一种靶向BCMA的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种靶向BCMA的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用，所述嵌合抗原受体T细胞为表达BCMA特异性嵌合抗原受体的T细胞，所述嵌合抗原受体包含能够靶向BCMA的抗体、铰链区和跨膜区、共刺激信号结构域和胞内信号传导结构域，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示，本发明专利技术公开的嵌合抗原受体T细胞特异性靶向BCMA阳性细胞，可以用于治疗BCMA阳性B细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤和浆细胞白血病等疾病。病等疾病。病等疾病。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向BCMA的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一种靶向BCMA的嵌合抗原受体T细胞，具体而言，涉及一种靶向BCMA的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen，BCMA)是一种表达在浆细胞、浆母细胞和骨髓浆细胞的抗原，其不在B细胞或者造血干细胞上表达。BCMA的表达与许多癌症、自身免疫性疾病和感染性疾病相关。BCMA高表达的相关癌症包括一些血液癌症，例如多发性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、各种白血病和胶质母细胞瘤等。这种有限的表达细胞类型，使得BCMA成为治疗血液系统肿瘤的有效靶点，并用于开发单克隆抗体、抗体偶联药物、双特异性抗体、嵌合抗原受体修饰的T细胞(Chimeric antigen receptor，CAR
‑
T)等疗法。当前还没有靶向BCMA的药物上市，但是有少数通过抗体偶联药物、CAR
‑
T疗法等来通过靶向BCMA以治疗多发性骨髓瘤的疗法在进行临床试验，CAR
‑
T技术在多发性骨髓瘤领域的应用取得了一定的效果。
[0003]CAR
‑
T治疗是利用基因工程技术，借助逆转录病毒或者逆转病毒载体或者mRNA转导，使得T细胞获得可以识别肿瘤表面抗原，杀伤肿瘤的嵌合抗原受体。CAR
‑
T治疗相比于传统的治疗方法展现出巨大的优势，具体体现在杀伤肿瘤精准性高，CAR
>‑
T细胞治疗采用抗原抗体特异性结合的技术，只有表面表达特定抗原的肿瘤细胞被杀伤，对正常细胞的伤害小；杀伤肿瘤范围广泛，只要表达肿瘤相关抗原，CAR
‑
T细胞就能清除，对于转移性肿瘤、复发性肿瘤均有效；对于患者而言避免了放化疗的痛苦，恢复健康迅速。因此，开发一种含有靶向BCMA的单克隆抗体的嵌合抗原受体对高效特异的治疗BCMA阳性血液系统肿瘤具有十分重要的意义。

技术实现思路

[0004]基于现有技术中存在的技术缺陷，本专利技术提供了一种靶向BCMA的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]本专利技术的第一方面提供了一种靶向BCMA蛋白的嵌合抗原受体。
[0007]进一步，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域为靶向BCMA蛋白的抗体；
[0008]优选地，所述抗体的重链可变区包括以下三个互补决定区HCDR：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的HCDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的HCDR3；
[0009]优选地，所述抗体的轻链可变区包括以下三个互补决定区LCDR：氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的LCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的LCDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的LCDR3；
[0010]更优选地，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；
[0011]更优选地，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；
[0012]最优选地，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；
[0013]优选地，所述嵌合抗原受体还包括铰链区和跨膜区、共刺激信号结构域、胞内信号传导结构域；
[0014]更优选地，所述铰链区和跨膜区包括下列分子的铰链区和跨膜区：CD8、4
‑
1BB、IgG1、IgG4、PD
‑
1、CD28、CD34、OX40、CD3ε；
[0015]最优选地，所述铰链区和跨膜区为CD8铰链区和跨膜区；
[0016]最优选地，所述CD8铰链区和跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；
[0017]更优选地，所述共刺激信号结构域包括下列分子的共刺激信号结构域：HVEM、CD27、CD19、CD28、ICOS、CD4、CD8α、CD8β、CD40、4
‑
1BB、OX40、DR3、CD2、GITR、CD30、TIM1、CD226、CD278；
[0018]最优选地，所述共刺激信号结构域为HVEM共刺激信号结构域；
[0019]最优选地，所述HVEM共刺激信号结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；
[0020]更优选地，所述胞内信号传导结构域包括下列分子的胞内信号传导结构域：CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD278、CD21、CD22、FcεRI、FcRγ、FcRβ、CD4、CD5、CD8、CD79a、CD79b、DAP10、DAP12、CD66d；
[0021]最优选地，所述胞内信号传导结构域为CD3ζ胞内信号传导结构域；
[0022]最优选地，所述CD3ζ胞内信号传导结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；
[0023]最优选地，所述嵌合抗原受体由所述抗体、CD8铰链区和跨膜区、HVEM共刺激信号结构域、CD3ζ胞内信号传导结构域依次连接得到；
[0024]最优选地，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示。
[0025]在本专利技术的具体实施方案中，所述嵌合抗原受体由EF1α启动子、hCD8信号肽(SP)、C
‑
myc标签、本专利技术制备得到的抗BCMA抗体、CD8铰链区和跨膜区、HVEM共刺激信号结构域、CD3ζ胞内信号传导结构域依次连接得到，其中，所述抗BCMA抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示，所述CD8铰链区和跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，所述HVEM共刺激信号结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，所述CD3ζ胞内信号传导结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，所述EF1α启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:21所示，所述hCD8信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示，所述C
‑
myc标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示。
[0026]需要说明的是，在其他的实施方案中，本领域技术人员可以根据实际情况或需要改变信号肽、铰链区和跨膜区、共刺激信号结构域和胞内信号传导结构域的组合类别和序列，无论基于何种形式的改变，只要该嵌合抗原受体具有本专利技术上述抗体的重链可变区的CDR序列或重链可变区序列，和/或上述抗体的轻链可变区的CDR序列或轻链可变区序列，其均属于本专利技术的保护范围。
[0027]进一步，本专利技术提供的嵌合抗原受体可靶向BCMA蛋白，表达该嵌合抗原受体的免疫细胞可特异性地杀伤BCMA阳性的靶细胞，在本专利技术的具体实施方案中，所述表达该嵌合抗原受体的免疫细胞为表达该嵌合抗原受体的T细胞。
[0028]本专利技术的第二方面提供了一种编码本专利技术第一方面所述嵌合抗原受体的核酸分子。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向BCMA蛋白的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域为靶向BCMA蛋白的抗体；优选地，所述抗体的重链可变区包括以下三个互补决定区HCDR：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的HCDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的HCDR3；优选地，所述抗体的轻链可变区包括以下三个互补决定区LCDR：氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的LCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的LCDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的LCDR3；更优选地，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；更优选地，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；最优选地，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；优选地，所述嵌合抗原受体还包括铰链区和跨膜区、共刺激信号结构域、胞内信号传导结构域；更优选地，所述铰链区和跨膜区包括下列分子的铰链区和跨膜区：CD8、4
‑
1BB、IgG1、IgG4、PD
‑
1、CD28、CD34、OX40、CD3ε；最优选地，所述铰链区和跨膜区为CD8铰链区和跨膜区；最优选地，所述CD8铰链区和跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；更优选地，所述共刺激信号结构域包括下列分子的共刺激信号结构域：HVEM、CD27、CD19、CD28、ICOS、CD4、CD8α、CD8β、CD40、4
‑
1BB、OX40、DR3、CD2、GITR、CD30、TIM1、CD226、CD278；最优选地，所述共刺激信号结构域为HVEM共刺激信号结构域；最优选地，所述HVEM共刺激信号结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；更优选地，所述胞内信号传导结构域包括下列分子的胞内信号传导结构域：CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD278、CD21、CD22、FcεRI、FcRγ、FcRβ、CD4、CD5、CD8、CD79a、CD79b、DAP10、DAP12、CD66d；最优选地，所述胞内信号传导结构域为CD3ζ胞内信号传导结构域；最优选地，所述CD3ζ胞内信号传导结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；最优选地，所述嵌合抗原受体由所述抗体、CD8铰链区和跨膜区、HVEM共刺激信号结构域、CD3ζ胞内信号传导结构域依次连接得到；最优选地，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示。2.一种编码权利要求1所述嵌合抗原受体的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。3.一种包含权利要求2所述核酸分子的载体，其特征在于，所述载体包括DNA载体、RNA载体、质粒、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体、转座子系统；优选地，所述载体为慢病毒载体。4.一种基因工程化的免疫细胞，其特征在于，所述基因工程化的免疫细胞含有权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的载体；优选地，所述基因工程化的免疫细胞表达权利要求1所述的嵌合抗原受体；优选地，所述免疫细胞包括T细胞、B细胞、NK细胞、iNKT细胞、CTL细胞、树突状细胞、髓
样细胞、单核细胞、巨噬细胞或其任意组合；更优选地，所述免疫细胞为T细胞。5.一种免疫细胞群体，其特征在于，所述免疫细胞群体包含权利要求4所述的基因工程化的免疫细胞；优选地，所述免疫细胞群体还包含不包含权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的载体的免疫细胞；更优选地，所述免疫细胞包括T细胞、B细胞、NK细胞、iNKT细胞、CTL细胞、树突状细胞、髓样细胞、单核细胞、巨噬细胞或其任意组合；最优选地，所述免疫细胞为T细胞。6.一种用于治疗和/或预防肿瘤的生物制剂，其特征在于，所述生物制剂含有权利要求1所述的嵌合抗原受体、权利要求2所述的核酸分子、权利要求3所述的载体、权利要求4所述的基因工程化的免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：张青，郑骏年，孙世硕，高晓鸽，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：