一种改善男性精液质量和生育能力的两歧双歧杆菌JYBB-163及菌剂、制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种改善男性精液质量和生育能力的两歧双歧杆菌JYBB

【技术实现步骤摘要】
一种改善男性精液质量和生育能力的两歧双歧杆菌JYBB
‑
163及菌剂、制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及微生物应用
，具体涉及一种改善男性精液质量和生育能力的两歧双歧杆菌JYBB
‑
163及菌剂、制备方法和应用。

技术介绍

[0002]生育问题一直是生命科学领域的重要研究问题，近年来，男女不育症的发生率不断升高，其中男性不育约占40％～50％，男性不育症的主要病因包括生殖内分泌激素水平异常、精液质睾丸附睾发育异常、自身免疫、精子获能障碍及感染等，主要表现为少精、弱精及精子畸形等精液质量异常症状。研究发现，睾酮水平是影响精液质量的因素之一，睾酮是支持男性生殖系统生长发育的基本激素，低水平睾酮不利于附睾等附属性腺的生长，从而影响精子的成熟；而且睾酮水平直接影响精子的生长发育，低水平睾酮会诱发生精细胞凋亡，使精子数量减少，直接损伤精子DNA；同时低水平睾酮会降低男性性欲，引起勃起功能障碍，从而降低患者性生活满意程度，间接影响患者的精液质量。
[0003]目前，改善男性精液质量和生育能力的方法包括饮食运动、药物治疗。控制饮食和加强运动锻炼，成本很低，但是难以坚持。药物治疗见效快，但是效果不持久且副作用较大。研究发现，通过调节肠道菌群变化可以间接促进生殖障碍问题的解决。但是目前肠道菌群移植的技术还不成熟，治疗效果不稳定，未有重复性好的益生菌治疗手段的相关报道。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中益生菌治疗男性生殖障碍效果不稳定的技术问题，本专利技术提供一种改善男性精液质量和生育能力的两歧双歧杆菌JYBB
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163及菌剂和应用。
[0005]第一方面，本专利技术提供一改善男性精液质量和生育能力的种两歧双歧杆菌JYBB
‑
163，两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)JYBB
‑
163于2019年7月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18091。
[0006]第二方面，本专利技术提供一种上述两歧双歧杆菌JYBB
‑
163的菌剂。
[0007]第三方面，本专利技术提供一种上述菌剂的制备方法，具体包括如下步骤：
[0008](1)取保藏的两歧双歧杆菌JYBB
‑
163在MRS平板培养基上活化，将活化后的两歧双歧杆菌JYBB
‑
163接种于MRS液体培养基中，培养24h获得菌液；
[0009](2)将菌液离心后，收集菌体，使用无菌生理盐水洗涤后，重悬于质量分数为15％的复原脱脂乳中，获得悬浊液；调整悬浊液的浓度为1.0～2.0
×
10
10
cfu/mL，获得菌悬液，将菌悬液冷冻干燥后，获得菌粉；
[0010](3)将菌粉与低聚异麦芽糖混合，制成菌剂。
[0011]进一步的，步骤(1)中，接种量为1％。
[0012]进一步的，步骤(1)中，MRS液体培养基的制备方法为：将蛋白胨10g、牛肉粉5g、三
水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、蒸馏水1000mL混合，调pH为6.8，搅拌均匀后，灭菌即可。
[0013]进一步的，灭菌的条件为在121℃、0.1MPa，灭菌时间为20min。
[0014]进一步的，步骤(1)中，培养温度为37℃。
[0015]第四方面，本专利技术提供上述两歧双歧杆菌JYBB
‑
163在制备改善男性精液质量和生育能力产品方面的应用。
[0016]本专利技术的有益效果在于：
[0017]本专利技术分离得到一株两歧双歧杆菌JYBB
‑
163，将其制成菌剂，经试验验证，JYBB
‑
163菌剂可以明显提升经高温处理睾丸的小鼠的睾酮水平和睾丸系数，提高其精子总数、精子移动率，降低其精子畸形率；同时JYBB
‑
163菌剂可以明显提升衰老大鼠的睾酮水平和睾丸系数，提高衰老大鼠的质膜完整性、线粒体功能正常比例和DNA完整性。因此，两歧双歧杆菌JYBB
‑
163菌剂有助于改善男性精液质量和生育功能，可用于辅助治疗男性不育。
具体实施方式
[0018]为了使本
的人员更好地理解本专利技术中的技术方案，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0019]实施例1菌株分离与鉴定
[0020]1、菌株筛选及纯化
[0021](1)取样：取伊利州牧民家里自然发酵的葡萄酒1mL，备用；
[0022](2)制备稀释液：将步骤(1)的葡萄酒置于无菌三角瓶中，加入灭菌后的生理盐水振荡摇匀，制成不同浓度梯度的稀释液，稀释倍数分别为10
‑1、10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5、10
‑6、10
‑7，标号分别为1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#，待用；
[0023](3)制备MRS平板培养基：
[0024]蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、琼脂15g、蒸馏水1000mL；将上述原料混合后，自然pH，搅拌菌液后，在121℃、0.1MPa下灭菌20min，将灭菌后的培养基倒入平皿中，放凉后待用；
[0025](4)培养：将步骤(2)的1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#溶液分别使用涂布器涂布在MRS平板培养基中，于37℃、厌氧条件下培养48h；
[0026](5)按照以下菌落特征挑选菌落：
[0027]直径1
‑
2mm，菌落圆润、边缘整齐、微白色中间有凸起。
[0028](6)分离纯化：根据步骤(5)的菌落特征挑取5个单菌落，采用划线法接种至MRS平板的培养基上，于37℃、厌氧条件下培养48h，挑取单菌落，置于甘油管中
‑
70℃保藏。
[0029]2、鉴定
[0030]将步骤(6)分离纯化后单菌落送去鉴定，鉴定单位：生工生物工程(上海)股份有限公司，鉴定过程中，使用的引物如下：
[0031]27F：5'
‑
AGAGTTTGATCMTGGCTCAG
‑
3'
[0032]1492R：5'
‑
GGTTACCTTGTTACGACTT
‑
3'
[0033]该菌株基因序列为：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改善男性精液质量和生育能力的两歧双歧杆菌JYBB
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163，其特征在于，两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)JYBB
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163于2019年7月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18091。2.一种如权利要求1所述两歧双歧杆菌JYBB
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163的菌剂。3.一种如权利要求2所述菌剂的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)取保藏的两歧双歧杆菌JYBB
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163在MRS平板培养基上活化，将活化后的两歧双歧杆菌JYBB
‑
163接种于MRS液体培养基中，培养24h获得菌液；(2)将菌液离心后，收集菌体，使用无菌生理盐水洗涤后，重悬于质量分数为15％的复原脱脂乳中，获得悬浊液；调整悬浊液的浓度为1.0～2...

【专利技术属性】
技术研发人员：张华磊，司书锋，周文浩，任彦芬，田华，王雪娇，孙川，
申请(专利权)人：山东中科嘉亿生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：