一种黄鳝腹腔注射的方法技术

本发明专利技术公开了一种黄鳝腹腔注射的方法，包括：(1)黄鳝个体来源及规格统计；(2)黄鳝进入VI期麻醉程度的时间统计；(3)黄鳝复苏时间和复苏率统计；(4)黄鳝腹腔注射；(5)样本采集及RNA提取；(6)实时荧光定量；(7)使用SPSS22.0对数据进行单因素方差分析(One

【技术实现步骤摘要】
一种黄鳝腹腔注射的方法


[0001]本专利技术属于人工养殖
，具体涉及一种黄鳝腹腔注射的方法。

技术介绍

[0002]黄鳝(Monopterus albus)俗称鳝鱼，隶属硬骨鱼纲(Osteichthyes)、辐鳍亚纲(Actinopteryii)、合鳃目(Synbranchiformes)、合鳃亚目(Synaphobranchoidei)、合鳃科(Synbranchidae)、黄鳝属(Monopterus)，主要分布于亚洲和东南亚地区，属于温热带淡水鱼类，是中国、日本和东南亚国家十分受欢迎的淡水鱼
[2]。黄鳝是目前我国大力推广养殖的重要名特优水产品之一，其肉质鲜美，含有丰富的必需氨基酸和脂肪酸及其他特殊营养素，具有很高的药用和滋补功能，一直深受消费者青睐，被广泛养殖。黄鳝具有独特的冬眠现象，当温度较低时黄鳝在洞穴或泥土深层冬眠。野生状态下，黄鳝在冬季就会进入长期的停食并冬眠，当春季温度回升至15℃左右时，开始苏醒并出穴觅食。随着黄鳝养殖业的不断发展，黄鳝的养殖、繁殖和病害防治等技术的研究越来越受到人们的重视，但黄鳝体表滑腻，粘液较多，不便于捕捉，给运输、分选、注射、外科手术、体外标记、形态学测量等操作带来极大的困难。
[0003]麻醉剂的作用原理是首先抑制脑皮质(触觉丧失期)，再作用于基底神经节与小脑(兴奋期)，最后作用于脊髓(麻醉期)。过大剂量或过长的接触可深及延髓，麻痹呼吸与血管舒缩中枢，可导致休克并最终导致死亡。麻醉可以降低鱼体呼吸频率和耗氧量，减缓体内代谢，减少鱼的应激反应，便于进行各种生产和实验操作。
[0004]鱼用麻醉剂近30种，目前常用的鱼类麻醉剂有MS
‑
222、苯氧乙醇、丁香酚、喹哪丁、盐酸苯唑卡因、尿烷、三氯乙醛等。MS
‑
222(Tricaine methane sulfonate)化学名称为间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐，为白色结晶粉末状，分子量161.3，易溶于水，无富集作用，在清水中活鱼肌肉中的代谢时间约12小时。因其具有易处理、麻醉迅速、无富集作用等优点，被美国食品药品管理局(Food and DrugAdministration，简称FDA)规定为水产专用麻醉剂，是其批准的唯一用于食用鱼的麻醉剂。MS
‑
22作为麻醉剂用于多种鱼类的麻醉研究已见报道，如半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)、斑点叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)、长薄鳅(Leptobotia elongate)、黄颡鱼(Pelteobagrusfulvidraco)等。
[0005]关于黄鳝的MS
‑
222麻醉浓度的实验，仅王兴礼进行了报道，结果显示，在23℃～26℃水温条件下，不同浓度的MS
‑
222对黄鳝的麻醉效果差异极显著，MS
‑
222的适宜麻醉浓度范围是300mg/L～500mg/L。但麻醉剂在使用过程中存在殊多问题，使用剂量过高导致黄鳝直接死亡，剂量过低麻醉效果不明显且还难于复苏；此外，剂量调试好后，麻醉时间过长或是实验操作时间过长，黄鳝都难于复苏。
[0006]基于上述分析，本专利技术通过冰水混合物来降低鱼体温度，使其进去休眠状态，再进行实验操作，该方法能让鱼体活动能力快速下降，短时间能复苏且全部存活。

技术实现思路

[0007]鉴于上述不足，本专利技术提供了一种能安全且快速让黄鳝活动能力下降，同时复苏后不会受到影响的腹腔注射方法。
[0008]本专利技术是通过如下技术手段实现的：
[0009]一种黄鳝腹腔注射的方法，包括：
[0010](1)黄鳝个体来源及规格统计；
[0011](2)黄鳝进入VI期麻醉程度的时间统计；
[0012](3)黄鳝复苏时间和复苏率统计；
[0013](4)黄鳝腹腔注射；
[0014](5)样本采集及RNA提取；
[0015](6)实时荧光定量；
[0016](7)使用SPSS 22.0对数据进行单因素方差分析(One
‑
WayANOVA)和沃勒
‑
邓肯多重比较分析，显著性设为P<0.05。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0018]本专利技术的方法相较于使用麻醉剂等方式更加快捷、实验成本更低廉，无需在实验开始前对不同种类麻醉剂用量进行调控，进一步缩短了实验时间，减少了在麻醉过程中由于对麻醉时间控制不当引起的死亡。
附图说明
[0019]图1为各处理组进入VI期麻醉程度时间比较；相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同字母表示具有显著性差异(P<0.05)。
[0020]图2为各注射时间后EGFR基因相对表达量比较。
具体实施方式
[0021]本专利技术所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案；所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。
[0022]实施例1
[0023]一种黄鳝腹腔注射的方法，包括如下步骤：
[0024](1)黄鳝个体来源及前期处理
[0025]试验用鱼来自于武汉某市场收购的黄鳝幼鱼，约80尾。试验开始前，将黄鳝幼鱼放在养殖箱内暂养2天，水温保持在26
±
0.5℃，暂养期间停止投喂饲，使试验鱼排空肠道。
[0026](2)黄鳝个体规格统计
[0027]测量黄鳝体长体重，确保每组之间不存在显著差异，排除由于组间差异对实验结果的影响。
[0028]表1各处理组黄鳝体重体长统计结果
[0029][0030](3)黄鳝进入VI期麻醉程度的时间比较
[0031]先量取3L清水，称取定量MS
‑
222投入水中溶解，使其浓度梯度为：400mg/L、500mg/L、1000mg/L，保持水温在26
±
0.5℃，MS
‑
222采购于杭州动物制药厂生产；低温处理实验组(冰浴处理组)，每组试验鱼15尾。根据麻醉程度区别，可以将黄鳝的麻醉状态分为7个时期分别为：第Ⅰ期(正常期)第、Ⅱ期(轻度镇静期)、第Ⅲ期(深度镇静期)、第Ⅳ期(轻度麻醉期)、第V期(麻醉期)、第VI期(深度麻醉期)、第
Ⅶ
期(休克期)
[15]。通常在第V、VI期对麻醉个体进行注射及相关实验操作。
[0032]表2黄鳝麻醉分期及行为特征
[0033][0034]麻醉处理组在黄鳝进入深度麻醉期后，出现呼吸微弱，呼吸停歇时间变长，鳃盖张合幅度明显变小，咧鳃现象时，立即停止麻醉处理，防止进入休克期(
Ⅶ
期)而死亡，对实验鱼迅速进行复苏。
[0035]冰浴处理组在黄鳝活性降低，呼吸微弱，呼吸停歇时间变长，鳃盖张合幅度明显变小时，不对外界刺激产生反应，此时已经可以满足对于注射等实验相关操作所需的条件，停止低温处理，对实验鱼迅速进行复本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黄鳝腹腔注射的方法，包括：(1)黄鳝个体来源及规格统计；(2)黄鳝进入VI期麻醉程度的时间统计；(3)黄鳝复苏时间和复苏率统计；(4)黄鳝腹腔注射；(5)样本采集及RNA提取；(6)实时荧光定量；(7)使用SPSS 22.0对数据进行单因素方差分析和沃勒
‑
邓肯多重比较分析，显著性设为P<0.05。2.根据权利要求1所述的方法，其中：步骤(2)所述黄鳝进入VI期麻醉处理包括：量取3L清水，称取MS
‑
222投入水中溶解，使其浓度梯度为：400mg/L、500mg/L、1000mg/L，保持水温在26
±
0.5℃。3.根据权利要求1所述的方法，其中：步骤(4)所述黄鳝腹腔注射包括：每尾黄鳝注射300uL溶剂，注射12h、24h后采集性腺样品...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡乔木，连子童，李忠，田海峰，夏雪平，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院长江水产研究所，
类型：发明
国别省市：