脱细胞肌腱基质方法及其用途技术

提供制造脱细胞肌腱基质(DTM)和DTM水凝胶的方法。这些组合物和水凝胶可用于修复肌腱损伤并在一些情况下可通过注射、关节镜手术或作为传统外科修复的辅助材料使用。作为传统外科修复的辅助材料使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】脱细胞肌腱基质方法及其用途
[0001]对相关申请的交叉引用
[0002]本申请是要求2020年6月20日提交的美国临时申请No.63/041,877和2020年6月25日提交的美国临时申请No.63/043,931的权益的国际申请，它们各自通过引用以其整体并入本文。
[0003]领域
[0004]本文所述的公开一般涉及脱细胞肌腱基质，以及制备和使用脱细胞肌腱基质的方法。
[0005]背景
[0006]再生医学是一门新兴学科，已经确定了细胞外基质材料的许多用途。肌腱是连接肌肉和骨骼的纤维结缔组织。肌肉和肌腱之间的连接被称为肌腱连接或肌腱
‑
肌肉插入点；肌腱和骨骼之间的连接被称为骨腱连接。这也称为肌腱插入或肌腱附着点，并且这里的疾病称为肌腱附着点病变。后一种连接，即肌腱和骨骼之间的连接(肌腱胶原纤维插入骨基质之处)是肌腱损伤的常见位置。通常这些损伤是由于过度使用、内源性肌腱变性(肌腱病变)或跌打损伤引起的。
[0007]肌腱损伤导致特征明确的细胞和组织变化，它们共同导致肌腱生物力学特性的改变。例如，Arya和Kulig，J.Appl.Physiol.108：670
‑
675(2010)。过度使用、内源性变性或外伤造成的损伤可能表现为肌腱撕裂。撕裂按严重程度分类，从一级轻微撕裂，到二级中度至重度撕裂，且最后是三级完全撕裂。它们还以其它方式分类，例如部分或完全，在身体的不同解剖区域，如肩袖、跟腱、四头肌腱、二头肌腱等。
[0008]撕裂通常需要手术干预。在一些方面，本公开提供了生产用于修复包括撕裂在内的肌腱损伤的组合物的方法。
[0009]此外，本公开的组合物诱导组织再生，其加速肌腱再生长、肌腱愈合或天然肌腱插入骨的重建。本公开的方法保留存在于细胞外基质中的内源性生长因子并提供用于肌腱再生、愈合和/或修复的组合物。
[0010]概述
[0011]在一个方面，本公开提供了一种生产组合物的方法，该组合物包含基质金属蛋白酶(MMP)和/或胶原酶消化的肌腱组织、抗微生物剂和无菌水性载体溶液。
[0012]在另一个方面，本公开提供了脱细胞肌腱基质(DTM)组合物，其中所述DTM组合物通过包括以下步骤的方法制备：(i)切碎肌腱组织样品；(ii)将切碎的肌腱组织样品脱细胞；(iii)研磨；(iv)消化；(v)停止和中和；(vi)洗涤；和(vii)冻干。
[0013]在一个方面，本公开提供了用于制备保存生长因子的脱细胞肌腱基质的方法。
[0014]在一些实施方案中，本公开提供了脱细胞肌腱基质(DTM)组合物，其包含基质金属蛋白酶(MMP)消化的肌腱组织。在一些实施方案中，本公开提供了脱细胞肌腱基质(DTM)组合物，其包含胶原酶消化的肌腱组织。在一些实施方案中，所述组合物包含胶原蛋白消化物。在一些实施方案中，所述组合物进一步包含抗微生物剂。在一些实施方案中，所述组合物进一步包含无菌水性载体溶液。在一些实施方案中，所述脱细胞肌腱基质(DTM)是保留至
少50％存在于切碎的肌腱组织中的生长因子的蛋白。在一些实施方案中，所述组合物是可模制的。在一些实施方案中，所述组合物能够基本上粘附到解剖形貌。
[0015]在一些实施方案中，本公开还提供了制备脱细胞肌腱基质(DTM)组合物的方法，所述方法包括一个或多个选自以下的步骤：切碎肌腱组织样品；将切碎的肌腱组织样品脱细胞；研磨；消化；停止和中和；洗涤；和冻干。在一些实施方案中，所述方法包括用选自MMP
‑
2、MMP
‑
9、MMP
‑
14或其组合的基质金属蛋白酶(MMP)消化。在一些实施方案中，所述方法包括用本文所述的胶原酶消化。在一些实施方案中，所述方法包括用本文所述的DNA酶脱细胞。
[0016]本公开还提供了脱细胞肌腱基质(DTM)组合物，其中所述DTM组合物通过包括一个或多个选自以下的步骤的方法制备：切碎肌腱组织样品；将切碎的肌腱组织样品脱细胞；消化；和冻干。在一些实施方案中，本公开提供了脱细胞肌腱基质(DTM)组合物，其中所述DTM组合物通过包括一个或多个选自以下的步骤的方法制备：切碎肌腱组织样品；将切碎的肌腱组织样品脱细胞；研磨；消化；停止；中和；洗涤；和冻干。在一些实施方案中，所述脱细胞步骤包括将切碎的肌腱组织样品暴露于包含一种或多种选自离液盐、非离子去污剂、两性离子去污剂、阳离子去污剂、阴离子去污剂或其组合的组分的溶液。在一些实施方案中，所述脱细胞步骤包括将切碎的肌腱组织样品暴露于DNA酶、RNA酶或其组合。在一些实施方案中，所述脱细胞步骤包括将切碎的肌腱组织样品暴露于DNA酶。在一些实施方案中，所述消化步骤包括用包含基质金属蛋白酶(MMP)的溶液消化。在一些实施方案中，所述基质金属蛋白酶(MMP)选自MMP
‑
2、MMP
‑
9、MMP
‑
14或其组合。在一些实施方案中，所述停止和/或中和步骤包括用包含一种或多种蛋白酶抑制剂的溶液停止和/或中和，所述一种或多种蛋白酶抑制剂选自TAPI
‑
0、TAPI
‑
1、TAPI
‑
2、马立马司他(marimastat)、膦酰二肽(phosphoramidon)、木犀草素、PMSF、胃酶抑素A、亮抑酶肽、E
‑
64、原钒酸钠或其组合。
[0017]本公开还提供了一种刺激肌腱再生的方法，所述方法包括一个或多个选自以下的步骤：将本文所述的DTM组合物重悬在药学上可接受的载体中；和将重悬的DTM组合物施用于需要刺激肌腱再生的肌腱部位。在一些实施方案中，重悬的DTM组合物是可模制的。在一些实施方案中，重悬的DTM组合物具有油灰稠度。在一些实施方案中，重悬的DTM组合物是凝胶。在一些实施方案中，重悬的DTM组合物是糊剂。在一些实施方案中，重悬的DTM组合物是触变的。在一些实施方案中，重悬的DTM组合物是粘弹性的。在一些实施方案中，重悬的DTM组合物是可注射的。在一些实施方案中，重悬的DTM组合物是可涂抹的。
[0018]本公开还提供了脱细胞肌腱基质(DTM)水凝胶，其包含本文所述的重悬的DTM组合物，以及1
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乙基
‑3‑
[3
‑
二甲基氨基丙基]碳二亚胺(EDC)和PEG
‑
N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯中的一种或多种。在一些实施方案中，所述水凝胶是可模制的。在一些实施方案中，所述水凝胶具有油灰稠度。在一些实施方案中，所述水凝胶是糊剂。在一些实施方案中，所述水凝胶是触变的。在一些实施方案中，所述水凝胶是粘弹性的。在一些实施方案中，所述水凝胶是可注射的。在一些实施方案中，所述水凝胶是可涂抹的。
[0019]本公开还提供了软铸(soft
‑
cast)脱细胞肌腱基质(DTM)物体，其中所述软铸物体通过包括以下一个或多个步骤的方法制备：将本文所述的脱细胞肌腱基质(D本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种脱细胞肌腱基质(DTM)组合物，其包含基质金属蛋白酶(MMP)消化的肌腱组织，其中当配制在包含一定量的流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有约103Pa至约10
6.5
Pa的复数模量平台。2.权利要求1的组合物，其中所述流体量为约1ml至约7ml。3.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约1毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有约105Pa至约10
6.5
Pa的复数模量平台。4.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约3毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有约10
4.5
Pa至约10
5.5
Pa的复数模量平台。5.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约3毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有约104Pa至约105Pa的复数模量平台。6.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约5毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有约10
3.5
Pa至约105Pa的复数模量平台。7.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约3毫升至约5毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有约10
3.5
Pa至约10
5.5
Pa的复数模量平台。8.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约7毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有约103Pa至约10
4.5
Pa的复数模量平台。9.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约3毫升至约7毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有约103Pa至约10
5.5
Pa的复数模量平台。10.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约1毫升至约7毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有约103Pa至约10
6.5
Pa的复数模量平台。11.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约1毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有在约10
‑1rad/s至约102rad/s的角频率下约105Pa至约10
6.5
Pa的储能模量。12.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约1毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有在约10
‑1rad/s至约102rad/s的角频率下约10
4.5
Pa至约106Pa的损耗模量。13.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约3毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有在约10
‑1rad/s至约102rad/s的角频率下约104Pa至约10
5.5
Pa的储能模量。14.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约3毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有在约10
‑1rad/s至约102rad/s的角频率下约10
3.5
Pa至约105Pa的损耗模量。15.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约5毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所述制剂具有在约10
‑1rad/s至约102rad/s的角频率下约103Pa至约10
5.5
Pa的储能模量。16.权利要求1或权利要求2的组合物，其中当配制在包含约5毫升流体和约1克组合物的制剂中时，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：斯特曼诊所及斯德曼菲利庞研究院，
类型：发明
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