一种PRV含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种猪伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)含量的检测方法，即免疫印迹法(Western Blot，WB)，通过制备的PRV标准品和PRV待测品；用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS

【技术实现步骤摘要】
一种PRV含量的检测方法


[0001]本专利技术涉及病毒含量检测
，特别涉及一种PRV含量的检测方法。

技术介绍

[0002]猪伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由猪伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的一种猪的急性传染病，PRV属于疱疹病毒科，α疱疹病毒亚科，猪疱疹病毒属，线性DNA病毒，电镜显示该病毒呈圆形或椭圆形，直径为150nm～180nm，囊膜表面有长约8nm～10nm呈放射状排列的纤突，从外到内由脂质双层膜形成的囊膜、20面体核衣壳和核心构成。囊膜上有免疫后能产生保护性中和抗体的结构蛋白，也有PRV感染宿主细胞过程中发挥作用的蛋白。目前研究发现：g C、g E、g I、g G、g M和g N基因编码的是病毒复制中的非必须蛋白，与病毒的毒力的有关，它们的缺失不影响病毒在体外的复制；g E基因与病毒在细胞间传播和PRV增殖后释放有关，甚至可促进PRV对中枢神经系统中的侵入和扩散。另外发现g B、g D、g H、g K、g L是病毒增殖必需糖蛋白。
[0003]PRV感染后可引起仔猪呕吐、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PRV含量的检测方法，其特征在于，所述PRV含量的检测方法采用免疫印迹法，所述PRV含量的检测方法包括以下步骤：S1、对PRV标准品、PRV待测品分别用稀释液进行稀释，对应得稀释后的PRV标准品和稀释后的PRV待测品；S2、将稀释后的PRV标准品、稀释后的PRV待测品分别进行预处理，再进行SDS
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PAGE电泳分离后，转移到PVDF膜上；S3、封闭PVDF膜，用PRV的特异性单克隆抗体进行孵育和洗膜后，再用HRP标记抗体进行孵育和洗膜，获得二抗洗膜后的PVDF膜；S4、将所述二抗洗膜后的PVDF膜进行显色反应，得到PRV标准品的灰度值和PRV待测品的灰度值，根据PRV标准品病毒含量与对应的灰度值建立标准曲线，再根据所述标准曲线和PRV待测品的灰度值计算出所述PRV待测品中的PRV含量。2.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，步骤S1中：所述稀释液为0.01mol/L PBS。3.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，步骤S1中：所述PRV标准品在16～128倍稀释时，WB定量能形成良好线性范围，稀释后的所述PRV标准品的病毒含量在7.81
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10
5.0
～6.25
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TCID
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/ml。4.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，在步骤S2包括：将稀释后的PRV标准品、稀释后的PRV待测品分别添加loading buffer，经过离心、沸水浴、电泳分离后，再转移到PVDF膜上。5.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张飞雁，秦涛，秦红刚，徐芳，李文静，朱薇，李晶梅，邓永欢，何珊，郑佳，郑良益，谢红玲，石宝兰，漆世华，
申请(专利权)人：国药集团动物保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：