一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法及应用技术

本发明专利技术提供一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法，包括如下步骤：S1、利用种子介导法制得Au NRs溶液；S2、制备Au NRs阵列，在Au NRs阵列上修饰DSP，并进行DA孵育，使得Au NRs阵列功能化，进而制得SERS芯片；同时本发明专利技术将制得的便携式芯片用于快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶，利用SERS技术以黑色素生物学机制关键通路作为终点，建立了新的黑色素瘤的早期筛查与检测的方法。瘤的早期筛查与检测的方法。瘤的早期筛查与检测的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法及应用


[0001]本专利技术属于生化分析
，具体涉及一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法及应用。

技术介绍

[0002]肿瘤标志物是指由肿瘤组织产生的存在于肿瘤组织本身或分泌至血液及其他体液中，或因肿瘤细胞刺激而由宿主细胞产生且含量明显异常的一大类物质。肿瘤标志物在肿瘤的临床诊断和治疗中占有重要地位，通过对血液或体液中肿瘤标志物存在或含量的检测，不仅可用于肿瘤的普查、早期诊断、辅助诊断、良恶性鉴别和临床分期，同时对监测疗效、判断预后、预测肿瘤的复发和转移也具有重要价值。
[0003]黑色素瘤是一种源自黑色素细胞的高度恶性皮肤癌，这种肿瘤具有快速和远处转移的能力，会导致患者的临床结果不佳，如果不及早诊断和治疗，它比其他类型的皮肤癌更危险。在黑色素瘤细胞中过表达的酪氨酸酶是黑色素瘤的重要生物标志物，是黑色素瘤研究的重要热点。酪氨酸酶是一种含铜氧化酶，可将单酚或邻苯二酚转化为相应的邻醌，是从酪氨酸生物合成黑色素的限速酶。酪氨酸酶也是一种细胞质的黑素细胞分化蛋白，通过介导酪氨酸氧化成部分醌来启动黑色素的形成。
[0004]在临床肿瘤诊断中肿瘤标志物的检测一般采用化学发光方法，该方法检查费用相对昂贵，耗时长，需配备专业的仪器和专业的技术人员，操作性差，给临床患者的长期跟踪检测造成困扰。因此准确、快速、便捷的操作是目前临床上亟待解决的问题。表面增强拉曼散射是在传统的拉曼散射的基础上发展起来的一种技术，借助分子在SERS活性基底的吸附可将分子本身的拉曼信号显著增强，在一些特殊体系中，SERS的增强因子可以达到10
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，使单分子检测成为可能。表面增强拉曼散射技术克服了常规拉曼光谱存在的灵敏度低、易受荧光干扰等缺点，不仅能检测吸附在金属表面单分子层和亚单分子层的分子，而且能提供丰富的分子结构信息，是一种很有发展潜力和应用前景的光谱分析技术。
[0005]针对肿瘤标志物的检测常采用的SERS芯片为蛋白芯片，通过靶分子和捕捉分子相互作用来监测蛋白分子之间的相互作用，将拉曼技术与蛋白芯片相结合，不但可以增加拉曼检测的灵敏度，同时也将蛋白芯片的灵敏度大大提高，目前，市面上还未出现关于利用贵金属纳米结构的电磁场增强效应进行肿瘤标志物的检测。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种快速检测黑色素瘤生物标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法，利用Au NRs阵列作为表面增强拉曼基底，借助修饰在Au NRs阵列上的DSP和修饰在Ag NPs上的4
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MPBA共同多巴胺，在与DA具有更高亲和力的酪氨酸酶的存在下，诱导金纳米粒子与银纳米粒子分离，从而减弱4
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巯基苯基硼酸的信号，实现对酪氨酸酶的快速检测，并将该方法制得的便携式芯片用于黑色素瘤癌症的早期筛查与检测。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]本专利技术的目的之一在于一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法，包括如下步骤：
[0009]S1、利用种子介导法制得Au NRs溶液；
[0010]S2、制备Au NRs阵列，在Au NRs阵列上修饰DSP，并进行DA孵育，使得Au NRs阵列功能化，进而制得SERS芯片。
[0011]进一步的，所述步骤S1中Au NRs溶液的制备方法如下：在50℃条件下，将7.0
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8.5g CTAB和1.0
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1.5g油酸钠加入250
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450mL蒸馏水中，搅拌至温度降至30℃，逐一加入4mM硝酸银溶液、1mM氯金酸溶液、37％wt盐酸、64mM抗坏血酸溶液和金种子溶液，搅拌后在30℃中静置30
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48h，得Au NRs溶液。
[0012]进一步的，所述4mM硝酸银溶液、1mM氯金酸溶液、37％wt盐酸、64mM抗坏血酸溶液和金种子溶液的体积比为18：250：2.1：1.25：0.8。
[0013]进一步的，所述金种子溶液的制备方法如下：取10mM HAuCl4水溶液、10mM硼氢化钠溶液、0.1M CTAB溶液混合搅拌30min后，30℃水浴下静置1
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2h，得金种子溶液。
[0014]进一步的，所述10mM HAuCl4水溶液、10mM硼氢化钠溶液和0.1M CTAB溶液的体积比为0.025：0.6：1。
[0015]进一步的，所述步骤S2中Au NRs阵列的制备方法如下：将石英片置于乙醇中超声8
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10min，取出干燥后备用；将带有聚乙烯吡咯烷酮包裹的Au NRs与二氯甲烷和水充分混合，随后加入正己烷，静置分层后，用石英片浸入液体中，利用提拉法将金膜附在硅片上并取出石英片，形成表面带有金纳米颗粒的石英片。
[0016]进一步的，所述步骤S2中Au NRs阵列功能化的方法如下：将Au NRS阵列分别用水和乙醇洗过后浸泡在DSP溶液中，修饰时间为12
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14h，DA孵育时间为45
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55min。
[0017]本专利技术的目的之二在于提供一种如上述制备方法制得的便携式芯片。
[0018]本专利技术的目的之三在于将便携式芯片在快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶中的应用。
[0019]本专利技术的目的之四在于提供一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的方法，具体包括如下步骤，
[0020](1)制备Ag NPs
‑4‑
MPBA溶液，作为检测黑色素瘤癌症生物标志物酪氨酸酶的信号探针；
[0021](2)配制不同浓度的络氨酸酶与如权利要求1至8任一所述制备方法制得的便携式SERS芯片在室温下共培养，蒸馏水洗涤、干燥后，滴入经过步骤(1)制得的Ag NPs
‑4‑
MPBA溶液，检测相应情况下的SERS光谱，记录SERS信号强度，以SERS信号下降幅度为纵坐标，酪氨酸酶浓度为横坐标作出相对应的工作曲线；
[0022](3)将不同浓度的络氨酸酶与血清样品混合，将如权利要求1至8任一所述制备方法制得的SERS芯片浸泡在含络氨酸酶的血清中，再在SERS芯片上滴Ag
‑4‑
MPBA溶液，进行SERS检测；
[0023]其中，所述步骤(1)中Ag NPs
‑4‑
MPBA溶液的制备包括如下步骤：
[0024]A1、将AgNO3溶液在剧烈搅拌下加热至沸腾状态，加入还原剂柠檬酸钠溶液，使AgNO3溶液保持沸腾状态，继续搅拌60
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70min后，室温冷却得到银纳米胶体Ag NPs；
[0025]A2、在银纳米胶体Ag NPs中加入4
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MPBA信号分子，搅拌1
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2h，得到Ag NPs
‑4‑
MPBA
溶液，将该溶液离心洗涤后重悬于水中。
[0026]相较于现有技术，本专利技术的有益效果本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、利用种子介导法制得Au NRs溶液；S2、制备Au NRs阵列，在Au NRs阵列上修饰DSP，并进行DA孵育，使得Au NRs阵列功能化，进而制得SERS芯片。2.如权利要求1所述的一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法，其特征在于，所述步骤S1中Au NRs溶液的制备方法如下：在50℃条件下，将7.0
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8.5g CTAB和1.0
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1.5g油酸钠加入250
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450mL蒸馏水中，搅拌至温度降至30℃，逐一加入4mM硝酸银溶液、1mM氯金酸溶液、37％wt盐酸、64mM抗坏血酸溶液和金种子溶液，搅拌后在30℃中静置30
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48h，得Au NRs溶液。3.如权利要求2所述的一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法，其特征在于，所述4mM硝酸银溶液、1mM氯金酸溶液、37％wt盐酸、64mM抗坏血酸溶液和金种子溶液的体积比为18：250：2.1：1.25：0.8。4.如权利要求3所述的一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法，其特征在于，所述金种子溶液的制备方法如下：取10mM HAuCl4水溶液、10mM硼氢化钠溶液、0.1M CTAB溶液混合搅拌30min后，30℃水浴下静置1
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2h，得金种子溶液。5.如权利要求4所述的一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法，其特征在于，所述10mM HAuCl4水溶液、10mM硼氢化钠溶液和0.1MCTAB溶液的体积比为0.025：0.6：1。6.如权利要求1所述的一种快速检测肿瘤标志物酪氨酸酶的便携式芯片制备方法，其特征在于，所述步骤S2中Au NRs阵列的制备方法如下：将石英片置于乙醇中超声8
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10min，取出干燥后备用；将带有聚乙烯吡咯烷酮包裹的Au NRs与二氯甲烷和水充分混合，随后...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈静波，刘振华，李立帜，张桂枫，李德育，苏志雄，陈巧，林鑫，
申请(专利权)人：福建省立医院，
类型：发明
国别省市：