异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用，属于生物技术领域。本发明专利技术公开的异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用，在鼻咽癌细胞中，ISO通过激活ERK/MAPK途径引起内质网损伤扩张和细胞线粒体功能紊乱，进而促进胞质空泡化的形成和钙离子浓度的上升及细胞内活性氧的升高，从而诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡，最终在鼻咽癌细胞中发挥抗肿瘤作用。咽癌细胞中发挥抗肿瘤作用。咽癌细胞中发挥抗肿瘤作用。

【技术实现步骤摘要】
异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，更具体的说是涉及异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用。

技术介绍

[0002]异鼠李素(Isorhamnetin，ISO)即3，5，7
‑
三羟基
‑2‑
(4
‑
羟基
‑3‑
甲氧基苯基)苯并吡喃
‑4‑
酮，也称为3
′‑
O
‑
甲基槲皮素，其化学式为C
16
H
12
O7，是一种重要的黄酮类化合物，广泛存在于包括沙棘、旱柳、银杏等在内的多种植物中。研究表明，异鼠李素具有抗炎、抗氧化、抗病毒、扩张血管降血压等功效，目前已被广泛地用于心血管、风湿病及出血等疾病的临床治疗。
[0003]鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)是一种发生于鼻咽上皮的恶行肿瘤，其发病率位于耳鼻喉恶性肿瘤之首。目前，鼻咽癌的治疗主要采用放射治疗及化学治疗结合冶疗，虽然在临床中取得了一定的疗效，但由于放化疗的各种副作用使得治疗后五年生存率始终较低，严重影响生活质量。随着研究的进展，人们发现天然生物活性药物在治疗鼻咽癌方面展现了较高的应用前景，其中包括黄芩素、姜黄素、槲皮素等。基于此，寻找高效低毒的抗肿瘤药物，特别是从中药中筛选出的具有抗肿瘤活性的天然产物，是实现鼻咽癌防治的有效措施和方向，具有重要的现实意义。
[0004]2000年，Sperandio等发现胰岛素样生长因子1受体(Insulin
‑
like growth factor I receptor,IGF1R)的过表达使293T细胞和小鼠胚胎成纤维细胞胞质产生了大量空泡从而促使细胞死亡，从形态学上观察，IGFIR过表达导致细胞内液泡变圆，却没有凋亡小体、染色质凝集、细胞核碎裂等形态，进一步用凋亡抑制剂处理发现，这种死亡不受Caspase抑制剂的影响。2009年，细胞死亡命名委员会对细胞死亡重新进行了定义和分类，副凋亡正式被确定为一种非典型细胞死亡。尽管许多药物的抗肿瘤作用均显示与副凋亡相关，但其潜在分子机制仍不明确，值得深入探讨。同时，由于肿瘤细胞很容易对凋亡诱导剂产生抗性，因此，诱导肿瘤细胞不依赖半胱天冬酶的副凋亡死亡的新机制目前正在成为一个潜在的方向。
[0005]因此，提供异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用。
[0009]进一步，所述异鼠李素通过ERK/MAPK信号通路诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡。
[0010]进一步，异鼠李素在制备抗鼻咽癌药物中的应用。
[0011]进一步，异鼠李素在制备抑制鼻咽癌细胞体内成瘤药物中的应用。
[0012]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用，ISO不仅可以抑制鼻咽癌细胞的生长增殖，而且能引起细胞出现空泡化，同时还造成细胞内质网的损伤扩张和钙离子水平的上调。此外，ISO还可以降低细胞线粒体膜电位并促进鼻咽癌细胞内活性氧的生成。ISO在鼻咽癌细胞中诱导的空泡化，可被CHX明显抑制，并引起副凋亡标志蛋白Alix表达下降，内质网应激标志蛋白CHOP的表达上调，表明ISO主要通过诱导鼻咽癌细胞副凋亡促进细胞死亡。Western blot实验结果显示，ISO可通过促进p
‑
ERK蛋白表达激活MAPK信号通路。进一步的功能恢复实验发现ERK抑制剂(U0126)不仅抑制ISO引起的胞质空泡化，而且减少了ISO诱导的细胞死亡。动物实验结果表明，瘤内注射ISO可有效抑制CNE
‑
2细胞在裸小鼠的体内成瘤能力。
附图说明
[0013]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0014]图1附图为本专利技术ISO对正常鼻咽上皮及鼻咽癌细胞细胞活性的影响；
[0015]其中，A：正常鼻咽上皮细胞株NP69；B：鼻咽癌CNE
‑
2细胞株；C：鼻咽癌5
‑
8F细胞株；
[0016]图2附图为本专利技术ISO对鼻咽癌细胞平板克隆形成的影响；
[0017]其中，A：ISO处理鼻咽癌细胞平板克隆形成结果图；B：各浓度组与DMSO处理组克隆形成数统计比较分析结果；
[0018]图3附图为本专利技术ISO处理鼻咽癌细胞形态变化(8000
×
)；
[0019]图4附图为本专利技术ISO处理鼻咽癌细胞后内质网和线粒体形态变化(400
×
)；
[0020]图5附图为本专利技术ISO对鼻咽癌细胞钙离子的影响；
[0021]其中，A：ISO处理CNE
‑
2细胞后钙离子水平变化；B：ISO处理5
‑
8F细胞后钙离子水平变化；
[0022]图6附图为本专利技术ISO对鼻咽癌细胞线粒体膜电位的影响；
[0023]其中，A：JC
‑
1检测线粒体膜电位结果图；B：ISO处理CNE
‑
2和5
‑
8F细胞后线粒体膜电位统计比较分析结果；
[0024]图7附图为本专利技术ISO对鼻咽癌细胞活性氧的影响；
[0025]其中，ISO处理鼻咽癌细胞后ROS水平；B：ISO处理CNE
‑
2和5
‑
8F细胞后ROS统计比较分析结果；
[0026]图8附图为本专利技术ISO联合CHX处理鼻咽癌细胞细胞形态变化(400
×
)，比例尺为25μm；
[0027]图9附图为本专利技术Westernblot检测ISO对鼻咽癌细胞相关蛋白表达的影响；
[0028]其中，A：Western blot检测ISO对鼻咽癌细胞相关蛋白表达影响的直观图；B：Westernblot检测ISO对鼻咽癌CNE
‑
2和5
‑
8F细胞相关蛋白表达影响的灰度分析；
[0029]图10附图为本专利技术ISO与鼻咽癌细胞凋亡、自噬和坏死的关系；
[0030]其中，A：ISO联合3
‑
MA处理鼻咽癌细胞活性的检测；B：ISO联合Nec
‑
1处理鼻咽癌细
胞活性的检测；C：ISO联合Z
‑
VAD处理鼻咽癌细胞活性的检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用。2.根据权利要求1所述的异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用，其特征在于，所述异鼠李素通...

【专利技术属性】
技术研发人员：李祥勇，罗海清，任静，王艳，张全颖，陈燃，唐旭东，官成浓，
申请(专利权)人：广东医科大学，
类型：发明
国别省市：