AGK2促进肝癌的免疫治疗的用途制造技术

本发明专利技术属于肿瘤治疗领域，具体涉及AGK2促进肝癌的免疫治疗的用途。本发明专利技术经过体外细胞实验以及体内动物实验的评估，发现AGK2在促进肝癌的免疫治疗方面有非常显著的效果：在小鼠体内实验中，与对照组相比，单独腹腔注射AGK2能够有效抑制肿瘤大小，将AGK2和PD

【技术实现步骤摘要】
AGK2促进肝癌的免疫治疗的用途


[0001]本专利技术属于肿瘤治疗领域，具体涉及AGK2促进肝癌的免疫治疗的用途。

技术介绍

[0002]肝癌即肝脏恶性肿瘤，分为原发性和继发性两大类，是世界上最致命的癌症之一。免疫检查点抑制剂治疗法是目前正在开发的肝癌系统治疗手段的支柱。通过单克隆抗体阻断PD
‑
1从而激活宿主免疫系统的免疫治疗法已被批准用于肝癌的治疗，但仅有20％的患者获得客观缓存期和延长生存率。因此，开发针对肝癌的系统性免疫治疗法是临床上尚未解决的问题。其中，一种潜在的能够改善肝癌临床预后的新策略是靶向新的免疫检查点通路。除了经典PD
‑
1/PD
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L1免疫检查点通路，肝癌还存在全新的免疫逃逸通路，即LAG
‑
3/FGL1通路，目前尚未有使用AGK2靶向FGL1的相关研究和报道。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是为肝癌患者的治疗提供一种新的策略，发现腹腔注射AGK2对小鼠肝癌肿瘤具有显著的抑制作用，并能促进肝癌免疫治疗的效果。
[0004]本专利技术第一个方面公开了AGK2在肝癌治疗中的用途,具体为AGK2在制备用于治疗肝癌的药物中的应用。
[0005]优选地，AGK2在制备用于治疗肝癌的免疫药物中的应用。
[0006]优选地，所述免疫药物为FGL1抑制剂或FGL1降解剂中的一种。
[0007]本专利技术第二个方面公开了AGK2促进肝癌的免疫治疗的用途,AGK2与PD
‑<br/>1抗体联用在制备用于治疗肝癌的药物中的应用；具体地，AGK2和PD
‑
1抗体联用能够显著促进PD
‑
1抗体免疫治疗的效果。
[0008]作为本专利技术的另一个实施例，AGK2与PD
‑
L1抗体联用在制备用于治疗肝癌的药物中的应用；具体地，AGK2和PD
‑
L1抗体联用能够显著促进PD
‑
L1抗体免疫治疗的效果。
[0009]作为本专利技术另一个实施例，AGK2在制备T细胞激活剂中的应用；在体外实验中发现，AGK2能够在体外促进T细胞的激活，从而促进T细胞对肝癌细胞的杀伤能力。
[0010]本专利技术第三个方面公开了上述药物的组合物，药物中包括AGK2及药学上可接受的载体。
[0011]作为本专利技术另一个实施例，药物中包括AGK2、PD
‑
1抗体及药学上可接受的载体。
[0012]作为本专利技术另一个实施例，药物中包括AGK2、PD
‑
L1抗体及药学上可接受的载体。
[0013]优选地，上述药物的剂型为片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂或口服液体剂。
[0014]在一些实施例中，实验中发现AGK2能够降解肝癌细胞的FGL1蛋白。
[0015]在一些实施例中，发现通过腹腔注射AGK2能够在小鼠体内有效抑制肝癌肿瘤的生长。
[0016]与现有技术相比，本专利技术有如下优势：
[0017]提出新的肝癌治疗方案，促进肝癌的免疫治疗疗效：在小鼠体内，与对照组相比，
单独腹腔注射AGK2抑制肝癌肿瘤生长，将AGK2和PD
‑
L1抗体联合使用显著提升了PD
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L1抗体治疗的效果，延长了小鼠的生存期，PD
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L1抗体治疗的小鼠在肿瘤接种后第38天存活率为25％，而AGK2和PD
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L1抗体联合治疗的小鼠在第60天依然有50％的存活。(图3.A，B，C)。
附图说明
[0018]图1为AGK2降解多种肝癌细胞的FGL1蛋白效果图。
[0019]图2为AGK2在体外促进T细胞对肝癌细胞的杀伤效果图。
[0020]图3为AGK2在小鼠体内有效抑制肝癌肿瘤的生长；AGK2和PD
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L1抗体联合使用促进PD
‑
L1抗体免疫治疗的效果。
具体实施方式
[0021]下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0022]实施例中提及的PD
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L1抗体为InVivoMabanti
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mousePD
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L1(B7
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H1)，是肝癌研究领域常用的PD
‑
L1抗体。本领域技术人员也可根据实验或者临床需要选择其他PD
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L1抗体或PD
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1抗体与AGK2联用。
[0023]实施例1AGK2降解多种肝癌细胞系的FGL1蛋白
[0024]在人的肝癌HCCLM3、HuH7、SMMC
‑
7721细胞的培养基中加入20μM的AGK2处理，在8小时后通过Westernblot检测细胞中FGL1的表达水平。结果如图1所示。
[0025]实施例2AGK2在体外促进T细胞对肝癌细胞的杀伤。
[0026]a)CD8+T细胞的体外培养与活化。招募志愿者，获取健康成年人血液30mL,分离人外周血单核细胞(PBMC)。将PBMC置于ImmunoCult
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XFT细胞扩增培养基(含有10ng/mLIL
‑
2)中进行培养，在培养的前3天使用ImmunoCultHumanCD3/CD28/CD2T细胞激活剂(25μL/mL)对PBMC进行激活。培养7天即可获得激活的人CD8+T细胞。如图2A所示。
[0027]b)AGK2处理肝癌细胞。将肿瘤细胞HCCLM3分成对照组和处理组，对照组用完全DMEM培养基培养，处理组使用含有20μMAGK2的完全DMEM培养基培养8小时。
[0028]c)CD8+T细胞与肝癌细胞的共培养。将激活的人CD8+T细胞按照T细胞：肿瘤细胞＝10：1的比例加入培养肿瘤细胞的24孔板中，同时使用DMEM/F12培养基(含有10ng/mLIL
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2和100ng/mLCD
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3)抗体进行共培养。
[0029]d)检测肿瘤细胞的存活率。肿瘤细胞与人CD8+T细胞共培养48小时后，弃去24孔板中的液体，用PBS冲洗细胞碎片。使用0.1％的结晶紫染色液将孔板中存活的肿瘤细胞染色，最后再用33％(v/v)的冰醋酸溶液脱色，获得脱色液在570nm处的吸光值并进行统计分析。结果如图2B，C所示。
[0030]实施例3AGK2在小鼠体内抑制肝癌的生长；AGK2和PD
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L1抗体联合使用促进PD
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L1抗体免疫治疗的效果。
[0031]a)小鼠肝癌模型的构建。将1X106个小鼠肝癌细胞Hepa1
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6通过皮下注射进雌性C57BL/6小鼠(6
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8周龄)右大腿内侧，7天后长出实体肝癌肿瘤。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.AGK2在肝癌治疗中的用途,其特征在于，AGK2在制备用于治疗肝癌的药物中的应用。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，AGK2在制备用于治疗肝癌的免疫药物中的应用。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述免疫药物为FGL1抑制剂或FGL1降解剂中的一种。4.AGK2促进肝癌的免疫治疗的用途,其特征在于，AGK2与PD
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1抗体联用在制备用于治疗肝癌的药物中的应用。5.AGK2促进肝癌的免疫治疗的用途,其特征在于，AGK2与PD
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L1抗体联用在制备用于治疗肝癌的药物中的应用。6.AGK2促进肝癌的免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕雷，林铭恩，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：