一种用于肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断的生物标志物及应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种用于肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断的生物标志物及应用，包括一种circRNA生物标志物在制备肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断的产品中的应用，所述circRNA生物标志物为circPRDM4，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述circPRDM4位于PRDM4基因的第6号至第8号外显子；所述circPRDM4能够招募HIF

【技术实现步骤摘要】
一种用于肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断的生物标志物及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种用于肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断的生物标志物及应用。

技术介绍

[0002]肝细胞癌是全世界范围内发病率排第六、癌症相关死亡率排第四的癌症。半数以上肝癌病人在确诊时即属于晚期，无法接受肝切除术或肝移植。免疫治疗能使肿瘤微环境的免疫反应正常化，极大地改变了肿瘤治疗的格局。肿瘤细胞的PD
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L1能与免疫细胞的PD
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1结合，促进肿瘤免疫逃逸。PD
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1/PD
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L1单抗能促进CD8+T细胞介导的免疫杀伤作用，在临床上具有广阔的应用前景。在晚期肝癌治疗中，PD
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1单抗在前期临床试验中显示出明显生存获益，但在III期临床试验中未达到试验终点。因此，理解PD
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1/PD
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L1失调的潜在机制对于提高肝癌免疫治疗疗效具有重要作用。
[0003]缺氧是肿瘤的常见特征。细胞对缺氧的适应性反应参与了肿瘤进展的多个方面，尤其是抗肿瘤免疫。缺氧在调控PD
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1/PD
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L1单抗疗效方面发挥了重要作用。在缺氧的肿瘤细胞中，HIF
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1α能够转录激活PD
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L1的编码基因CD274，能够导致肿瘤细胞避免被CD8+T细胞杀伤。缺氧导致HIF
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1α诱导的PD
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L1表达升高，并抑制T细胞活化。因此，研究缺氧条件下的抗肿瘤免疫能够协助研发肝癌免疫治疗新策略。
[0004]环状RNA是一类共价闭合环状结构的RNA，这类RNA缺乏5
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或3
’
端，能够抵抗RNA核酸外切酶的作用，是具有潜力的生物标志物和治疗靶标候选分子。环状RNA在多种生物学过程中发挥了调控功能。研究表明环状RNA失调在PD
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1/PD
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L1介导的抗癌免疫中发挥了重要作用。circIGF2BP3/PKP3轴通过PD
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L1去泛素化促进肺癌细胞免疫逃逸。circBART2.2通过结合RIG
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I促进PD
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L1转录，导致鼻咽癌免疫逃逸。circDLG1与miR
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141
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3p结合，上调CXCL12表达，促进胃癌对PD
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1单抗的治疗抵抗。但是，环状RNA在肝癌免疫逃逸中的作用仍不清楚。
[0005]本专利技术提供了一种缺氧相关环状RNAcircPRDM4，能够增强缺氧条件下的肝癌细胞免疫逃逸。机制上，circPRDM4能够招募HIF
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1α到CD274启动子区域，增加HIF
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1α介导的CD274转录激活。circPRDM4能够增加肿瘤细胞PD
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L1表达水平，抑制CD8+T细胞浸润，促进肝癌免疫逃逸。

技术实现思路

[0006]为解决环状RNA在肝癌免疫逃逸中的作用仍不清楚的技术问题，本专利技术提供一种用于肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断的生物标志物及应用。
[0007]本专利技术采用以下技术方案实现：一种circRNA生物标志物在制备肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断的产品中的应用，所述circRNA生物标志物为circPRDM4，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]进一步的，所述circPRDM4位于PRDM4基因的第6号至第8号外显子。
[0009]进一步的，所述circPRDM4能够招募HIF
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1α到CD274启动子区域，增加HIF
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1α介导的CD274转录激活。
[0010]进一步的，所述circPRDM4能够增加肿瘤细胞PD
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L1表达水平，抑制CD8+T细胞浸润，促进肝癌免疫逃逸。
[0011]一种circRNA生物标志物在制备肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断的生物制品，包含所述circPRDM4。
[0012]进一步的，所述生物制品包括：试剂、试剂盒、芯片。
[0013]一种用于检测circRNA生物标志物的引物对，包括：hsa_circ_0007468引物对，其中，hsa_circ_0007468引物对的上游引物如SEQ ID NO：2所示，hsa_circ_0007468引物对的下游引物如SEQ ID NO：3所示。
[0014]所述引物对在肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断中的应用。
[0015]一种肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断的方法，检测所述circRNA生物标志物的表达量。
[0016]进一步的，采用所述引物对进行检测。
[0017]相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：
[0018]本专利技术通过高通量测序构建缺氧相关的肝癌环状RNA谱，利用RT
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qPCR检测circPRDM4在肝癌缺氧微环境中的表达情况；缺氧相关环状RNAcircPRDM4可以发挥脚手架功能，促进HIF
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1α对PD
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L1的转录，从而促进肝癌细胞的免疫逃逸；circPRDM4有望作为肝癌免疫治疗的生物标记物及治疗策略，为靶向调控缺氧在肝癌免疫抑制性微环境中的作用提供了分子靶点。
附图说明
[0019]图1为肝细胞癌组织在1％氧气的缺氧处理后的差异表达环状RNA谱，其中：
[0020]图1A为肝癌细胞系HCCLM3在常氧和缺氧处理后进行环状RNA测序的热图。
[0021]图1B为对缺氧处理后差异程度靠前的5个环状RNA进行的PCR验证。
[0022]图1C为hsa_circ_0007468在缺氧下的7株肝癌细胞系中表达水平进行的PCR检测结果。
[0023]图1D为circP，RDM4(hsa_circ_0007468)的反向剪接位点示意图。
[0024]图1E为利用正向引物、反向引物分别从cDNA、gDNA扩增circPRDM4、GAPDH的结果图。
[0025]图1F为利用随机引物(随机序列组成的6mer脱氧核糖核酸混合物)、oligo dT引物检测circPRDM4、PRDM4mRNA的结果图。
[0026]图1G为RNaseR处理后的circPRDM4、PRDM4mRNA表达水平PCR检测结果图。
[0027]图1H为利用转录抑制剂actinomycinD处理MHCC97H细胞系后，不同时间节点的circPRDM4、PRDM4mRNA表达水平检测结果图。
[0028]图1I为利用转录抑制剂actinomycinD处理Hep3B细胞系后，不同时间节点的circPRDM4、PRDM4mRNA表达水平检测结果图。
[0029]图1J为肝癌细胞的荧光原位杂交实验图确定circPRDM4在细胞中的定位图。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种circRNA生物标志物在制备肝癌免疫治疗疗效预测和预后判断的产品中的应用，其特征在于，所述circRNA生物标志物为circPRDM4，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的circRNA生物标志物，其特征在于，所述circPRDM4位于PRDM4基因的第6号至第8号外显子。3.如权利要求1所述的circRNA生物标志物，其特征在于，所述circPRDM4能够招募HIF
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1α到CD274启动子区域，增加HIF
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1α介导的CD274转录激活。4.如权利要求1所述的circRNA生物标志物，其特征在于，所述circPRDM4能够增加肿瘤细胞PD
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L1表达水平，抑制CD8+T细胞浸润，促进肝癌免疫逃逸。5.一种circRNA生物标志物在制备肝癌免疫治疗疗效...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志强，左学良，蔡娟，
申请(专利权)人：江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：