一种基于HPLC-QQQ-MS的灰毡毛忍冬多种皂苷类成分快速测定方法技术

本发明专利技术属于分析检测技术领域，尤其涉及一种基于HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种基于HPLC
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MS的灰毡毛忍冬多种皂苷类成分快速测定方法


[0001]本专利技术属于分析检测
，尤其涉及一种基于HPLC
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MS的灰毡毛忍冬多种皂苷类成分快速测定方法。

技术介绍

[0002]灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand.
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Mazz.)为忍冬科忍冬属植物，具有清热解毒、抗菌消炎的功效，在中医临床及民间广泛应用于痈肿庁疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温热发病等疾病治疗。2010版《中国药典》将其与黄褐毛忍冬(L.fulvotomentosa Hsu et S.C.Cheng)、华南忍冬(L.confuse DC.)、红腺忍冬(L.hypoglauca Miq.)同时归属于山银花中。灰毡毛忍冬的有效活性成分主要包括皂苷类、环烯醚萜苷、黄酮类、有机酸类等，其中皂苷类成分因其良好的保肝、抗氧化、免疫调节、抗炎和抗肿瘤等药理活性，近年来受到广泛关注。
[0003]随着近年来天然化合物分离及结构鉴定技术水平迅速提升，在灰毡毛忍冬中有越来越多的皂苷类成分被相继发现，目前针对灰毡毛忍冬中皂苷类成分的定量研究多利用液相或高效液相色谱，该方法仅能对灰毡毛忍冬中含量较高的成分进行定量研究，不适合微量成分的定量研究；多数研究仅利用HPLC技术对灰毡毛忍冬中皂苷类成分进行定性研究，对于液质定量灰毡毛忍冬皂苷成分的文献及专利技术鲜有报道。

技术实现思路

[0004]鉴于上述问题，本专利技术对灰毡毛忍冬中皂苷类成分进行研究，以便于灰毡毛忍冬质量的控制及相关标准的制定。
[0005]本专利技术所述的一种基于HPLC
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MS的灰毡毛忍冬多种皂苷类成分快速测定方法，包括以下步骤：
[0006](1)供试品溶液的制备
[0007]将灰毡毛忍冬花蕾粉碎后过筛，取药材粉末1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液100ml，称定重量，超声处理后冷却至室温，用甲醇补足失重，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液即得供试品溶液；
[0008](2)对照品溶液的制备
[0009]取20种灰毡毛忍冬皂苷类成分对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并配置为混合对照品溶液，
‑
20℃保存备用；
[0010](3)色谱条件
[0011]色谱柱为Hola C18色谱柱，100mm*2.1mm，2.7μm，流动相为0.08％甲酸水溶液
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乙腈，梯度洗脱，进样量为2μl，柱温为25
±
0.8℃；
[0012](4)质谱条件
[0013]电喷雾电离离子源在负离子模式下扫描，辅助气温度为350℃，流速为8L
·
min
‑1，
压力为35psig，喷雾电压为3000V，检测模式：MRM
‑
；
[0014](5)色谱峰测定
[0015]将上述步骤(1)和(2)所制得的供试品溶液和混合对照品溶液，按照上述步骤(3)的色谱条件和步骤(4)的质谱条件，测定供试品溶液，得到色谱峰，即得。
[0016]步骤(1)中，超声处理80min，功率为300w，频率为40kHz，温度为30℃。
[0017]所述的梯度洗脱为：0～5min，20％B；5～8min，20～35％B；8～30min，35～50％B；30～31min，50～90％B；31～35min，90％。
[0018]表1灰毡毛忍冬20种皂苷类成分信息
[0019][0020][0021]本专利技术采用了HPLC
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MS技术，将灰毡毛忍冬中20种皂苷类成分同时分离分开，并进行含量测定，达到了快速高效定性定量分析。
附图说明
[0022]图1为化学成分1
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8在MRM
‑
检测模式下的色谱图；
[0023]图2为化学成分9
‑
20在MRM
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检测模式下的色谱图。
具体实施方式
[0024]实施例1仪器与药品以及试剂
[0025]1.1仪器
[0026]仪器参数
[0027][0028]1.2药品与试剂
[0029]采用灰毡毛忍冬为供试材料，灰毡毛忍冬采自重庆市秀山县。由山东中医药大学中药资源教研室张永清教授鉴定为忍冬科忍冬属植物灰毡毛忍冬的干燥花蕾。标本存放于山东中医药大学中药资源与质量控制实验室。
[0030]甲醇、乙腈(色谱级，瑞典Oceanpak公司)；
[0031]甲酸(色谱级，美国Merk公司)；
[0032]水为娃哈哈纯净水；
[0033]其他试剂均为分析级。
[0034]实施例2一种基于HPLC
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MS的灰毡毛忍冬多种皂苷类成分快速测定方法
[0035]一种基于HPLC
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MS的灰毡毛忍冬多种皂苷类成分快速测定方法，包括以下步骤：
[0036](1)样品的提取
[0037]将灰毡毛忍冬花蕾粉碎后过筛，取药材粉末1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液100ml，称定重量，超声处理后冷却至室温，用甲醇补足失重，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液即得。
[0038](2)对照品溶液
[0039]取20种灰毡毛忍冬皂苷类成分对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并配置为混合对照品溶液，各成分含量见表1，
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20℃保存备用；
[0040](3)色谱条件及质谱条件
[0041]色谱柱为Hola C18色谱柱，100mm*2.1mm，2.7μm，流动相为0.08％甲酸水溶液(A)
‑
乙腈(B)，梯度洗脱，进样量为2μl，柱温为25
±
0.8℃；
[0042](4)质谱条件
[0043]电喷雾电离离子源(ESI)在负离子模式下扫描，辅助气温度为350℃，流速为8L
·
min
‑1，压力为35psig，喷雾电压为3000V，检测模式：MRM
‑
。
[0044](5)色谱峰测定：将上述步骤(1)和(2)所制得的供试品溶液和混合对照品溶液，按照上述步骤(3)的色谱条件和步骤(4)的质谱条件，测定供试品溶液，得到色谱峰，即得。
[0045]步骤(1)中，超声处理80min，功率为300w，频率为40kHz，温度为30℃。
[0046]所述的梯度洗脱为：0～5min，20％B；5～8min，20～35％B；8～30min，35～50％B；30～31min，50～90％B；31～35min，90％。
[0047]实施例3方法学考察...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于HPLC
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MS的灰毡毛忍冬多种皂苷类成分快速测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备将灰毡毛忍冬花蕾粉碎后过筛，取药材粉末1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液100ml，称定重量，超声处理后冷却至室温，用甲醇补足失重，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备取20种灰毡毛忍冬皂苷类成分对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并配置为混合对照品溶液，
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20℃保存备用；(3)色谱条件色谱柱为Hola C18色谱柱，100mm*2.1mm，2.7μm，流动相为0.08％甲酸水溶液
‑
乙腈，梯度洗脱，进样量为2μl，柱温为25
±
0.8℃；(4)质谱条件电喷雾电离离子源在负离子模式下扫描，辅助气温度为350℃，流速为8L
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【专利技术属性】
技术研发人员：方忠莹，张永清，刘玉红，方磊，刘谦，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：