一种肿瘤药物标志物蛋白激酶HUNK及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种肿瘤药物标志物蛋白激酶HUNK标志物在制备治疗肿瘤及与肿瘤转移性相关疾病的药物中的应用，所述治疗肿瘤及与肿瘤转移性相关疾病的药物包括用于抑制HUNK表达的成分与纳米类药物。本发明专利技术HUNK抑制细胞由小窝蛋白介导的内吞作用，该内吞途径涉及白蛋白紫杉醇等纳米类药物进入细胞的一种主要途径，该蛋白的sirna和抑制剂可作为该基因高表达癌症中的纳米药物治疗。在实验应用中，高表达HUNK基因的肿瘤细胞对白蛋白紫杉醇不敏感，而敲除HUNK或抑制剂处理的细胞则对白蛋白紫杉醇更加敏感，实验中发现敲除或抑制HUNK可促进白蛋白的内吞，并促进其进入溶酶体降解。并促进其进入溶酶体降解。并促进其进入溶酶体降解。

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤药物标志物蛋白激酶HUNK及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体是一种肿瘤药物标志物蛋白激酶HUNK及其应用。

技术介绍

[0002]肿瘤(tumor)是机体细胞在各种始动与促进因素作用下产生的增生与异常分化所形成的新生物。肿瘤的生长不受正常机体生理调节，而是破坏正常组织与器官。根据肿瘤的生物学行为可分为良性肿瘤、恶性肿瘤及介于良、恶性肿瘤之间的交界性肿瘤。有明确肿块形成的为实体瘤，而没有明确肿块的为非实体瘤，非实体瘤大多为血液系统恶性肿瘤。为了治疗肿瘤，通常采用抗体类药物和纳米类药物，而纳米药物则是广谱肿瘤药物，但纳米药物的内吞效率有限，限制了其在肿瘤临床治疗中的效果。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于蛋白激酶HUNK标志物在制备治疗肿瘤及与肿瘤转移性相关疾病的药物中的应用，通过HUNK抑制细胞由小窝蛋白介导的内吞作用，该内吞途径涉及白蛋白紫杉醇等纳米类药物进入细胞的一种主要途径，该蛋白的sirna和抑制剂可作为该基因高表达癌症中的纳米药物治疗。
[0004]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0005]一种药物组合物，所述药物组合物包括a)纳米药物，以及如下b)和c)中的至少一种：
[0006]b)降低或消除HUNK基因表达的试剂。
[0007]c)降低或消除HUNK蛋白的激酶活性的试剂。
[0008]进一步的，所述降低或消除HUNK基因表达的试剂选自如下至少一种：
[0009]b1)多核苷酸，所述多核苷酸包含降低或消除所述HUNK基因的表达水平的核苷酸序列。
[0010]b2)重组载体，所述重组载体包含所述b1)所示的多核苷酸序列。
[0011]优选地，所述b1)所示的多核苷酸包含以HUNK基因为靶点的shRNA、siRNA和/或sgRNA。
[0012]进一步的，所述多核苷酸包含如SEQ ID NO:X
‑
X任一项所示的核苷酸序列，或与之具有至少90％序列同一性的核苷酸序列。
[0013]进一步的，所述降低或消除HUNK蛋白的激酶活性的试剂选自：
[0014]丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂和酪氨酸蛋白激酶抑制剂。
[0015]进一步的，所述纳米药物选自紫杉烷类；优选为紫杉醇或白蛋白紫杉醇；更优选地，所述药物组合物中，所述白蛋白紫杉醇的浓度为0.1
‑
1000nM，更优选为10
‑
1000nM。
[0016]进一步的，药物组合物在制备治疗癌症或肿瘤的药物中的用途；
[0017]优选地，所述癌症或肿瘤选自结肠癌、直肠癌、乳癌、子宫内膜癌、鳞状细胞癌、滤泡性淋巴瘤、肾细胞癌、葡萄膜黑色素瘤、子宫颈癌、头颈癌、霍奇金病、星形细胞癌、肺腺
癌、间皮瘤、绒毛膜癌、黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、肝癌、脑癌、胃癌、膀胱癌、食管癌、宫颈癌、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤或胶质母细胞瘤。
[0018]进一步的，选自如下b)和c)中至少一种的试剂在制备用于促进细胞内吞的药物中的用途：
[0019]b)降低或消除HUNK基因表达的试剂。
[0020]c)降低或消除HUNK蛋白的激酶活性的试剂。
[0021]优选地，所述用于促进细胞内吞的药物是用于促进纳米药物内吞的药物。
[0022]优选地，所述纳米药物选自化学治疗剂、免疫检查点抑制剂或抗体药物偶联物。
[0023]进一步的，选自如下b)和c)中至少一种的试剂在制备用于抑制AGAP3蛋白磷酸化的药物中的用途：
[0024]b)降低或消除HUNK基因表达的试剂。
[0025]c)降低或消除HUNK蛋白的激酶活性的试剂。
[0026]进一步的，一种用于促进细胞内吞的方法，其包括向细胞施用如下至少一种试剂的步骤：
[0027]b)降低或消除HUNK基因表达的试剂。
[0028]c)降低或消除HUNK蛋白的激酶活性的试剂。
[0029]优选地，所述细胞为肿瘤细胞。
[0030]可选地，所述细胞为体外培养细胞或包含于受试者体内的细胞。
[0031]进一步的，一种用于抑制AGAP3蛋白磷酸化的方法，其包括向细胞施用如下至少一种试剂的步骤：
[0032]b)降低或消除HUNK基因表达的试剂。
[0033]c)降低或消除HUNK蛋白的激酶活性的试剂。
[0034]优选地，所述细胞为肿瘤细胞。
[0035]可选地，所述细胞为体外培养细胞或包含于受试者体内的细胞。
[0036]本专利技术的有益效果：
[0037]1、在实验应用中，高表达HUNK基因的肿瘤细胞对白蛋白紫杉醇不敏感，而敲除HUNK或抑制剂处理的细胞则对白蛋白紫杉醇更加敏感，实验中发现敲除或抑制HUNK可促进牛血清白蛋白的内吞，并促进其进入溶酶体降解；
[0038]2、本专利技术标志物通过对HUNK基因进行sirna或药物靶向，进而促进纳米药物对肿瘤的治疗解决纳米药物的耐药性，提升了治疗效果；
[0039]3、本专利技术提出了新的可以和白蛋白紫杉醇等纳米药物联合使用的标志物，可降低纳米药物的毒性和使用量，进而提高药物效果，降低副作用。
附图说明
[0040]下面结合附图对本专利技术作进一步的说明。
[0041]图1是本专利技术HUNK敲除细胞系中的通路富集；
[0042]图2是本专利技术HUNK敲除KO细胞系中内吞物；
[0043]图3是本专利技术细胞使用MOCK模拟处理结果；
[0044]图4是本专利技术检测bsa内吞的蛋白量；
[0045]图5是本专利技术检测bsa荧光图；
[0046]图6是本专利技术不同时间点检测细胞荧光情况；
[0047]图7是图6定位bsa和整体bsa溶酶体的荧光强度量化统计；
[0048]图8是本专利技术通过western检测内吞BSA的蛋白总量情况；
[0049]图9是早期内体标志物RAB5和晚期内体标志物RAB7检测情况；
[0050]图10是添加不同bsa时间点检测bsa蛋白量；
[0051]图11是本专利技术ab7和lamp1共定位晚期内体溶酶体的总量；
[0052]图12是本专利技术ko后晚期内体溶酶体的大小情况；
[0053]图13是本专利技术图12晚期内体溶酶体数量和大小的五次实验的量化统计；
[0054]图14是ko细胞中过表达neo对照质粒，hunk基因质粒，和hunk基因的激酶活性突变质粒dk1和dk2；
[0055]图15是细胞添加bsa检测蛋白量；
[0056]图16是hunk激酶抑制剂sts处理后情况；
[0057]图17是sts处理后rab7和lamp1共定位；
[0058]图18是晚期内体溶酶体上升，sts处理后rab7、lamp1共定位上升；
[0059]图19是AWT和ko细胞系中的r本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括a)纳米药物，以及如下b)和c)中的至少一种：b)降低或消除HUNK基因表达的试剂；c)降低或消除HUNK蛋白的激酶活性的试剂。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述降低或消除HUNK基因表达的试剂选自如下至少一种：b1)多核苷酸，所述多核苷酸包含降低或消除所述HUNK基因的表达水平的核苷酸序列；b2)重组载体，所述重组载体包含所述b1)所示的多核苷酸序列。3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中，所述多核苷酸包含如SEQ ID NO:X
‑
X任一项所示的核苷酸序列，或与之具有至少90％序列同一性的核苷酸序列。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的药物组合物，其中，所述降低或消除HUNK蛋白的激酶活性的试剂选自：丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂和酪氨酸蛋白激酶抑制剂。5.根据权利要求1
...

【专利技术属性】
技术研发人员：高山，蒋思远，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：