一种从人诱导性多能干细胞分化的心肌细胞球及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种从悬浮培养条件下的人诱导性多能干细胞分化的心肌细胞球的制备方法，该制备方法能够在悬浮培养条件下高效地利用人诱导性多能干细胞分化获得纯度好、活率高、功能完善的心肌细胞球，且避免了使用2D培养和分化方式，所用到的培养体系不含动物源成份，无需滋养层细胞，易于实现工艺稳定、进行生产工艺放大和工业化生产心肌细胞球和心肌细胞以满足药物研发、心脏相关疾病临床研究和治疗需求。本发明专利技术还提供了一种从人诱导性多能干细胞分化的心肌细胞球及其应用。细胞分化的心肌细胞球及其应用。细胞分化的心肌细胞球及其应用。

【技术实现步骤摘要】
一种从人诱导性多能干细胞分化的心肌细胞球及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及细胞生物学领域，特别涉及一种从人诱导性多能干细胞分化的心肌细胞球及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]心肌疾病是现代社会发病率和致死率最高的重大疾病之一。据了解，心肌细胞是分化程度极高的终末细胞，成年人的心肌细胞几乎不具备分裂增殖的能力。在发生诸如急性心肌梗死、代谢障碍、病毒性心肌炎等多种造成心脏损伤的疾病后，会导致数以万计的心肌细胞的不可逆的死亡，引起心脏结构重塑和心功能的下降，至今仍缺少有效的治疗方式。目前，用正常的心肌细胞移植替换已经坏死的细胞是从根本上治疗这类心脏病的方法之一，但是，心肌细胞来源的不足大大限制了心肌细胞临床应用的发展。
[0003]人诱导性多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSC)是通过体细胞重编程得到类似胚胎干细胞特性的一种细胞。研究表明，hiPSC具有分化成各类功能细胞的能力，有望解决心肌细胞用于治疗疾病过程中的细胞资源短缺的问题。现已报道的利用干细胞分化心肌细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从人诱导性多能干细胞分化的心肌细胞球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提供人诱导性多能干细胞单细胞悬液，接种于培养皿、培养瓶或者反应器中培养48小时，形成聚集体；(2)替换并使用第一分化培养基培养20
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24小时，以诱导细胞分化；其中，所述第一分化培养基为包含7
‑
8μM CHIR99021的CDM3基础培养基；(3)弃去所述第一分化培养基，添加第二分化培养基培养48
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56小时，所述第二分化培养基为包含4
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6μM Wnt
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C59的CDM3基础培养基；(4)弃去所述第二分化培养基，换成CDM3基础培养基培养至第8
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10天，且每隔48小时换液；(5)弃去步骤(4)所述CDM3基础培养基，添加纯化培养基培养至第14天，每隔48小时换液；(6)弃去所述纯化培养基，换成CDM3基础培养基培养，且每隔48小时换液，培养到第18
‑
20天时，收集得到成熟的心肌细胞球。2.如权利要求1所述的从人诱导性多能干细胞分化的心肌细胞球的制备方法，其特征在于，所述CDM3基础培养为含0.2
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0.25g/L L
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抗坏血酸、0.4
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0.6g/L重组人白蛋白和4
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5g/L D
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葡萄糖的RPMI
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1640培养基。3.如权利要求2所述的从人诱导性多能干细胞分化的心肌细胞球的制备方法，其特征在于，所述纯化培养基为含0.2
‑
0.25g/L L
‑
抗坏血酸、0.4
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0.6g/L重组人白蛋白和3.5
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4.5mM L
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乳酸的RPMI
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1640培养基。4.如权利要求1所述的从人诱导...

【专利技术属性】
技术研发人员：李治寰，刘冬羽，李锦灵，
申请(专利权)人：深圳市寰宇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：