CRISPRa和化学诱导联合制备胰岛素分泌细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种诱导间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，所述的方法包括导入载体组合物以激活NeuroD1基因表达，并经过化学诱导，联合诱导获得胰岛素分泌细胞。该方法获得的胰岛素分泌细胞胰岛素的分泌量明显高。获得的胰岛素分泌细胞胰岛素的分泌量明显高。

【技术实现步骤摘要】
CRISPRa和化学诱导联合制备胰岛素分泌细胞的方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及采用CRISPRa和化学诱导联合制备胰岛素分泌细胞的方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种人体糖代谢失调的代谢性疾病，根本原因是胰岛素分泌的相对或绝对不足。胰岛素分泌细胞移植成为了弥补胰腺和胰岛器官不足的替代性疗法，已经广泛应用于临床前和临床研究，治疗效果也非常理想。因此，研究者专利技术了多种胰岛素分泌细胞的制备方法。在细胞来源上，各诱导方案涉及了胚胎干细胞、诱导多能干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞和脐带间充质干细胞等。
[0003]而胰岛素分泌细胞的诱导方法则可以归为两类，一是化学诱导法，即用化学试剂诱导干细胞分化为胰岛素分泌细胞，该方法虽然已经被众多研究者完善和优化，但诱导程序仍然相对复杂，而且诱导效率也相对较低；二是遗传诱导法，即将调控胰岛素分泌细胞分化的相关基因直接输入到干细胞中，在有化学诱导或无化学诱导的情况下，诱导细胞分化。该方法虽然能够简化诱导程序，并提高细胞分化效率，缺点则是输入的基因一般只是基因转录本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，其特征在于，所述的方法包括导入载体组合物，以激活NeuroD1基因表达，诱导获得胰岛素分泌细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的载体组合物包含：A)表达一个或多个sgRNA和MS2结合位点的载体，或一个或多个表达sgRNA和MS2结合位点的载体；B)表达融合蛋白MS2
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P65
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HSF1的载体；以及，C)表达dCas9蛋白的载体；优选的，所述的载体为病毒载体。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的sgRNA的靶位点序列包含SEQ ID NO：25、26、27或28中的任一种或两种以上的组合。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，编码sgRNA的双链DNA序列选自下列任一组或两种以上的组合：A)SEQ ID NO：1、2；B)SEQ ID NO：3、4；C)SEQ ID NO：5、6；D)SEQ ID NO：7、8。5.根据权利要求1
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4任一所述的方法，其特征在于，所述的间充质干细胞来源于人或非人动物的脐带、骨髓、脐血或脂肪。6.根据权利要求1
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5任一所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括培养导入载体组合物的间充质干细胞，所述培养使用的培养基中加入胎牛血清、表皮生长因子、B27、烟酰胺、betacalulin、胰高糖素样肽
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1或β
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巯基乙醇中的一种或两种以上的组合；优选的，所述的培养基为DMEM培养基。7.根据权利要求1
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6任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘俊，王旭，林文龙，桂智，
申请(专利权)人：深圳市沃英达生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：