一种量子点荧光微球定量检测胎球蛋白B的免疫层析试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术属于胎球蛋白B检测技术领域，公开了一种量子点荧光微球定量检测胎球蛋白B的免疫层析试纸条及其制备方法。本发明专利技术的免疫层析试纸条包括样品垫、释放垫、硝酸纤维素膜；所述释放垫上涂覆有量子点荧光微球标记的胎球蛋白B单克隆抗体和量子点荧光微球标记的鼠IgG抗体；所述的硝酸纤维素膜分别设有检测线和质控线，所述检测线上包被有胎球蛋白B单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明专利技术的免疫层析试纸条检测时间缩短至9

【技术实现步骤摘要】
一种量子点荧光微球定量检测胎球蛋白B的免疫层析试纸条及其制备方法


[0001]本专利技术属于胎球蛋白B检测
，特别涉及一种量子点荧光微球定量检测胎球蛋白B的免疫层析试纸条及其制备方法。

技术介绍

[0002]胎球蛋白B属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂蛋白家族新成员，于1999年由Olivier等学者首先在研究致炎物质诱导下大鼠急性相反应蛋白时所发现。人胎球蛋白B由FETUB基因所编码，该基因染色体定位于3号染色体(3q27.3)，由8个外显子所组成。胎球蛋白B是一种相对分子量约为60 000的酸性糖蛋白，主要由肝脏合成并释放进外周血液循环。胎球蛋白B的基因位点与代谢综合征的遗传易感基因位点相同，在肥胖、2型糖尿病等糖脂代谢紊乱疾病中具有重要调节作用。目前研究发现，胎球蛋白B水平与动脉粥样硬化的发生、发展密切相关，是反映动脉粥样硬化性冠心病理想的生物标志物。因此，快速、准确地了解人体外周血中的胎球蛋白B水平，对于冠心病的筛查和辅助诊断起着重要的指导作用。
[0003]目前胎球蛋白B的体外检测方法主要是酶联免疫吸附法(ELISA)，该方法存在检测灵敏度低，线性范围窄，并且操作步骤多、检测耗时长(4
‑
6h)以及重复性差等缺点，这些缺陷导致其不能提供精确的定量，无法及时有效帮助临床医生评估患者病情和进一步指导临床治疗。
[0004]免疫层析技术作为一种即时检测技术，具有操作简单快速、成本低廉且不需要复杂的仪器设备等优点，因此在临床诊断等领域得到迅速普及，其中以胶体金作为探针的免疫层析技术最为成熟和应用最为广泛。但用胶体金作为探针的免疫层析方法只能应用于定量或者半定量检测物质，且与传统的ELISA方法相比存在一定的灵敏度差异。
[0005]量子点作为一种新型的荧光标记材料，其具有较大的斯托克斯位移、发射光谱窄而对称、荧光寿命长、抗漂白能力强等优良特性，在标记免疫学分析中得到了广泛应用。量子点荧光微球技术通过将大量单个的荧光量子点包埋至聚合物微球中大大提高了荧光强度，起到信号放大作用，进而提高检测灵敏度；此外，由于量子点包裹在微球的内部，受外界环境影响小，拥有更稳定的物化性质及抗荧光漂白能力。
[0006]量子点荧光微球的上述特点与免疫层析技术相结合后可以实现减少反应所需的样本量、加快反应时间、易自动化、实验样本随到随做等功能。目前，尚未见基于量子点荧光微球定量检测胎球蛋白B的免疫层析试纸条的相关应用或报道。本专利技术将量子点技术用于胎球蛋白B的高灵敏免疫层析检测，为人群中的动脉粥样硬化性冠心病的初筛和病情监测提供有力的工具，同时适用于基层卫生医疗单位的普及开展，有利于实现冠心病患者的早诊早治。

技术实现思路

[0007]为了克服上述现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种量子点荧
光微球定量检测胎球蛋白B的免疫层析试纸条。
[0008]本专利技术的免疫层析试纸条可以检测待样品中胎球蛋白B水平，具有检测灵敏度高、特异性强、重复性好等特点。
[0009]本专利技术另一目的在于提供一种上述免疫层析试纸条的制备方法。
[0010]本专利技术的目的通过下述方案实现：
[0011]一种量子点荧光微球定量检测胎球蛋白B的免疫层析试纸条，包括样品垫、释放垫、硝酸纤维素膜；
[0012]所述释放垫上涂覆有量子点荧光微球标记的胎球蛋白B单克隆抗体和量子点荧光微球标记的鼠IgG抗体；
[0013]所述的硝酸纤维素膜分别设有检测线和质控线，所述检测线上包被有胎球蛋白B单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。
[0014]本专利技术免疫层析试纸条中，所述量子点荧光微球标记的胎球蛋白B单克隆抗体和量子点荧光微球标记的鼠IgG抗体，相同或不同分别包括以下步骤方法制备得到：将活化后的量子点荧光微球与抗体按质量比20:1
‑
3:1混合均匀，室温反应A3
‑
5h，加入乙醇胺终止反应；离心、洗涤后，加入封闭液，室温反应B 30
‑
60min，得到量子点荧光微球标记的抗体。
[0015]进一步的，所述量子点荧光微球为粒径100
‑
300nm的聚苯乙烯微球，其内部封装包裹油溶性核壳结构CdSe/ZnS量子点，表面修饰有羧基、氨基或醛基基团。
[0016]更进一步的，所述量子点荧光微球的激发波长范围为300
‑
450nm，荧光峰在590
‑
630nm。
[0017]进一步的，所述活化通过将量子点荧光微球加入碳二亚胺(EDC)和N
‑
羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo
‑
NHS)中进行活化；活化在室温下进行即可；活化时间可为20
‑
40min。
[0018]进一步的，所述封闭液的配方为含25mM Tris
‑
HCl，2.5％ BSA，2.5％海藻糖和0.25％ Tween
‑
20，pH 7.6。
[0019]进一步的，室温反应B后可通过离心、洗涤弃上清液得到产物；产物可使用微球保存缓冲液进行重悬；重悬后悬浮液在4℃保存备用。
[0020]更进一步的，所述微球保存缓冲液的配方为含25mM Tris
‑
HC，1.2％ BSA，5％海藻糖，0.15％ Tween
‑
20和0.02％ Proclin
‑
300，pH 9.0。
[0021]本专利技术免疫层析试纸条中，所述的样品垫包括以下步骤方法制备得到：将样品垫置于样品垫缓冲液中浸泡，再取出干燥备用。
[0022]进一步的，所述样品垫缓冲液的配方为含10mM Na2B4O7·
10H2O，1％聚乙烯吡咯烷酮，0.2％酪蛋白酸钠，1％ Trition
‑
X100，1％ S9和0.05％ NaN3，pH 8.5。
[0023]进一步的，浸泡的时间可为3
‑
6h。
[0024]进一步的，所述干燥可在37℃下进行。
[0025]进一步的，所述干燥后样品垫在4℃保存备用。
[0026]本专利技术免疫层析试纸条中，所述的释放垫具体包括以下步骤方法制备得到：将释放垫置于抗体混合溶液中浸泡，再取出干燥备用。
[0027]进一步的，所述抗体混合溶液具体为将量子点荧光微球标记的胎球蛋白B单克隆抗体和量子点荧光微球标记的鼠IgG抗体按质量比1:0.5
‑
1:1.5混合均匀得到。
[0028]进一步的，所述抗体混合溶液中抗体总的质量浓度可为3
‑
8mg/mL。
[0029]进一步的，浸泡的时间可为1
‑
3h。
[0030]进一步的，所述干燥可在37℃下进行。
[0031]进一步的，所述干燥后样品垫在4℃保存备用。
[0032]本专利技术的量子点荧光微球定量检测胎球蛋白B的免疫层析试纸条，将量子点本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种量子点荧光微球定量检测胎球蛋白B的免疫层析试纸条，其特征在于包括样品垫、释放垫、硝酸纤维素膜；所述释放垫上涂覆有量子点荧光微球标记的胎球蛋白B单克隆抗体和量子点荧光微球标记的鼠IgG抗体；所述的硝酸纤维素膜分别设有检测线和质控线，所述检测线上包被有胎球蛋白B单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述量子点荧光微球标记的胎球蛋白B单克隆抗体和量子点荧光微球标记的鼠IgG抗体，相同或不同分别包括以下步骤方法制备得到：将活化后的量子点荧光微球与抗体按质量比20:1
‑
3:1混合均匀，室温反应A3
‑
5h，加入乙醇胺终止反应；离心、洗涤后，加入封闭液，室温反应B 30
‑
60min，得到量子点荧光微球标记的抗体。3.根据权利要求2所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述量子点荧光微球为粒径100
‑
300nm的聚苯乙烯微球，其内部封装包裹油溶性核壳结构CdSe/ZnS量子点，表面修饰有羧基、氨基或醛基基团。4.根据权利要求2所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述量子点荧光微球的激发波长范围为300
‑
450nm，荧光峰在590
‑
630nm。5.根据权利要求2所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述活化通过将量子点荧光微球加入碳二亚胺和N
‑
羟基硫代琥珀酰亚胺中进行活化。6.根据权利要求2所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述封闭液的配方为含25mM Tris
‑
HCl，2.5％BSA，2.5％海藻糖和0.25％Tween
‑
20，pH 7.6。7.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的样品垫包括以下步骤方法制备得到：将样品垫置于样品垫缓冲液中浸泡，再取出干燥备用；所述样品垫缓冲液的配方为含10mM Na2B4O7·
10H2O，1％聚乙烯吡咯烷...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯经远，钟志雄，邓巧亭，
申请(专利权)人：梅州市人民医院梅州市医学科学院，
类型：发明
国别省市：