一种快速检测深部感染曲霉菌的方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种快速检测深部感染曲霉菌的方法及试剂盒，将待测样本与核酸直裂提取液混合后于60～65℃加热8～20min，再于93～98℃加热5～10min，获得待测样本的DNA提取液，将所述DNA提取液加入含有深部感染曲霉菌的组合物的PCR预混液中，制得PCR反应液，将所述PCR反应液进行以下PCR扩增反应：控制温度在90～100℃时，进行变性，停留时间为0～5s，控制温度在50～70℃时，进行退火延伸，停留时间为0～5s，循环35～50次，该方法不仅提供了能够区分黄曲霉、黑曲霉和烟曲霉的特异性引物探针组合物，还可实现待测样本从核酸提取到核酸扩增反应等一系列过程的快速检测，节约检测时间。节约检测时间。节约检测时间。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测深部感染曲霉菌的方法及试剂盒


[0001]本专利技术是一种快速检测深部感染曲霉菌的方法及试剂盒，具体涉及一种能够快速实现深部感染曲霉菌（烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉）PCR核酸检测的方法及试剂盒，属于生物检测


技术介绍

[0002]侵袭性肺曲霉病（IPA）是指曲霉菌菌丝生长侵入肺实质而引起的感染性疾病，主要发生于免疫受损人群，如广谱抗生素、器官移植、肿瘤化疗等患者，占侵袭性曲霉菌感染的50%～60%。曲霉菌为条件致病菌，引起人类感染约有20种，以黄曲霉、黑曲霉和烟曲霉等最为常见。IPA早期诊断困难，且病情易被原发病掩盖，造成误诊、漏诊而延误治疗，未经及时治疗肺部曲霉菌感染患者的病死率可高达30%～80%。因此，正确及时诊断肺部曲霉菌感染的检测手段是临床上迫切需要解决的问题，开发一种更为敏感、特异的IPA早期诊断方法已迫在眉睫。
[0003]目前，常见的深度曲霉菌检测方法有病理组织学检查、影像学检测、培养、特异性抗原的测定和分子诊断技术，其中无菌部位组织镜检和血培养可以为确诊IPA提供直接证据；病理组织诊断的准确性与病灶部本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测深部感染曲霉菌的方法，其特征在于：将待测样本与核酸直裂提取液混合后于60～65℃加热8～20min，再于93～98℃加热5～10min，获得待测样本的DNA提取液，将所述DNA提取液加入含有深部感染曲霉菌的组合物的PCR预混液中，制得PCR反应液，将所述PCR反应液进行以下PCR扩增反应：控制温度在90～100℃时，进行变性，停留时间为0～5s，控制温度在50～70℃时，进行退火延伸，停留时间为0～5s，循环35～50次，所述核酸直裂提取液包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、十二烷基磺酸钠以及蛋白酶；所述PCR预混液还包括脱氧核糖核苷三磷酸、DNA聚合酶、扩增缓冲液以及PCR增强剂中的至少一种；所述深部感染曲霉菌的组合物包括以下组分：如SEQ ID NO:1所示的黄曲霉上游引物、如SEQ ID NO:2所示的黄曲霉下游引物，和如SEQ ID NO:3所示的黄曲霉探针；如SEQ ID NO:4所示的黑曲霉上游引物、如SEQ ID NO:5所示的黑曲霉下游引物，和如SEQ ID NO:6所示的黑曲霉探针；以及如SEQ ID NO:7所示的烟曲霉上游引物、如SEQ ID NO:8所示的烟曲霉下游引物，和如SEQ ID NO:9所示的烟曲霉探针。2.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷成刚，张俊彦，崔岚，
申请(专利权)人：四川省三物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：