乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵方法技术

本发明专利技术涉及益生菌发酵技术领域，尤其涉及一种乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵方法，乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌之间的拮抗作用主要源于其代谢产物中含有的过氧化氢，重组细胞中由于包含过氧化氢酶基因，在共同发酵培养时，重组细胞中的过氧化酶基因得到表达，使代谢产物中持续产生的过氧化氢得到降解，从而达到抑制乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌之间的拮抗作用。李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌之间的拮抗作用。

【技术实现步骤摘要】
乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵方法


[0001]本专利技术涉及益生菌发酵
，尤其涉及一种乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵方法。

技术介绍

[0002]益生菌是指一类可通过改善肠道菌群平衡而对人的健康产生有利影响的活性微生物添加剂，已被广泛用于食品生产中。
[0003]由于益生菌活菌期时间短，在加工和贮藏过程中保证生物活性是其产品面临的巨大挑战。
[0004]通过多菌种混合发酵，利用菌种之间的优势互补，即利用其中一株菌的代谢物刺激另一株菌的生长代谢，从而产生单菌发酵无法获得的产物及高活菌数。但是菌种之间并非所有益生菌混合发酵都会产生协同作用，例如乳双歧杆菌对鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌具有拮抗作用。
[0005]因此，如何降低乳双歧杆菌对鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌的拮抗作用，使三者能够协同发酵，成为亟需解决的技术问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是：如何降低乳双歧杆菌对鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌的拮抗作用，使三者能够协同发酵。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0008]一种乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵方法，包括以下步骤：
[0009]构建重组质粒，所述重组质粒包含NW_019091213.1基因序列；
[0010]将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞，获得重组细胞；
[0011]重组细胞、乳双歧杆菌(CGMCC No.14536)、鼠李糖乳杆菌(CGMCCNo.14410)和嗜酸乳杆菌(CGMCC No.4649)共同接种于发酵培养基中；所述发酵培养基添加有葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和甜味剂，添加无机盐；所述葡萄糖的加入量为重量g/体积ml比0.1～1.5％，蛋白胨的加入量为重量g/体积ml比0.05～1％，酵母膏的加入量为重量g/体积ml比0.01～0.2％，酵母粉的加入量为重量g/体积ml比0.01～0.1％；所述的无机盐为K2HPO4·
3H2O0.1g/100ml、KH2PO40.1g/100ml、FeSO4·
7H2O5.0mg/100ml、ZnSO4·
7H2O4.4mg/100ml、MgSO4·
7H2O 25mg/100ml。
[0012]进一步，上述乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵方法中，所述重组质粒的载体选自pET
‑
28a(+)。
[0013]进一步，上述乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵方法中，所述大肠杆菌选自DH5α。
[0014]进一步，上述乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵方法中，所述构建重组质粒包括对载体通过限制性内切酶进行双酶切，所述限制性内切酶选自BamHI和
EcoRI。
[0015]进一步，上述乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵方法中，所述PCR扩增的引物为：
[0016]上游引物：5
’‑
GATTC GGGATCCCATGCTTTTCCCA
‑3’
[0017]下游引物：3
’‑
AATTC CGAGGACGAAGACTCCGATG
‑5’
。
[0018]本专利技术的有益效果在于：乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌之间的拮抗作用主要源于其代谢产物中含有的过氧化氢，重组细胞中由于包含过氧化氢酶基因，在共同发酵培养时，重组细胞中的过氧化酶基因得到表达，使代谢产物中持续产生的过氧化氢得到降解，从而达到抑制乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌之间的拮抗作用，使三者能够协同发酵。
具体实施方式
[0019]为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
[0020]实施例1
[0021]从NCBI中获取基因组序列NW_019091213.1，如下：
[0022]GGAAATTGAACTCGTTTTGCTTATCGTAATTAAAGTAAGTAGGTTGCGTTTTCTAGTTATATATTTCGGCCCTATTGAACCCAAAAGTTTTACTCCCCTCTCCACTCACTCACTCACGCTCCGGAAGAGGACATAAATAGAAACTGCTTCTATTTCTCATAGTTTTTGAAATTTTAGCGAGAAAAATGGGACCTTTTCCACTAATTTTTGTTCTCGTCTTAGCCATCACTTCTGCCACCTCTCAGGCTCGACAAAGTTCCACACCAGGTACGACGATCTGCATGCGTATTATCTCCAAAATCGACAGAACCACACACATTAATTAAGCTAACCAACTAATTTGTTGCATATTATTTACAGCAGTTACAAATCCATTCCTCGGTCCAGCCGATTTCCAACTCTCTCAATTCGCTGCCACCCATCCAAATGGAGATTCTCTCCGCACGACGGATGGTGCCGGAAATCCTCTCCCGTCCAACACGGCCAGCCTCGCCATCTCCAATCGAGGTCCACTCCTTTTCGACAACGTCCTGGCCAACAAACTCGCCTCCTTCCACAGAGAACGCATCCCCGAACGCATCGTCCACGCCAAAGGTCACGGGGCATTCGGACACTTTGTCGTGACTCACGATGTGTCAAGGTTCACAAAAGCCAAGGTGTTCAACAGGGTGGGGAAAATTACCCCTGTTCTGGTGAGCTGTATTTTTTTTTACCGTACTCTGCATACAGTTTCTGCACGATGAGCGACACAATAAGTCTCGGCGTTAATAAAACTAAAAAAATATACAGGTCCGCTTCTCTGGAACGGTGCGAGAGTCTGGAGGGGCGGAGACGTTGCCAGACCCACGTGGTTTTGCAATTCGCTTGTATACCGAGGACGGGAACTTGGACTTTCCAGGCCTGCAGATCGATGCTTTCACGCTTCGGGATCCCATGCTTTTCCCAGACCTTATTCGATCCATGAAGCGAAATCCGGAAACGCATCTTATCGACCAAACCCAGTTTCATGACTTTCTCTCCCTAAGACCAGAAGTCCTTCATAATTATGTCAAGTTCTTTGCGGACAGCGTTCGAGCCGGTGAGTAAAAAATTGAGTGCATTACTAACTTGCTGTTATGCATTTGTAGATATGTAACGTACCTACCAAAGTAATTATTAAAATTCCGGGGTGCACTAGGTTCCTCGAGGGGCATGAACGGGTCCGCAGTCAACGTGTACGAGTGCGTCAATGCTCAAGGACAGGTGACCTACTGTAAGTTCGTGTGGCATACTTGGCAGTCCA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：构建重组质粒，所述重组质粒包含NW_019091213.1基因序列；将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞，获得重组细胞；重组细胞、乳双歧杆菌(CGMCCNo.14536)、鼠李糖乳杆菌(CGMCCNo.14410)和嗜酸乳杆菌(CGMCCNo.4649)共同接种于发酵培养基中；所述发酵培养基添加有葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和甜味剂，添加无机盐；所述葡萄糖的加入量为重量g/体积ml比0.1～1.5％，蛋白胨的加入量为重量g/体积ml比0.05～1％，酵母膏的加入量为重量g/体积ml比0.01～0.2％，酵母粉的加入量为重量g/体积ml比0.01～0.1％；所述的无机盐为K2HPO4·
3H2O0.1g/100ml、KH2PO40.1g/100ml、FeSO4·
7H2O5.0mg/100ml、ZnSO4·
7H2O4.4mg/100ml、MgSO4·<...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄平，
申请(专利权)人：福州一诺维生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：