酚妥拉明作为利福平抗菌增效剂的应用制造技术

本发明专利技术属于抗生素增效剂技术领域，公开了酚妥拉明作为利福平抗菌增效剂的应用，本研究基于酚妥拉明和利福平对大肠杆菌抑菌效果微弱(单独作用时杀菌量在0.5log

【技术实现步骤摘要】
酚妥拉明作为利福平抗菌增效剂的应用


[0001]本专利技术涉及抗生素增效剂
，更具体地，涉及酚妥拉明作为利福平抗菌增效剂的应用。

技术介绍

[0002]利福平(Rifampicin)是一种利福霉素类半合成广谱抗菌药物，对多种病原微生物均有抗菌活性。该药对结核分枝杆菌和部分非结核分枝杆菌(包括麻风分枝杆菌等)在宿主细胞内外均有明显的杀菌作用。利福平对需氧革兰氏阳性菌具良好抗菌作用，包括葡萄球菌产酶株及甲氧西林耐药株、肺炎链球菌、其他链球菌属、肠球菌属、李斯特菌属、炭疽杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、厌氧球菌等。对需氧革兰阴性菌如脑膜炎奈瑟球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟球菌亦具高度抗菌活性。利福平对军团菌属作用亦良好，对沙眼衣原体、性病淋巴肉芽肿及鹦鹉热等病原体均具抑制作用。细菌对利福霉素类抗生素有交叉耐药。利福平与依赖DNA的RNA多聚酶的β亚单位牢固结合，抑制细菌RNA的合成，防止该酶与DNA连接，从而阻断RNA转录过程，使DNA和蛋白的合成停止。
[0003]耐药的革兰氏阴性菌在全球范围内造成数百万人感染，是十分严重的公共卫生问题。虽然有几类抗生素对革兰氏阳性菌有效，但革兰氏阴性菌的外膜排除了高相对分子质量的疏水抗生素，使革兰氏阴性菌对几类抗生素具有内在耐药性，包括聚酮类、氨基香豆素和大环内酯类。其中利福平就是一种原本会被外膜排除在外的聚酮类抗生素，对大肠杆菌的抗菌活性微弱。因此，对抗生素增效剂的研究应用越来越多，迫切需要找到一种抗生素增效剂，增强抗生素抗菌活性同时也缓解耐药形势。
[0004]酚妥拉明为α1、α2肾上腺素受体阻滞剂，具有良好的血管扩张作用，且作用较温和，安全性相对较高，在改善肺部组织与心脏微循环方面发挥着积极作用，不仅可提高重症肺炎患者换气功能，亦可有效减轻心脏负荷，缓解机体氧化应激反应与炎症反应，促使重症肺炎引发的肾损伤与心功能衰竭等并发症良好转归，进一步控制病情。有研究报道了酚妥拉明联合抗生素在老年重症肺炎治疗中的可行性和应用价值。
[0005]为了增强利福平对大肠杆菌的抗菌效果，研究利福平增效剂是必不可少的一步。但是目前报道的相关增效剂仍然较少，亟需补充新的利福平增效剂，增加利福平对大肠杆菌的抗菌效果。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的上述缺陷，提供酚妥拉明作为抗生素抗菌的增效剂的新应用。
[0007]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0008]酚妥拉明作为利福平抗大肠杆菌的增效剂的应用。
[0009]本专利技术研究发现酚妥拉明与利福平联用，能够显著增强利福平对大肠杆菌的抑菌能力，因此可以作为利福平对大肠杆菌的增效剂。
[0010]因此，本专利技术还提供酚妥拉明在制备利福平抗大肠杆菌的增效剂的应用。
[0011]优选的，所述大肠杆菌为E.coli BW 25113。
[0012]优选的，利福平的浓度为16μg/mL、8μg/mL。
[0013]优选的，酚妥拉明浓度为0.5mM、0.25mM。
[0014]本专利技术还提供一种非治疗目的的酚妥拉明联合利福平进行杀菌的方法，将酚妥拉明和利福平同时与菌液孵育，孵育温度为37℃，孵育时间为16～18h。
[0015]优选的，上述方法中，所述的大肠杆菌为E.coli BW 25113，利福平的浓度为16μg/mL、8μg/mL；酚妥拉明浓度为0.5mM、0.25mM；菌液浓度为106CFU/mL。
[0016]更优选的，上述方法中，将酚妥拉明和利福平同时与菌液孵育，孵育温度为37℃，孵育时间为24h，同时180rpm震荡孵育。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0018]本专利技术提供了一种与利福平有了协同作用的增效剂，本研究中利福平和酚妥拉明抑菌效果微弱(单独作用时杀菌量在0.5log
‑
1.5log)，将其进行联合作用后具有明显的协同抑菌效果。本专利技术相较于传统的抗生素，能够更高效地杀灭细菌并且减少抗生素的使用。
附图说明
[0019]图1为实施例3中抗菌的统计结果图。
具体实施方式
[0020]下面对本专利技术的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本专利技术，但并不构成对本专利技术的限定。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0021]下述实验例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
[0022]所用的利福平(Rifampicin,RIF)为上海源叶品牌，MW为822.94，纯度为93％；
[0023]所述甲磺酸酚妥拉明(Phentolamine,PE)为Macklin(麦克林)品牌，MW为377.456，纯度为98％。
[0024]判定原则：如实验组降低的菌量在单独利福平处理和单独酚妥拉明处理菌量下降的基础上再降低2个对数值，即表明利福平与酚妥拉明具有协同抑菌作用。
[0025]实施例1酚妥拉明和利福平对大肠杆菌BW25113的MIC测定
[0026]1、实验材料：
[0027](1)试验：将经高压灭菌的MH肉汤冷却备用。
[0028](2)利福平：上海源叶品牌，MW为822.94，纯度为93％；
[0029]酚妥拉明：Macklin(麦克林)品牌，MW377.456，纯度为98％；
[0030]试验菌株：大肠杆菌野生菌株BW 25113(实验室保藏)。
[0031]2、试验前的准备工作：
[0032](1)将大肠杆菌野生菌株BW 25113传代于琼脂培养基上，培养至合适大小。
[0033](2)用精密天平称取利福平粉末0.0551g在离心管中，加入10mL甲醇进行溶解，利福平浓度为5120μg/mL，涡旋混匀进行过滤，将滤液通过直径0.22μm的滤膜进行物理除菌，
分装至灭菌的离心管中，置于
‑
20℃冰柜，避光保存。
[0034](3)用精密天平称取甲磺酸酚妥拉明粉末0.3081g在离心管中，加入10mL纯水进行溶解，酚妥拉明溶液浓度为80mM，震荡混匀进行过滤，将滤液通过直径0.22μm的滤膜进行物理除菌，分装至灭菌的离心管中，置于
‑
20℃冰柜，避光保存。
[0035]3、MIC测定实验：
[0036](1)接种大肠杆菌野生菌株BW 25113单菌落在装有4mL MH肉汤的离心管中，放入37℃摇床中180rpm震荡4h后取出离心管；
[0037](2)使用MH肉汤将孵育后的大肠杆菌稀释到100倍，约为106CFU/mL，备用；
[0038](3)取无菌96孔板，第1孔加180μL MH肉汤培养基，第2
‑
12孔加入100μL MH肉汤培养基；
[0039](4)在第1孔加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.酚妥拉明作为利福平抗大肠杆菌的增效剂的应用。2.酚妥拉明在制备利福平抗大肠杆菌的增效剂的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述大肠杆菌为E.coli BW 25113。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，利福平的浓度为16μg/mL、8μg/mL。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，酚妥拉明浓度为0.5mM、0.25mM。...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙坚，袁兆琪，崔泽华，何慧灵，黄馨怡，任昊，赵东豪，周宇峰，方亮星，于洋，廖晓萍，刘雅红，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：