【技术实现步骤摘要】
一种基于免疫磁珠
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适配体禽流感病毒H5N1 SERS检测方法
[0001]本专利技术涉及病原微生物检测
，具体为一种基于免疫磁珠
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适配体禽流感病毒H5N1 SERS检测方法。
技术介绍
[0002]自H5N1亚型禽流感病毒爆发以来，全国乃至全球养殖业深受影响，尤其我国作为禽类养殖大国，H5N1亚型禽流感病毒不仅给禽类养殖造成巨大的经济损失，更为严重的是对人类存在高致病性，它能使禽类的死亡率高达100％，人类则达到60％以上。随着候鸟的迁徙和人类的大规模活动，全球已有六十多个国家发现H5N1亚型禽流感病毒。常用的病毒检测或量化方法可细分为病毒培养、血清学检测、基于核酸的检测方法和基于生物传感器的护理点检测系统。目前，检测H5N1流感病毒的实验室金标准是病毒培养和逆转录聚合酶链式反应。但这些方法却都存在耗时过长、操作复杂、不能达到现场快速诊断的目的，迫切需要一种新型简便、快速、灵敏性较高的病毒检测方法。然而，现有的利用拉曼光谱技术快速检测病毒的方法大多是利用抗原抗体相结合的原理和主成...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基于免疫磁珠
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适配体禽流感病毒H5N1 SERS检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、H5N1适配体捕获免疫磁珠的制备将Apt1适配体(10μL，1.847μg/μL)95℃变性15min，随后迅速放置冰上15min，在静置时，将链霉素亲和磁珠通过旋转20s重悬于原瓶中，取0.2mg链霉素亲和磁珠于离心管中，置于磁力架上静置1min，加入500μLPBS洗涤，重复洗涤3次，取折叠后的Apt1适配体室温孵育30min，磁分离后，未结合的游离适配体用PBS溶液洗涤3次，即可制成适配体捕获免疫磁珠。随后加入200μL H5N1病毒，待充分混匀后置于冰箱中4℃孵育1h，每隔20min重悬一次以保证磁珠始终处于悬浮状态，通过磁性分离，将未偶联的病毒洗脱，从而制备H5N1适配体捕获免疫磁珠。S2、免疫磁珠
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适配体夹心免疫复合物(IMBSIs)的制备在H5N1适配体捕获免疫磁珠的基础上，加入20μL折叠后的Apt2(20μL，1.847μg/μL)，待充分混匀后置于冰箱中4℃孵育30min，这此期间保证磁珠处于悬浮状态，随后，将H5N1适配体捕获免疫磁珠偶联上折叠后的Apt2，即可形成共轭的三明治IMBSIs，用移液器将IMBSIs在PBS溶液中进行清洗，并随后进行磁性分离。S3、IMBSIs@AgNPs的合成采用Shameli K方法通过NaBH4作还原剂对AgNO3还原合成AgNPs，通过在室温条件下调节二者的比例浓度与孵育时间合成最佳的AgNPs，取制备好的IMBSIs，分散到现配制的10mM 50μL AgNO3溶液中，充分混匀，避光4℃孵育10min，孵育期间令溶液始终处于悬浮状态，之后匀速加入50μL现配制的10mM NaBH4溶液，混匀反应1min，立即于...
【专利技术属性】
技术研发人员：王凯，李乾学，周博，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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