抗体-药物缀合物的制造方法技术

抗体

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体
‑
药物缀合物的制造方法


[0001]本专利技术涉及稳定地制造抗体
‑
药物缀合物组合物的方法，所述组合物以恒定比率包含具有不同药物结合位置的抗体
‑
药物缀合物的各异构体。

技术介绍

[0002]抗体
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药物缀合物(ADC)具有与抗体缀合的具有细胞毒性的药物，所述抗体与表达于癌细胞表面的抗原结合并且还能够细胞内化，所述抗体
‑
药物缀合物能够将药物选择性地递送至癌细胞，因此预期引起药物在癌细胞内的积聚并杀死癌细胞(非专利文献1
‑
5)。
[0003]在抗体中，存在四个链间二硫键(disulfides)，其易于被还原，因为它们比其它二硫键更可能接近溶剂，并且它们各自均可用作抗体
‑
药物缀合物中的药物(或药物接头)的结合位点。通过还原抗体中的链间二硫键并将药物分子与产生的硫醇基团缀合，产生每个抗体分子缀合有至多八个药物分子的抗体
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药物缀合物。
[0004]每个抗体分子缀合有八个药物分子的抗体
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药物缀合物即使在抗肿瘤效果方面优异，也可能导致安全性方面的容忍度较低。因此，在一些情况下使用具有小于八的缀合药物分子平均数的抗体
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药物缀合物，以改善安全性方面的容忍度，并且保持治疗功效。具有小于八的缀合药物分子平均数的抗体
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药物缀合物例如可以通过在控制每个抗体分子的药物量的情况下进行反应来获得；然而，反应产物是抗体
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药物缀合物的组合物，其中缀合药物分子的数目为2、4、6和8。因此，即使当抗体
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药物缀合物组合物具有相同的缀合药物分子的平均数时，如果它们在缀合药物分子的数目分布上不同，则它们在治疗功效和安全性方面的容忍度上可能不同。在缀合药物分子平均数约为4的抗体
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药物缀合物组合物的情况中，例如，具有高含量的缀合药物分子数为0和8的抗体
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药物缀合物的情况与具有高含量的缀合药物分子数为4的抗体
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药物缀合物的情况相比，可能具有较低的治疗功效，并且造成较低的安全性方面的容忍度。此外，即使是具有相同缀合药物分子数的抗体
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药物缀合物，也可能根据药物结合位置而在治疗功效和安全性方面的容忍度上不同。因此，在制造抗体
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药物缀合物组合物时，需要缀合药物分子数和结合位置受到控制的抗体
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药物缀合物组合物的制造方法。
[0005]缀合药物分子数和结合位置受到控制的抗体
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药物缀合物组合物的制造方法的已知实例包括：选择性地制造抗体
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药物缀合物的方法，其中通过暂时完全还原抗体中的链间二硫键而使产生的链间巯基的一部分经由再氧化恢复为二硫键，并将药物分子缀合至残留的链间硫醇，从而将四个单元的药物接头缀合至重
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重链间硫醇(专利文献1)；以及通过在低温下还原抗体中的链间二硫键并将药物分子缀合至产生的链间硫醇而选择性地制备其中四个单元的药物接头缀合至重
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轻链间硫醇的抗体
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药物缀合物的方法(专利文献2)。
[0006]引文列表
[0007]专利文献
[0008]专利文献1：国际公开No.2005/084390
[0009]专利文献2：International Publication No.2017/002776
[0010]非专利文献
[0011]非专利文献1：Ducry，L.，et al.，Bioconjugate Chem.(2010)21，5
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13.
[0012]非专利文献2：Alley，S.C.，et al.，Current Opinion in Chemical Biology(2010)14，529
‑
537.
[0013]非专利文献3：Damle N.K.Expert Opin.Biol.Ther.(2004)4，1445
‑
1452.
[0014]非专利文献4：Senter P.D.，et al.，Nature Biotechnology(2012)30，631
‑
637.
[0015]非专利文献5：Howard A.et al.，J Clin Oncol 29：398
‑
405.

技术实现思路

[0016]技术问题
[0017]以高比率含有药物结合位置不同的抗体
‑
药物缀合物的异构体中的特定异构体的抗体
‑
药物缀合物组合物的制造方法是已知的(国际公开No.2005/084390和国际公开No.2017/002776)。但是，从工业角度来看，可能需要稳定地制造以恒定比率包含各异构体而非以高比率包含特定异构体的抗体
‑
药物缀合物组合物的方法。这种抗体
‑
药物缀合物组合物的制造方法是未知的，需要开发工业性优异的制造方法
[0018]问题的解决方案
[0019]本专利技术人为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现，通过使抗体与还原剂反应，经长时间获得具有硫醇基的抗体，可以使具有四个重
‑
轻链间硫醇基的抗体的组成比和具有四个重
‑
重链间硫醇基的抗体的组成比达到稳定值(以下，也称为“还原反应的平衡”)。此外，本专利技术人还发现，通过使药物接头中间体与如此获得的具有硫醇基的抗体反应，可以稳定地制造以恒定比率包含具有不同药物结合位置的抗体
‑
药物缀合物的各异构体的抗体
‑
药物缀合物组合物，从而完成本专利技术。
[0020]因此，本专利技术提供以下的[1]至[56]。
[0021][1]抗体
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药物缀合物组合物的制造方法，其包括：
[0022](i)使抗体与还原剂反应以获得具有硫醇基的抗体的步骤；然后
[0023](ii)使药物接头中间体与步骤(i)中获得的具有硫醇基的抗体反应的步骤，其中
[0024]进行步骤(i)直至具有四个重
‑
轻链间硫醇基的抗体的组成比和具有四个重
‑
重链间巯醇基的抗体的组成比达到稳定值。
[0025][2]根据[1]所述的制造方法，其中步骤(i)进行4小时以上。
[0026][3]根据[1]所述的制造方法，其中步骤(i)进行12小时以上。
[0027][4]根据[1]所述的制造方法，其中步骤(i)进行16小时以上。
[0028][5]根据[1]所述的制造方法，其中步骤(i)进行20小时以上。
[0029][6]根据[1]所述的制造方法，其中步骤(i)进行31小时以上。
[0030][7]根据[1]‑
[6]中任一项所述的制造本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.抗体
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药物缀合物组合物的制造方法，其包括：(i)使抗体与还原剂反应以获得具有硫醇基的抗体的步骤；然后(ii)使药物接头中间体与步骤(i)中获得的具有硫醇基的抗体反应的步骤，其中进行步骤(i)直至具有四个重
‑
轻链间硫醇基的抗体的组成比和具有四个重
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重链间巯醇基的抗体的组成比达到稳定值。2.根据权利要求1所述的制造方法，其中步骤(i)进行4小时以上。3.根据权利要求1所述的制造方法，其中步骤(i)进行12小时以上。4.根据权利要求1所述的制造方法，其中步骤(i)进行16小时以上。5.根据权利要求1所述的制造方法，其中步骤(i)进行20小时以上。6.根据权利要求1所述的制造方法，其中步骤(i)进行31小时以上。7.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的制造方法，其中步骤(i)在0
‑
20℃下进行。8.根据权利要求1
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6中任一项所述的制造方法，其中步骤(i)在5
‑
20℃下进行。9.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的制造方法，其中步骤(i)在5
‑
10℃下进行。10.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的制造方法，其中步骤(i)在约10℃下进行。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的制造方法，其中制造的抗体
‑
药物缀合物组合物中每个抗体分子缀合的药物接头单元的平均数在3.5
‑
4.5的范围内。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的制造方法，其中在制造的抗体
‑
药物缀合物组合物中，缀合了四个药物接头的抗体
‑
药物缀合物的含量为50％以上。13.根据权利要求1
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12中任一项所述的制造方法，其中，四个药物接头与重
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轻链间硫醇缀合的抗体
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药物缀合物的组成比是四个药物接头与重
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重链间硫醇缀合的抗体
‑
药物缀合物的组成比的1.5
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2.5倍。14.根据权利要求1
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13中任一项所述的制造方法，其中还原剂以每分子抗体为1.9
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2.5当量使用。15.根据权利要求1
‑
14中任一项所述的制造方法，其中还原剂是三(2
‑
羧乙基)膦或其盐。16.根据权利要求1
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15中任一项所述的制造方法，其中药物接头中间体具有N
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取代的马来酰亚胺基。17.根据权利要求1
‑
15中任一项所述的制造方法，其中药物接头中间体是下式所示的化合物：[式1]
18.根据权利要求17所述的制造方法，其中制造的抗体
‑
药物缀合物组合物中的药物接头由下式所示：[式2]其中A表示与抗体的连接位置，药物接头经由硫醚键与抗体缀合。19.根据权利要求1
‑
18中任一项所述的制造方法，其中抗体是抗TROP2抗体或抗B7
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H3抗体。20.根据权利要求19所述的制造方法，其中抗体是抗TROP2抗体。21.根据权利要求20所述的制造方法，其中抗TROP2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链包含由SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列组成的CDRH1、由SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列组成的CDRH2和由SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列组成的CDRH3，所述轻链包含由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列组成的CDRL1、由SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列组成的CDRL2和由SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列组成的CDRL3。22.根据权利要求20所述的制造方法，其中抗TROP2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链包含由SEQ ID NO：1的氨基酸残基20
‑
140组成的氨基酸序列组成的重链可变区，所述轻链包含由SEQ ID NO：2的氨基酸残基21
‑
129组成的氨基酸序列组成的轻链可变区。23.根据权利要求20所述的制造方法，其中抗TROP2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO：1的氨基酸残基20
‑
470组成的氨基酸序列组成，所述轻链由SEQ ID NO：2的氨基酸残基21
‑
234组成的氨基酸序列组成。24.根据权利要求23所述的制造方法，其中抗TROP2抗体在重链的羧基末端缺少赖氨酸
残基。25.根据权利要求19所述的制造方法，其中抗体是抗B7
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H3抗体。26.根据权利要求25所述的制造方法，其中抗B7
‑
H3抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链包含由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列组成的CDRH1、由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列组成的CDRH2和由SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列组成的CDRH3，所述轻链包含由SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列组成的CDRL1、由SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列组成的CDRL2和由SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列组成的CDRL3。27.根据权利要求25所述的制造方法，其中抗B7
‑
H3抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链包含由SEQ ID NO：3的氨基酸残基20
‑
141组成的氨基酸序列组成的重链可变区，所述轻链包含由SEQ ID NO：4的氨基酸残基21
‑
128组成的氨基酸序列组成的轻链可变区。28.根据权利要求25所述的制造方法，其中抗B7
‑
H3抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO：3的氨基酸残基20
‑
471组成的氨基酸序列组成，所述轻链由SEQ ID NO：4的氨基酸残基21
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233组成的氨基酸序列组成。29.根据权利要求28所述的制造方法，其中抗B7
...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤均，佐曾利有香，深津大辅，
申请(专利权)人：第一三共株式会社，
类型：发明
国别省市：