一种血液中外泌体的提取及其蛋白质组学分析方法技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种血液中外泌体的提取及其蛋白质组学分析方法。具体地，本发明专利技术提供一种表面修饰兼具有阳离子季铵盐基团与金属离子的新型四氧化三铁磁珠，用于微量血浆外泌体的高效富集。使用该材料进行外泌体分离时，可以与磁性分离自动化装置的结合，实现对微量血液外泌体的高特异性、高通量提取。提取。提取。

【技术实现步骤摘要】
一种血液中外泌体的提取及其蛋白质组学分析方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种血液中外泌体的提取及其蛋白质组学分析方法。

技术介绍

[0002]血液是临床检验最常用的样本，人体在细胞外刺激、微生物攻击和其他应激条件可释放携带有特定蛋白质、mRNA、miRNA和DNA的外泌体进入外周血，并且外泌体可以保护内容物不被外周血中的各种酶水解，因此外泌体是无创诊断的潜在生物标志物重要来源。但血液成分复杂，在进行血液中外泌体蛋白质组分析前，首先需要从血液中提取高纯度的外泌体。在分离外泌体时往往高丰度血浆蛋白与外泌体一并分离，因此在后续外泌体蛋白质组分析中对结果造成严重干扰，导致外泌体蛋白鉴定深度有限。因此快速、高效的分离高纯度的外泌体一直是外泌体蛋白质组研究中急需解决的问题。
[0003]常见的外泌体分离方法有超速离心法、超滤法、沉淀法、密度梯度离心法、尺寸排阻法等；超滤法是根据外泌体的颗粒大小，选择合适孔径的滤膜将外泌体与血液高丰度蛋白分开；沉淀法利用聚合物（如聚乙二醇、离子液体等）将外泌体选择性沉淀达到分离纯化的目的；超滤法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双功能磁性纳米材料的制备方法，所述方法包括以下步骤：1）Fe3O4@SiO2与ATRP引发剂混合，加入ARRP反应液封口，60℃震摇反应；2）加入40%乙二胺溶液置于80℃水浴反应；3）再加入40mM的三氯氧磷与40mM的2，4，6
‑
三甲基吡啶的乙腈溶液室温反应；4）加入100mM氧氯化锆水溶液反应，使用去离子水洗至中性；所述ATRP引发剂是2
‑
溴
‑
2甲基
‑
N
‑
（3
‑
（三乙氧基甲硅烷基）丙基）丙酰胺；所述ARRP反应液中含有以下成分：0.015 mol/L N,N,N',N'',N''
‑
五甲基二乙烯三胺、0.001 mol/L 氯化铜、0.01 mol/L 氯化亚铜、1 mol/L [2
‑
（甲基丙烯酰氧基）乙基] 三甲基氯化铵、1 mol/L 甲基丙烯酸缩水甘油酯。2.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙龙钦，杨佳蕾，李京丽，赵焱，吴松锋，何琳，杜娟，
申请(专利权)人：北京青莲百奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：