一种针对IgE的抗体或其抗原结合片段以及Fc变体制造技术

本申请涉及一种在中性或碱性条件下特异性结合IgE的抗体或其抗原结合片段，和包含其的药物组合物和试剂盒，还涉及它们在降低或抑制IgE水平或预防和/或治疗受试者的与IgE相关的疾病中的用途。本申请还涉及一种IgG Fc的Fc变体以及包含编码其核苷酸序列的核酸分子和载体，还涉及包含所述IgG Fc的Fc变体的抗体或其抗原结合片段，以及它们在降低或抑制IgE水平或预防和/或治疗受试者的与IgE相关的疾病中的用途。中的用途。

【技术实现步骤摘要】
一种针对IgE的抗体或其抗原结合片段以及Fc变体


[0001]本申请涉及一种特异性结合IgE的抗体或其抗原结合片段以及包含其的药物组合物和试剂盒，还涉及它们在降低或抑制IgE水平或预防和/或治疗受试者的与IgE相关的疾病中的用途。本申请还涉及一种IgG Fc的Fc变体以及包含编码其核苷酸序列的核酸分子和载体，还涉及包含所述Fc变体的抗体或其抗原结合片段，以及它们在降低或抑制IgE水平或预防和/或治疗受试者的与IgE相关的疾病中的用途。

技术介绍

[0002]IgE(免疫球蛋白E)是在I型超敏反应性疾病，如过敏性鼻炎、过敏性咳嗽、哮喘、异位性皮炎、湿疹、急慢性荨麻疹等发病机制中起主要作用的免疫分子。IgE与两种主要受体FcεRI和FcεRII(CD23)相互作用，分别参与不同的免疫过程。其中FcεRI是IgE的高亲和力受体，存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞等免疫细胞表面。该受体在IgE的诱导下交联，引发肥大细胞和嗜碱性粒细胞等活化脱粒，释放组胺、前列腺素、白三烯等生物活性介质，造成局部或全身性炎症反应等生理功能紊乱，即I型超敏反应。IgE与低亲和力受本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体或其抗原结合片段，其在奥马珠单克隆抗体的重链可变区(VH)所含有的VH互补决定区1
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3(CDR1
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3)和/或轻链可变区(VL)所含有的VL互补决定区1
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3(CDR1
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3)中具有一个或几个(例如，2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个，10个)组氨酸残基的置换和/或添加；其中，奥马珠单克隆抗体包含：如SEQ ID NO:14所示的重链可变区中含有的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3；和，如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区中含有的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3；优选地，所述抗体或其抗原结合片段在奥马珠单克隆抗体轻链可变区所含有的VL CDR1和/或VL CDR2中具有一个或几个(例如，2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个，10个)组氨酸残基的置换和/或添加；优选地，所述置换为保守置换；优选地，所述奥马珠单克隆抗体的VH CDR1
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3和/或VL CDR1
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3由Kabat、IMGT或Chothia编号系统定义；优选地，所述奥马珠单克隆抗体的VH CDR1
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3和/或VL CDR1
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3由Kabat编号系统定义；优选地，所述奥马珠单克隆抗体的重链可变区(VH)包含序列为SEQ ID NO:16的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:17的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:18的VH CDR3；轻链可变区(VL)包含序列为SEQ ID NO:19的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:20的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:21的VL CDR3。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其在奥马珠单克隆抗体轻链可变区所含有的VL CDR1中具有一个或几个(例如，2个，3个，4个，5个，6个)组氨酸残基的置换和/或添加；优选地，所述抗体或其抗原结合片段在奥马珠单克隆抗体轻链可变区的第30、31、32、33、35、36位氨基酸残基中具有一个或几个(例如，2个，3个，4个，5个，6个)组氨酸残基的置换；优选地，所述抗体或其抗原结合片段具有选自下列的任意一项或多项特征：(1)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、35和36位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(2)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、33、35和36位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(3)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32和36位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(4)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、33和36位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(5)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31和33位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；或(6)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31和32位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换。3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其在奥马珠单克隆抗体轻链可变区所含有的VL CDR2中具有一个或几个(例如，2个，3个)组氨酸残基的置换和/或添加；优选地，所述抗体或其抗原结合片段在奥马珠单克隆抗体轻链可变区的第55、56、57位
氨基酸残基中具有一个或几个(例如，2个，3个)组氨酸残基的置换和/或添加；优选地，所述抗体或其抗原结合片段具有选自下列的任意一项或多项特征：(1)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(2)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第55、56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(3)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第55和56位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；或(4)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换和1个组氨酸残基的添加。4.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其在奥马珠单克隆抗体轻链可变区所含有的VL CDR1和VL CDR2中各自独立地具有一个或几个(例如，2个，3个，4个，5个，6个)组氨酸残基的置换和/或添加；优选地，所述抗体或其抗原结合片段在奥马珠单克隆抗体轻链可变区所含有的VL CDR1中具有3个，4个，5个或6个组氨酸残基的置换，且在VL CDR2中具有2个或3个组氨酸残基的置换；其中，所述抗体或其抗原结合片段具有选自下列的任意一项或多项特征：(1)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、35、36位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换，并在第56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换和1个组氨酸残基的添加；(2)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、33、35、36、56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(3)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、36、56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(4)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、33、36、56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(5)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、35、36、55、56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(6)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、33、56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(7)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、35、36、55和56位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；(8)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、34、36、55、56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换；或(9)其在如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区的第30、31、32、33、35、36、55、56和57位氨基酸残基中具有组氨酸残基的置换。5.如权利要求1
‑
4任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其在奥马珠单克隆抗体的重链可变区所含有的VH CDR1和/或VH CDR2中具有一个或几个(例如，2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个，10个)组氨酸残基的置换和/或添加；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段在奥马珠单克隆抗体重链可变区的第26，28，30，31，54位氨基酸残基中具有一个或几个(例如，2个，3个，4个，5个)组氨酸残基的置换。6.如权利要求1
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5任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)如SEQ ID NO:22所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:23所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；(b)如SEQ ID NO:30所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:31所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；(c)如SEQ ID NO:38所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:39所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；(d)如SEQ ID NO:46所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:47所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；(e)如SEQ ID NO:54所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:55所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；(f)如SEQ ID NO:62所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:63所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；(g)如SEQ ID NO:70所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:71所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；(h)如SEQ ID NO:78所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:79所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；(i)如SEQ ID NO:86所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:87所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；(j)如SEQ ID NO:94所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:95所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；(k)如SEQ ID NO:102所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:103所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR；或，(l)如SEQ ID NO:110所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR；和/或，如SEQ ID NO:111所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR。7.如权利要求1
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6任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:24的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:25的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:26的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:27的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:28的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:29的VL CDR3；(b)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:32的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:33的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:34的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:35的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:36的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:37的VL CDR3；(c)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:40的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:41的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:42的VH CDR3；和/或，包含下述3
个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:43的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:44的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:45的VL CDR3；(d)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:48的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:49的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:50的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:51的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:52的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:53的VL CDR3；(e)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:56的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:57的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:58的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:59的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:60的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:61的VL CDR3；(f)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:64的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:65的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:66的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:67的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:68的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:69的VL CDR3；(g)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:72的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:73的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:74的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:75的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:76的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:77的VL CDR3；(h)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:80的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:81的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:82的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:83的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:84的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:85的VL CDR3；(i)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:88的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:89的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:90的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:91的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:92的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:93的VL CDR3；(j)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:96的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:97的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:98的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:99的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:100的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:101的VL CDR3；(k)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:104的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:105的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:106的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:107的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:108的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:109的VL CDR3；或，(l)含有下述3个互补决定区(CDRs)的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:112的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:113的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:114的VH CDR3；和/或，包含下述3个互补决定区(CDRs)的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:115的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:116的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:117的VL CDR3。8.权利要求1
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7任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含恒定区；
NO:6的第113位氨基酸残基处置换为苯丙氨酸；优选地，所述Fc变体与IgG Fc相比，对Fcγ受体(FcγR)的亲和力增加；优选地，所述Fc变体具有如SEQ ID NO:8。18.权利要求17所述的Fc变体，其中，所述Fc变体在IgG Fc的氨基酸序列的第267位氨基酸残基置换为谷氨酸和第328位氨基酸残基置换为苯丙氨酸；并且，所述Fc变体在IgG Fc的氨基酸序列的第252，254和256位氨基酸残基处也分别置换为酪氨酸、苏氨酸和谷氨酸；或者，所述Fc变体在对应于SEQ ID NO:6的第52位氨基酸残基置换为谷氨酸，对应于SEQ ID NO:6的第113位氨基酸残基处置换为苯丙氨酸；并且，所述Fc变体在对应于SEQ ID NO:6的第37、39和41位氨基酸残基处也分别置换为酪氨酸、苏氨酸和谷氨酸；优选地，所述Fc变体具有如SEQ ID NO:119所示的序列。19.权利要求12
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18任一项所述的Fc变体，其中，FcγR选自FcγRI，FcγRIIa，FcγRIIb，FcγRIIc，FcγRIIIa，FcγRIIIb，或其任意组合；优选地，所述FcγR源自哺乳动物(例如，鼠，人)；优选地，所述FcγR是人FcγRIIb。20.一种融合蛋白，其包含权利要求11
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19任一项所述的Fc变体。21.分离的核酸分子，其包含编码权利要求11
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19任一项所述的Fc变体或权利要求20所述的融合蛋白的核苷酸序列。22.载体，其包含权利要求21所述的分离的核酸分子；优选地，所述载体为克隆载体或表达载体。23.宿主细胞，其包含权利要求21所述的分离的核酸分子或权利要求22所述的载体。24.制备权利要求11
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19任一项所述的Fc变体或权利要求20所述的融合蛋白，其包括，在允许所述多肽或蛋白表达的条件下，培养权利要求23所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述Fc变体或所述融合蛋白。25.一种抗体或其抗原结合片段，其包含权利要求11
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19任一项所述的Fc变体。26.权利要求25所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体为鼠源化抗体、嵌合抗体、全人源抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。27.一种抗体或其抗原结合片段，其在奥马珠单克隆抗体的重链可变区(VH)所含有的VH CDR1
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3和/或轻链可变区(VL)所含有的VL CDR1
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3中具有一个或几个(例如，2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个，10个)组氨酸残基的置换和/或添加；其中，奥马珠单克隆抗体包含：如SEQ ID NO:14所示的重链可变区中含有的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3；和，如SEQ ID NO:15所示的轻链可变区中含有的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3；优选地，所述抗体或其抗原结合片段在奥马珠单克隆抗体轻链可变区所含有的VL CDR1和/或VL CDR2中具有一个或几个(例如，2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个，10个)组氨酸残基的置换和/或添加；优选地，所述置换为保守置换；并且，所述抗体还包含IgG Fc的Fc变体。28.权利要求27所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述奥马珠单克隆抗体的VH CDR1
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3和/或VL CDR1
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3由Kabat、IMGT或Chothia编号系统定义；
优选地，所述奥马珠单克隆抗体的VH CDR1
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3和/或VL CDR1
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3由Kabat编号系统定义；优选地，所述奥马珠单克隆抗体的重链可变区(VH)包含序列为SEQ ID NO:16的VH CDR1、序列为SEQ ID NO:17的VH CDR2、序列为SEQ ID NO:18的VH CDR3；轻链可变区(VL)包含序列为SEQ ID NO:19的VL CDR1、序列为SEQ ID NO:20的VL CDR2、序列为SEQ ID NO:21的VL CDR3。29.如权利要求27或28所述的抗体或其抗原结合片段，其在奥马珠单克隆抗体轻链可变区所含有的VL CDR1中具有一个或几个(例如，2个，3个，4个，5个，6个...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宏恺，李鑫，李纳，龚南鑫，陈松，
申请(专利权)人：幸康生物医药天津有限公司，
类型：发明
国别省市：