基于重组酶聚合酶等温扩增技术对食品中沙门氏菌快速检测的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于重组酶聚合酶等温扩增技术对食品中沙门氏菌快速检测的方法，属于微生物检测技术领域。该方法相较于传统荧光定量PCR法测定沙门氏菌的优点在于：采用重组酶聚合酶等温扩增技术，缩短检测时间；灵敏度更高，能够检出10CUF的沙门氏菌。发明专利技术包括有一对引物、一条探针及一种DNA提取液。通过DNA提取液提取沙门氏菌基因组DNA，然后通过实时荧光定量检测判断反应结果是否为阳性，确定待测样本中是否存在沙门氏菌。该方法在40℃恒温条件下40min内完成检测。本发明专利技术检测方法操作简单、特异性强、快速灵敏，从而弥补现有传统检测技术的不足，为沙门氏菌的检测提供了有效的技术手段。术手段。术手段。

【技术实现步骤摘要】
基于重组酶聚合酶等温扩增技术对食品中沙门氏菌快速检测的方法


[0001]本专利技术涉及微生物检测
，具体涉及一种基于重组酶聚合酶等温扩增技术对食品中沙门氏菌快速检测的方法。

技术介绍

[0002]沙门氏菌(salmonella)是自然界中一种普遍存在，且耐寒的细菌，广泛分布于家养和野生动物中，多见于食用动物(如禽类、猪、牛)。可以通过整个食物链传播(动物饲料、初级生产、家庭或餐饮服务机构)，蛋、家禽和肉类产品是沙门氏菌病的主要传播媒介。据不完全统计，每年约有1000人死于急性沙门氏菌感染。据我国卫生委员会(Chinese Health Annual edition Committee)统计，细菌是导致我国食源性疾病暴发的常见的主要致病因素，约占总暴发的42.75％，而由沙门氏菌引起的食源性疾病占据细菌性食源性疾病的首位。
[0003]食源性疾病，作为重要的公共健康问题，一直以来都是关注的焦点问题，为了人们的身体健康，对食品中的沙门氏菌进行检测势在必行。长期以来，沙门氏菌检验基本按国家标准GB
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于RPA检测沙门氏菌的引物
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探针组合，其特征在于，包括：上游引物32F、下游引物33R和探针Probe1；所述上游引物32F和下游引物33R的序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所；所述探针Probe1的序列如SEQ ID NO.4所示；所述探针Probe1为exo探针，探针Probe1的修饰如下：(1)探针的第29位胸腺嘧啶脱氧核糖核酸修饰有荧光报告基团FAM；(2)探针的第31位碱基处修饰有[THF]；(3)探针的第34位胸腺嘧啶脱氧核糖核酸修饰有荧光淬灭基团BHQ1；(4)探针的3
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端修饰有磷酸化基团。2.权利要求1所述的引物
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探针组合在如下(1)或(2)中的应用：(1)检测食品中的沙门氏菌；(2)制备检测沙门氏菌的试剂盒。3.一种检测沙门氏菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的引物
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探针组合。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括：复溶缓冲液、超纯水和醋酸镁。5.一种利用权利要求3或4所述的试剂盒检测沙门氏菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：提取待测样品的基因组DNA，以基因组DNA作为作为模板，构建RPA检测体系，进行扩增反应，收集荧光信号，根据荧光扩增曲线分析待测样本中是否含有沙门氏菌。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述RPA检测体系为25μL，包括：复溶缓冲液13.75μL，上游引物32F、下游引物33R各1.05μL，探针Probe1：0.3...

【专利技术属性】
技术研发人员：高玉舟，乔善鹏，刘珍妮，李海超，
申请(专利权)人：长春国科医工科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：