一种基因检测试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物诊断技术领域，具体涉及一种基因检测试剂盒及其制备方法和应用。本发明专利技术公开了检测CLCP1和CPRDX1的表达水平在制备诊断犬乳腺肿瘤的产品中的应用以及相关的检测试剂盒。本发明专利技术的试剂盒能够作为犬乳腺肿瘤诊断的手段之一，具有检测快速方便、检测灵敏度高、特异度好、成本低，可以满足绝大多数的检测需求，应用范围广。应用范围广。应用范围广。

【技术实现步骤摘要】
一种基因检测试剂盒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物诊断
，具体涉及一种基因检测试剂盒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]犬乳腺肿瘤(Canine mammary tumor)是犬的常见的一类疾病，其成因复杂，发病机理尚不明确。乳腺肿瘤是未绝育母犬最常见的肿瘤疾病，占所有肿瘤疾病50％
‑
70％；犬乳腺肿瘤中约50％为恶性，50％为良性；一些良性乳腺肿瘤，随着病程发展，可能会成为恶性肿瘤；年龄越大，肿瘤风险越高；大型犬的发病年龄可能比小型犬更小；肿物越大，恶性几率越高，医治难度越大，动物越疼！
[0003]目前针对犬乳腺肿瘤的诊断主要有5种方法。一是乳区触诊，对狗狗所有的乳区进行触诊检查，确认肿物的数量和大小；二是细胞学检查，确认长在乳区的肿物的确是乳腺肿瘤，而不是其他更恶性的肿瘤；三是血液学检查和尿常规检查，老龄动物需要全面的血检和尿检来评估动物体况；四是腹部B超、胸部X线检查：可以在术前评估腹腔和胸腔主要脏器的形态，有无明显转移和异常；五是CT，相比胸部X线检查，可以评估有无更小的转移性结节。这些诊断方法成本较高，人员要求高。因此，急需开发一种常规检测犬乳腺肿瘤的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题一是筛选合适可用于犬乳腺肿瘤诊断的标志物；二是在此基础上，开发一种用于检测犬乳腺肿瘤的基因试剂盒。
[0005]因此，一方面，本专利技术提供了一种犬乳腺肿瘤诊断标志物，所述的标志物为CLCP1和CPRDX1。
>[0006]再一方面，本专利技术还提供了一种犬乳腺肿瘤诊断试剂盒，所述试剂盒包括检测CLCP1和CPRDX1表达水平的试剂。
[0007]优选地，本专利技术所述的试剂包括特异性扩增CLCP1和CPRDX1的引物。
[0008]优选地，本专利技术所述的特异性扩增CLCP1和CPRDX1的引物如下所示：
[0009]CLCP1
‑
F：5
’‑
cttggtacgagctcggatcc
‑3’
；
[0010]CLCP1
‑
R：5
’‑
cgtacacccttgctccgatt
‑3’
；
[0011]CPRDX1
‑
F：5
’‑
ttgctttcagtgacagggca
‑3’
；
[0012]CPRDX1
‑
R：5
’‑
acagagcgaccaacaggaag
‑3’
。
[0013]优选地，本专利技术所述的PCR反应液还包括内参基因β
‑
actin的特异性扩增引物，所述引物和探针的序列如下：
[0014]β
‑
actin
‑
F：5
’‑
aagtaccccattgagcacgg
‑3’
；
[0015]β
‑
actin
‑
R：5
’‑
catacagggacaggacagcc
‑3’
。
[0016]再一方面，本专利技术还提供一种所述的犬乳腺肿瘤诊断标志物在制备犬乳腺肿瘤诊断试剂中的应用。
[0017]本专利技术通过生物信息学和现有的分子生物学的技术手段，筛选用于犬乳腺肿瘤诊断的标志物。通过大量的筛选，从中选择CLCP1和CPRDX1作为标记物。在此基础上，本专利技术提供了检测CLCP1和CPRDX1的表达水平在制备诊断犬乳腺肿瘤的产品中的应用以及相关的检测试剂盒。
[0018]本专利技术的试剂盒能够作为犬乳腺肿瘤诊断的手段之一，相比于现有的犬乳腺肿瘤的检测手段，本试剂盒具有检测快速方便、检测灵敏度高、特异度好、成本低，可以满足绝大多数的检测需求，应用范围广等。
附图说明
[0019]图1CLCP1和CPRDX1在犬乳腺肿瘤中表达量检测结果。
具体实施方式
[0020]以下结合具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0021]本专利技术人经过广泛而深入的研究，通过生物信息学技术和分子生物学技术，检测犬乳腺肿瘤中相关基因的表达水平，发现其中具有明显表达差异的基因，探讨其与犬乳腺肿瘤的发生之间的关系，从而为犬乳腺肿瘤的检测及靶向治疗寻找更好的途径和方法。通过大量的研究和筛选，本专利技术筛选到2个与人中淋巴细胞胞浆蛋白1(lymphocyte cytosolic protein 1，LCP1)(GenBank:DR107736.1，如SEQ ID NO.1所示)和过氧化物酶1(peroxiredoxin 1，PRDX1)(GenBank:DR103789.1，如SEQ ID NO.2所示)相似的蛋白。在本研究中将其命名为犬淋巴细胞胞浆蛋白1(Canine lymphocyte cytosolic protein 1，CLCP1)和犬过氧化物酶1(Canine peroxiredoxin 1，CPRDX1)。
[0022]通过检测分析，CLCP1和CPRDX1在犬乳腺肿瘤中高表达。进一步的实验证明，通过调节CLCP1和CPRDX1的表达水平可以影响犬乳腺肿瘤的生长，提示CLCP1和CPRDX1可以作为药物靶标用于犬乳腺肿瘤的诊断或治疗。
[0023]“生物标志物”与“标志物”可以等同替代，指代具有特异性生物学特性、生物化学特征或者方面的分子指示物，其可用于确定存在或不存在特定疾病或状况和/或特定疾病或状况的严重程度。
[0024]实施例1犬乳腺肿瘤中CLCP1和CPRDX1检测
[0025]1.1样本收集
[0026]选用在广州市某动物医院进行治疗并经病理确诊的犬乳腺肿瘤病例，无菌操作留取部分癌组织和癌旁正常组织(距离癌组织2～5cm左右)分装于冻存管，立即放入液氮保存。所有患畜均经资深病理医生的病理诊断，纳入本研究前未患其它肿瘤，且未经放射或化学药物治疗。选择其中5例恶性肿瘤组织和癌旁组织进行本研究。
[0027]1.2组织总RNA的提取
[0028](1)每50～100mg组织用1ml Trizol试剂(Takara公司)对组织进行裂解；
[0029](2)将上述组织的Trizol裂解液转入EP管中，在室温下放置5分钟；
[0030](3)在上述EP管中，按照每1ml Trizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖
子，在手中用力震荡15秒，在室温下放置2～3分钟后，12000g(2～8℃)离心15分钟；
[0031](4)去上层水相置于新EP管中，按照每1ml Trizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下放置10分钟后，12000g(2～8℃)离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种犬乳腺肿瘤诊断标志物，其特征在于，所述的标志物为CLCP1和CPRDX1。2.一种犬乳腺肿瘤诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测CLCP1和CPRDX1表达水平的试剂。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂包括特异性扩增CLCP1和CPRDX1的引物。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的特异性扩增CLCP1和CPRDX1的引物如下所示：CLCP1
‑
F：5
’‑
cttggtacgagctcggatcc
‑3’
；CLCP1
‑
R：5
’‑
cgtacacccttgctccgatt
‑3’
；CPRDX1
‑
F：5
’‑
ttgctttcagtgacagggca

【专利技术属性】
技术研发人员：任启桢，
申请(专利权)人：广州爱仁生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：