一种药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法技术

本发明专利技术属于药物检测技术领域，公开了一种药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，依据高分辨质谱提供的分子式以及二级质谱裂解碎片鉴定化学成分，选择[M

【技术实现步骤摘要】
一种药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法


[0001]本专利技术属于药物检测
，尤其涉及一种药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法。

技术介绍

[0002]目前，中药秦艽为龙胆科龙胆属植物秦艽Gentiana macrophylla Pall.，麻花秦艽G.straminea Maxim.，粗茎秦艽G.crassicaulis Duthie ex Burk.或小秦艽G.dahurica Fisch.的干燥根，在我国用药历史悠久。许多著名医学著作中也有记载。秦艽最早描述见《神农本草经》，被列为中品，用于治疗邪气寒淫风痹肢节疼痛，下水利小便。《本草纲目》以产地及形态特征对秦艽的药名做了描述：“秦艽出秦中，以根作罗纹交纠者佳，故名秦艽、秦糺。”说明该药材的道地产区为陕西等地。现代研究表明，秦艽中主要含有环烯醚萜类、三萜类、黄酮类等化学成分，在抗炎镇痛、保护肝脏、抗氧化、保护心脏、抗流感病毒等方面具有很好的生物活性。
[0003]近年来，随着秦艽药用价值不断地被发现，其市场的需求量也逐年增加，秦艽原植物人工采挖现象严重，2020年版《中国药典》收载的秦艽品种均已处于濒危状态，亟需寻找秦艽替代资源。许多药典未收载的龙胆属秦艽组植物在地方临床用药及民族药中被当作秦艽来使用。粗壮秦艽G.robusta King ex Hook.f.为藏药“解吉嘎保”的原植物来源之一，在藏区用药历史悠久，用于治疗风湿关节病，各地藏医所用的“解吉”均为龙胆属秦艽组植物，主要治疗“赤巴病”。粗壮秦艽主要分布于我国西藏南部地区，资源量丰富。形态学及基因序列等研究表明，《中国药典》中的秦艽基原植物麻花艽可能是粗壮秦艽的母系来源。因此推测，粗壮秦艽与药典麻花艽可能具有相似成分和功效，可能成为秦艽的良好替代资源。为此，有必要对二者进行系统的化学比较，评价二者的成分谱异同以及主要成分的含量。
[0004]环烯醚萜类化合物在龙胆属植物中分布广泛，研究表明，此类化合物在保肝、抗炎、神经系统保护、抗癌等方面具有较好作用。虽然有报道表明，粗壮秦艽药材中含有马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苷及獐芽菜苦苷等环烯醚萜苷，但尚无系统的化学成分谱分析及含量测定的研究报道，有必要对两种药材的成分差异进行研究。天然植物药材成分复杂，结构多样，单一的检测手段建立的指纹图谱不能全面评价其质量，色谱
‑
质谱联用技术可实现对化合物高通量识别，UPLC
‑
TOF
‑
MS联用技术可有效解决天然药物现代化分析中组分复杂的问题。
[0005]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前尚无系统的粗壮秦艽药材中化学成分谱分析及含量测定的相关技术方案的报道。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，尤其涉及一种藏药粗壮秦艽和麻花艽的成分谱及4种环烯醚萜苷的含量测定方法。
[0007]本专利技术是这样实现的，一种药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法包括：依据高分辨质谱提供的分子式以及二级质谱裂解碎片鉴定化学成分，选择[M
‑
H]‑
作为马钱苷酸的专属离子、[M+HCOO]‑
作为专属离子对獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷进行含量测定，采用SPSS 22.0软件对不同批次药材中化学成分谱进行比较分析；建立藏药粗壮秦艽和麻花艽药材的UPLC
‑
TOF
‑
MS成分图谱，指认38个化学成分，包括三萜类10个、黄酮类4个、环烯醚萜类21个、其他类成分3个，在药材中马钱苷酸的质量分数为0.51％～0.90％、龙胆苦苷的质量分数为1.63％～2.31％、獐牙菜苦苷的质量分数为0.08％～0.21％、獐牙菜苷的质量分数为0.09％～0.28％。
[0008]进一步，药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法包括以下步骤：
[0009]步骤一，分别确定色谱条件和质谱条件；
[0010]步骤二，进行UPLC
‑
TOF
‑
MS指纹图谱分析；
[0011]步骤三，马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的含量测定。
[0012]进一步，步骤一中的色谱条件为：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18，2.1mm
×
100mm，1.7μm；流动相：0.1％甲酸A
‑
乙腈B；梯度洗脱：0～5min，95％A；5～10min，95％～88％A；10～15min，88％～72％A；15～20min，72％～45％A；20～25min，45％～20％A；25～30min，20％A；流速：0.4mL
·
min
‑1；柱温：40℃；进样量0.5μL。
[0013]进一步，步骤一中的质谱条件为：电喷雾离子源ESI，负离子检测模式下扫描范围m/z100～1200；毛细管电压为2.5kV，喷嘴电压40V，干燥气流速800L/h，离子源温度120℃，碰撞气体：氩气，碰撞能20～50eV，采用Lock Mass通路对采集的实验数据进行实时校正。
[0014]进一步，步骤二中的UPLC
‑
TOF
‑
MS指纹图谱分析包括：
[0015](1)供试品溶液配制
[0016]分别取各批次秦艽样品粉末，过60目筛，精密称取，每份0.5g，分别置于锥形瓶中；加70％甲醇25mL，精密称定质量，超声处理(500w，40kHz)30min；冷却，摇匀，补足质量；取上清液加70％甲醇稀释200倍经0.22μm滤膜滤过，得供试品溶液。
[0017](2)粗壮秦艽和麻花艽药材UPLC
‑
TOF
‑
MS成分图谱
[0018]在色谱及质谱条件下，测定负离子模式下的总离子流图，依据高分辨质谱提供的相对分子质量从指纹图谱中鉴定出38个化合物，包括三萜类10个、黄酮类4个、环烯醚萜类21个、其他类成分3个。根据TIC中对应时间的峰面积，高分辨质谱提供的相对分子质量，构建12批药材的成分图谱。
[0019]进一步，(1)中的超声处理频率为500w，40kHz。
[0020]进一步，(2)中的12批药材的成分图谱中，秦艽中含量高的化学成分是4、8、11、23、26、37号，其中以龙胆苦苷11号的含量最高，且峰4为马钱苷酸、峰8为獐芽菜苦苷、峰11为龙胆苦苷、峰14为獐芽菜苷。
[0021]进一步，步骤三中的马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量测定包括：
[0022](1)混合对照品溶液配制
[0023]分别取马钱苷酸对照品、獐芽菜苦苷对照品、龙胆苦苷对照品、獐牙菜苷对照品，精密称定，甲醇溶解，分别制成马钱苷酸1.3mg/mL、獐芽菜苦苷1.3mg/mL、龙胆苦苷1.36mg/mL、獐牙菜苷1.36mg/mL对照品储备液。分别取上述储备液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，其特征在于，药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法包括：依据高分辨质谱提供的分子式以及二级质谱裂解碎片鉴定化学成分，选择[M
‑
H]
‑
作为马钱苷酸的专属离子、[M+HCOO]
‑
作为专属离子对獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷进行含量测定，采用软件对不同批次药材中化学成分谱进行比较分析；建立藏药粗壮秦艽和麻花艽药材的UPLC
‑
TOF
‑
MS成分图谱，指认38个化学成分，包括三萜类10个、黄酮类4个、环烯醚萜类21个、其他类成分3个，在药材中马钱苷酸的质量分数为0.51％～0.90％、龙胆苦苷的质量分数为1.63％～2.31％、獐牙菜苦苷的质量分数为0.08％～0.21％、獐牙菜苷的质量分数为0.09％～0.28％。2.如权利要求1所述的药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，其特征在于，药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法包括以下步骤：步骤一，分别确定色谱条件和质谱条件；步骤二，进行UPLC
‑
TOF
‑
MS指纹图谱分析；步骤三，马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的含量测定。3.如权利要求2所述的药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，其特征在于，步骤一中的色谱条件为：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18，2.1mm
×
100mm，1.7μm；流动相：0.1％甲酸A
‑
乙腈B；梯度洗脱：0～5min，95％A；5～10min，95％～88％A；10～15min，88％～72％A；15～20min，72％～45％A；20～25min，45％～20％A；25～30min，20％A；流速：0.4mL
·
min
‑1；柱温：40℃；进样量0.5μL。4.如权利要求2所述的药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，其特征在于，步骤一中的质谱条件为：电喷雾离子源ESI，负离子检测模式下扫描范围m/z100～1200；毛细管电压为2.5kV，喷嘴电压40V，干燥气流速800L/h，离子源温度120℃，碰撞气体：氩气，碰撞能20～50eV，采用LockMass通路对采集的实验数据进行实时校正。5.如权利要求2所述的药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，其特征在于，步骤二中的UPLC
‑
TOF
‑
MS指纹图谱分析包括：(1)供试品溶液配制分别取各批次秦艽样品粉末，过60目筛，精密称取，每份0.5g，分别置于锥形瓶中；加70％甲醇25mL，精密称定质量，超声处理(500w，40kHz)30min；冷却，补足质量；摇匀，取上清液加70％甲醇稀释200倍经0.22μm滤膜滤过，得供试品溶液。(2)粗壮秦艽和麻花艽药材UPLC
‑
TOF
‑
MS成分图谱在色谱及质谱条件下，测定负离子模式下的总离子流图，依据高分辨质谱提供的相对分子质量从指纹图谱中鉴定出38个化合物，包括三萜类10个、黄酮类4个、环烯醚萜类21个、其他类成分3个；根据TIC中对应时间的峰面积，高分辨质谱提供的相对分子质量，构建12批药材的成分图谱。6.如权利要求5所述的药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，其特征在于，(1)中的超声处理频率为500w，40kHz。7.如权利要求5所述的药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，其特征在于，(2)中的12批药材的成分图谱中，秦艽中含量高的化学成分是4、8、11、23、26、37号，其中以龙胆苦苷11号的含量最高，且峰4为马钱苷酸、峰8为獐芽菜苦苷、峰11为龙胆苦苷、峰14为獐芽菜苷。
8.如权利要求2所述的药材成分谱及4种环烯醚萜苷含量的测定方法，其特征在于，步骤三中的马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量测定包括：(1)混合对照品溶液配制分别取马钱苷酸对照品、獐芽菜苦苷对照品、龙胆苦苷对照品、獐牙菜苷对照品，精密称定，甲醇溶解，分别制成马钱苷酸1.3mg/mL、獐芽菜苦苷1.3...

【专利技术属性】
技术研发人员：范蓓蓓，熊波，夏云，
申请(专利权)人：上海市宝山区中西医结合医院上海中医药大学附属曙光医院宝山分院，
类型：发明
国别省市：