈出病灶范围，以HE染色切片作为参照，圈出供体蜡块对应的病灶区；步骤四、供体蜡块的移植和包埋，供体蜡块放置37℃恒温箱20min，加热软化组织，用穿刺针的针筒垂直穿刺供体蜡块的病灶区，将穿刺的组织柱按照组织芯片的设计顺序注入对应的受体蜡块孔的内部，平整面朝上，此操作均在病理切片包装盒内进行，完成供体蜡块和受体蜡块之间的组织柱移植后，应用合适的包埋模具倒扣于受体蜡块上面，迅速翻转受体组织芯片蜡块，避免移植的组织柱脱落混乱，然后用小镊子将各个孔内的组织柱轻轻按压至底面进行包埋操作；步骤五、组织芯片蜡块的切片，重包埋完成的组织芯片蜡块眼观组织柱排列整齐，无偏位现象，组织柱与受体蜡块之间融合好，无空洞和缝隙，各组织柱的底面平整，进行切片操作，切面上观察每个组织点是否已经完全出现，将切片贴在载玻片透明区域的正中间，进行常规烤片；步骤六、HE染色验证。2.根据权利要求1所述的一种简易低耗的组织芯片制作方法，其特征在于：所述步骤二中待受体蜡块充分凝固后，结合后期实际使用需要确定受体蜡块组织点数，利用标记笔根据组织点数确定受体蜡块的组织排布位点，为了尽量让组织排布整齐，进一步应用标记笔画出相应的网格，之后再进行置放恒温箱的软化操作。3.根据权利要求1所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：党裔武，陆会平，陈罡，黄志广，农克松，唐邓，李东明，唐玉露，詹彦婷，庞玲玲，邱健峰，方苏杰，
申请(专利权)人：广西医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：