一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法技术

本发明专利技术涉及卵黄抗体技术领域，尤其涉及一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，将鸭坦布苏病毒稀释后接种于生长状况良好的10日龄鸭胚，接种好的鸭胚置于36～38℃培养箱培养，收集死亡鸭胚的尿囊液，离心，向上清液中加入疫苗灭活剂，取100～120日龄蛋鸡，在每只蛋鸡的颈部接种1～1.5mL鸭坦布苏病毒疫苗，完成第一次免疫，12～16天后进行第二次免疫，25～28天后进行第三次免疫，分离出免疫鸡蛋的卵黄并纯化，得到鸭坦布苏病毒抗体。借此，本发明专利技术可以快速高效的制备具有优异免疫效果的卵黄抗体，合理设置每一次免疫的间隔时间，在不对蛋鸡健康造成影响的前提下，使蛋鸡产生的特异性抗体在卵细胞中充分累积。抗体在卵细胞中充分累积。

【技术实现步骤摘要】
一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法


[0001]本专利技术涉及卵黄抗体
，尤其涉及一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法。

技术介绍

[0002]鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒引起的一种急性传染病，鸭坦布苏病毒属于黄病毒科黄病毒属，病鸭以采食量和产蛋率急剧下降并伴有淘汰和死亡为特征，该病自2010年首次在我国发现以来，在各蛋鸭场和种鸭场均有不同程度的发生，已成为危害养鸭业最严重的疾病之一。
[0003]卵黄抗体是存在于禽类卵黄中的免疫球蛋白，是母禽被外来抗原刺激后，母禽血液中免疫球蛋白转移至其卵黄中对子代产生保护性作用的免疫球蛋白，是在卵黄内所产生的特异性抗体，其浓度远高于血清，并具有高度稳定性和生物学活性，与血清中的IgG相似，由于其蛋白质的物理、化学和免疫性质和哺乳动物IgG存在一定的差异，故这种抗体被命名为“IgY”。
[0004]目前，现有的卵黄抗体的制备方法较为复杂，且利用现有的抗原接种方法接种所得到的卵黄抗体免疫能力较差。
[0005]综上可知，现有技术在实际使用上显然存在不便与缺陷，所以有必要加以改进。

技术实现思路

[0006]针对上述的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，其可以快速高效的制备具有优异免疫效果的卵黄抗体，合理设置每一次免疫的间隔时间，在不对蛋鸡健康造成影响的前提下，使蛋鸡产生的特异性抗体在卵细胞中充分累积。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，包括如下步骤：
[0008]步骤一 病毒的处理
[0009]将鸭坦布苏病毒用生理盐水1000倍稀释后于无菌分装瓶内得到初代病毒，抽取0.1ml初代病毒接种于生长状况良好的10日龄鸭胚，将接种好的鸭胚置于36～38℃培养箱培养，将48～96h死亡的鸭胚取出，置于5～8℃的冷藏箱中静置16～20h后收集尿囊液，得到病毒原液。
[0010]步骤二 疫苗的制备
[0011]取病毒原液，进行离心，向上清液中加入疫苗灭活剂，灭活24～30h，得到鸭坦布苏病毒疫苗。
[0012]步骤三 疫苗的接种
[0013]取100～120日龄蛋鸡20～30只，在每只蛋鸡的颈部接种1～1.5mL鸭坦布苏病毒疫苗，完成第一次免疫，12～16天后在每只蛋鸡的腿部接种2～2.2mL鸭坦布苏病毒疫苗，进行第二次免疫，25～28天后在每只蛋鸡的胸部接种2.2～2.4mL鸭坦布苏病毒疫苗，进行第三
次免疫，并取得免疫鸡蛋。
[0014]步骤四 抗体的提取
[0015]将免疫鸡蛋消毒后打碎，分离出免疫卵黄，将免疫卵黄用无菌水稀释，搅拌均匀，控制温度为2～6℃静置16～20h后进行离心，分离出水相，将所述水相纯化后，过滤除菌后得到鸭坦布苏病毒抗体。
[0016]根据本专利技术的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，所述纯化包括如下步骤：
[0017]在所述水相中加入饱和硫酸铵使其终浓度为50％，于2～6℃静置1～1.5h，进行离心，弃上清，得到第一沉淀，将第一沉淀用等体积的无菌水溶解，再次加入饱和硫酸铵，使其终浓度为30％，离心，弃上清，得第二沉淀，将第二沉淀用等体积的磷酸盐缓冲液溶解。
[0018]根据本专利技术的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，所述步骤四的离心转数为800～1000r/min，离心时间为20～30min。
[0019]根据本专利技术的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，所述免疫鸡蛋选取第三次免疫后10～15天后的鸡蛋。
[0020]根据本专利技术的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，所述步骤一中，所述接种好的鸭胚在培养过程中，每隔8h观察一次。
[0021]根据本专利技术的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，所述步骤二的离心转数为6000～7000r/min，离心时间为25～35min。
[0022]根据本专利技术的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，所述免疫卵黄与无菌水的体积比1:7～8。
[0023]本专利技术的目的在于提供一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，将鸭坦布苏病毒稀释后接种于生长状况良好的10日龄鸭胚，将死亡的鸭胚取出，置于5～8℃的冷藏箱中静置16～20h后收集尿囊液，进行离心，向上清液中加入疫苗灭活剂和疫苗佐剂，得到鸭坦布苏病毒疫苗；在每只蛋鸡的颈部接种1～1.5mL鸭坦布苏病毒疫苗，完成第一次免疫，12～16天后进行第二次免疫，25～28天后进行第三次免疫，合理设置每一次免疫的间隔时间，在不对蛋鸡健康造成影响的前提下，使蛋鸡产生的特异性抗体在卵细胞中充分累积。综上所述，本专利技术的有益效果是：可以快速高效的制备具有优异免疫效果的卵黄抗体，合理设置每一次免疫的间隔时间，在不对蛋鸡健康造成影响的前提下，使蛋鸡产生的特异性抗体在卵细胞中充分累积。
具体实施方式
[0024]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0025]为验证本专利技术的一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，本专利技术提供如下实施例：
[0026]实施例1
[0027]步骤一 病毒的处理
[0028]将鸭坦布苏病毒用生理盐水1000倍稀释后于无菌分装瓶内得到初代病毒，抽取0.1ml初代病毒接种于生长状况良好的10日龄鸭胚，将接种好的鸭胚置于36℃培养箱培养，
每8h观察一次，将48～96h死亡的鸭胚取出，置于5℃的冷藏箱中静置16h后收集尿囊液，得到病毒原液，于
‑
60℃冷藏箱保存。
[0029]步骤二 疫苗的制备
[0030]取病毒原液，进行离心(6000r/min，25min)，向上清液中加入疫苗灭活剂，控制温度37℃灭活24h，得抗原液。抗原液与疫苗佐剂充分乳化，得到鸭坦布苏病毒疫苗，将疫苗保存于2℃的冷藏箱。
[0031]步骤三 疫苗的接种
[0032]取100日龄蛋鸡20只，在每只蛋鸡的颈部接种1mL鸭坦布苏病毒疫苗，完成第一次免疫，12天后进行第二次免疫(在每只蛋鸡的腿部接种2mL鸭坦布苏病毒疫苗)，25天后进行第三次免疫(在每只蛋鸡的胸部接种2.2mL鸭坦布苏病毒疫苗)，取第三次免疫后10天后的免疫鸡蛋。
[0033]步骤四 抗体的提取
[0034]将免疫鸡蛋消毒后打碎，分离出免疫卵黄，将免疫卵黄用无菌水稀释(免疫卵黄与无菌水的体积比1:7)，搅拌均匀，控制温度为2℃静置16h后进行离心(800r/min，20min)，分离水相，加入饱和硫酸铵使其终浓度为50％，于2℃静置1h，进行离心(6000r/min，25min)弃上清，将沉淀用等体积的无菌水溶解，再次加入饱和硫酸铵，使其终浓度为30％，离心(6000r/min，25min)，弃上清，沉淀用等体积的磷酸盐缓冲液溶解，以对分离的水相进行纯化，过滤除菌后得到鸭坦布苏病毒抗体。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一 病毒的处理将鸭坦布苏病毒用生理盐水1000倍稀释后于无菌分装瓶内得到初代病毒，抽取0.1ml初代病毒接种于生长状况良好的10日龄鸭胚，将接种好的鸭胚置于36～38℃培养箱培养，将48～96h死亡的鸭胚取出，置于5～8℃的冷藏箱中静置16～20h后收集尿囊液，得到病毒原液；步骤二 疫苗的制备取病毒原液，进行离心，向上清液中加入疫苗灭活剂，灭活24～30h，得到鸭坦布苏病毒疫苗；步骤三 疫苗的接种取100～120日龄蛋鸡20～30只，在每只蛋鸡的颈部接种1～1.5mL鸭坦布苏病毒疫苗，完成第一次免疫，12～16天后在每只蛋鸡的腿部接种2～2.2mL鸭坦布苏病毒疫苗，进行第二次免疫，25～28天后在每只蛋鸡的胸部接种2.2～2.4mL鸭坦布苏病毒疫苗，进行第三次免疫，并取得免疫鸡蛋；步骤四 抗体的提取将免疫鸡蛋消毒后打碎，分离出免疫卵黄，将免疫卵黄用无菌水稀释，搅拌均匀，控制温度为2～6℃静置16～20h后进行离心，分离出水相，将所述水相纯化后，过滤除菌后得到鸭坦布苏病毒抗体。2.根据权利要求1所述的可治...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘金龙，庄晓峰，许丹蕾，黄冬雨，
申请(专利权)人：山东贝瑞康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：