一种侵染假龙头花的花椰菜花叶病毒属新病毒1的检测引物组及PCR检测方法技术

本发明专利技术公开了一种侵染假龙头花的花椰菜花叶病毒属新病毒1的检测引物组及PCR检测方法。根据侵染假龙头花的花椰菜花叶病毒属新病毒1的外壳蛋白基因和移动蛋白基因的核苷酸序列设计了2对用以检测此病毒的特异性引物，并利用设计的特异性引物对建立检测该病毒的PCR方法。本发明专利技术的花椰菜花叶病毒属新病毒1的检测引物对及PCR检测方法为植物中该病毒的检测提供一种快速、灵敏、特异、准确、高效、成本低的分子检测方法，从而为该病毒病的诊断和防控提供检测方法。供检测方法。供检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种侵染假龙头花的花椰菜花叶病毒属新病毒1的检测引物组及PCR检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
的一种植物病毒检测方法，具体涉及一种侵染假龙头花的花椰菜花叶病毒属新病毒1的检测引物组及PCR检测方法。

技术介绍

[0002]当前植物病毒病尚无有效的防治化学药剂，种植无毒种子种苗和抗病品种及阻止病毒传播是植物病毒病防控的主要手段。像目前流行的新冠病毒检测技术的重要性一样，植物病毒有效检测技术是上述防控手段建立的关键。因此，建立有效的病毒检测技术是植物病毒病科学防控的前提条件，对包括作物、花卉和树木等在内的植物的健康生长具有重要意义。目前植物病毒的常见鉴定技术主要包括生物学检测、电子显微镜观察、血清学检测和分子生物学检测等技术，但生物学检测、电子显微镜观察和血清学检测技术在应用中存在较多局限性和缺点，如生物学检测技术耗费时间长、受环境影响大，电子显微镜检测技术因需要昂贵的设备和专业的技术人员而不能广泛应用，血清学技术依赖于抗体的质量，检测灵敏度不高，检测结果假阴性率较高等。病毒的分子生物学检测技术主要包括RT/>‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种侵染假龙头花的花椰菜花叶病毒属新病毒1的检测引物组，其特征在于：所述引物组包括用于扩增花椰菜花叶病毒属新病毒1的衣壳蛋白基因和移动蛋白基因的引物对中至少一对；所述用于扩增花椰菜花叶病毒属新病毒1的衣壳蛋白基因片段的正向引物CP
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F的序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物CP
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R的序列如SEQ ID NO.2所示；所述用于扩增花椰菜花叶病毒属新病毒1的移动蛋白基因片段的正向引物MP
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F的序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物MP
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R的序列如SEQ ID NO.4所示。2.如权利要求1中所述的一种侵染假龙头花的花椰菜花叶病毒属新病毒1的检测引物组，其特征在于：所述的用于扩增花椰菜花叶病毒属新病毒1的衣壳蛋白基因片段的引物对能扩增出506bp的衣壳蛋白基因片段，序列如SEQ ID NO.5所示。3.如权利要求1中所述的一种侵染假龙头花的花椰菜花叶病毒属新病毒1的检测引物组，其特征在于：所述的用于扩增花椰菜花叶病毒属新病毒1的移动蛋白基因片段的引物对能扩增出517bp的MP基因片段，序列如SEQ ID NO.6所示。4.如权利要求1所述的侵染假龙头花的花椰菜花叶病毒属新病毒1的检测引物组，其特征在于：所述花椰菜花叶病毒属新病毒1的基因组是一条非共价闭合环状dsDNA，全长7765bp，序列如SEQ ID NO.7所示。5.一种侵染假龙头花的花椰菜花叶病毒属新病毒1的PCR检测方法，其特征在于：根据花椰菜花叶病毒属新病毒1的外壳蛋白基因和移动蛋白基因的核苷酸序列设计合成如权利要求1～4任一所述的引物组，然后利用外壳蛋白或移动基因片段引物对对植物中的花椰菜花叶病毒属新病毒1病毒基因组序列进行PCR扩增，最后将反应产物进行1％琼脂糖凝胶电泳分析，明确植物样品中是否存在所述花椰菜花叶病毒属新病毒1。6.如权利要求5所述的PCR检测方法，其特征在于：所述PCR检测方法的反应体系、反应参数和反应程序如下：步骤(1)：按照子步骤1.1)～1.8)，利用试剂盒提取植物DNA：1.1)取约100mg新鲜植物组织，加入液氮充分研磨成样品粉末，将样品粉末转移至1.5ml离心管中；1.2)向1.1)中得到的样品粉末中立即加入400μl裂解液和4μl 10mg/ml的RNase A，涡旋振荡，充分混匀帮助裂解；1.3)去除蛋白杂质：向1.2)得到的样品中加入130μl Buffer A2，冰上5min，14000rpm离心5
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10min，取...

【专利技术属性】
技术研发人员：董金希，吴建祥，傅帅，周瀛，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：